胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中3种农药残留

基于胶体金免疫层析原理研制吡虫啉、丙溴磷及克百威快速检测试纸条,评价其在大蒜、白菜检测中的应用效果。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金颗粒标记吡虫啉、丙溴磷及克百威单克隆抗体作为检测探针,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被吡虫啉-BSA、丙溴磷-BSA及克百威-BSA偶联物为检测线,羊抗鼠IgG抗体为质控线,制备胶体金免疫层析试纸条,并对金标抗体用量、标记抗体浓度、检测线包被浓度等参数条件进行优化,评价试纸条的灵敏度、特异性、稳定性和准确性。以大蒜、白菜为对象,优化了样品前处理方法,并对这2种蔬菜样品进行阴性检测及添加标准品农药检测。结果表明,优化后的工艺参数中吡虫啉、丙溴磷、克百威的最适标记抗体质量浓度分别为9.6、8.4、9.6μg/mL,抗原的包被质量浓度均是0.3 mg/mL,检测用时约15 min。吡虫啉、丙溴磷及克百威的检出限分别为20、3000、20 ng/mL,符合国标对2种蔬菜的限量规定。检测与吡虫啉、丙溴磷及克百威功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。克百威和吡虫啉农药的最适提取剂分别为4 mL乙酸乙酯和4 mL甲醇,样品用量均为2 g,上清液3 mL;丙溴磷农药的最适提取剂是9 mL乙酸乙酯,样品用量3 g,上清液8 mL,上清液用氮气吹干。50份蔬菜阴性样品和加标样品的检测结果显示,假阳性率为6%,假阴性率为0。可见,研制的试纸条适用于大蒜、白菜现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,可为大蒜、白菜中农药残留控制提供有效监管手段。

分散固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中双甲脒、杀虫脒及其代谢物

该研究建立了分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(dispersive solid phase extraction-ultra-performance liquid chromatography,UPLC-MS-MS)检测蜂蜜中双甲脒、杀虫脒及其代谢物残留的分析方法。蜂蜜样品2 g加入10 mL水溶液充分混匀,经1%(体积分数)氨化乙腈超声辅助提取后离心,利用N-丙基乙二胺、C18、氨基键合硅胶混合材料进行分散固相萃取净化,采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱分离,以甲醇和0.1%(体积分数)甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,多反应监测模式正离子扫描分析。6种农药及其代谢物平均回收率为84.1%~113.8%,相对标准偏差为0.9%~6.0%,检出限为0.2~0.8μg/kg,定量限为0.7~2.5μg/kg。实验结果表明该方法快速简便、灵敏度高,适用于蜂蜜中双甲脒、杀虫脒及其代谢物残留同时分析。

胶体金试纸快速检测肥料中禁限用杀虫剂的应用研究

当前最受关注的禁限用农药包括有机磷类、氨基甲酸酯类杀虫剂,毒死蜱和三唑磷是一种高效、广谱的有机磷杀虫剂,对人体神经系统有较大危害;克百威是广谱高毒的氨基甲酸脂类杀虫剂,其氧化应激作用可引起明显的细胞毒性。同时,氨基比林类的氟虫腈由于对环境不友好亦被禁用。肥料是食品上游产业链的重要一环,而禁限用杀虫剂由于“效果好、见效快、价格低”等特点,且与肥料施用途径相同,因此常作为隐性成分被经销商或农户混配至肥料中。

在普洱茶产地溯源中化学计量学工具的应用研究

目的基于不同产地茶叶中微量元素差异应用化学计量学工具构建云南不同产地普洱茶产地溯源模型。方法采用电感耦合等离子体质谱对两个主产区的普洱茶中21种微量元素和15种稀土元素进行检测,应用化学计量学工具对数据进行筛选、主成分分析和产地鉴别模型的构建,与常用Fisher判别方法(Fisher linear discriminant analysis,FLD)比较,对构建模型所采用的决策树算法C5.0(decision tree C5.0,C5.0)、树扩展朴素贝叶斯算法(tree augmented Bayes network,TAN)和反向传播人工神经网络算法(back-propagation artificial neural network,BP-ANN)3种算法进行了评价。结果 C5.0、TAN和BP-ANN 3种算法构建的模型均适用于不同地域普洱茶的产地溯源。利用构建的模型经过外部样品预测集验证,以决策树算法C5.0构建的普洱茶产地溯源模型判别率达83.33%。结论化学计量学工具构建的普洱茶产地溯源模型将为普洱茶溯源工作提供技术保障,从而促进普洱茶产业的健康发展。

QuEChERS-超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定野生食用菌中尼古丁

云南省拥有大量的野生食用菌资源,其中内源性的尼古丁近年来受到了广泛的关注。该研究以野生食用菌为研究对象,将QuEChERS方法进行改进,优化了提取溶剂、净化条件等,并针对尼古丁在超高效液相色谱不同流动相条件下的色谱行为进行优化,结合三重四极杆质谱仪,建立了测定野生食用菌中尼古丁的高效、快速、高灵敏的方法。结果表明,氨水-乙腈(6∶94, v/v)混合溶液能够较好地提取野生食用菌中的尼古丁,提取溶液经石墨化碳黑(GCB)和N-丙基乙二胺(PSA)混合填料净化后,利用0.1%(体积分数)氨水溶液和乙腈作为流动相,正离子多反应监测(MRM)模式下,得到的尼古丁色谱峰形较好,响应较高。尼古丁在0.05～50.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r^2)为0.999 9,定量限为0.2μg/kg,检出限为0.05μg/kg。3个加标浓度下的平均回收率为86.3%～96.4%,相对标准偏差为4.4%～6.3%。该方法的灵敏度和回收率均符合食用菌产业中尼古丁的快速测定要求。

基于多酚类物质差异性判别普洱生茶的贮藏年限

以茶叶中多酚类物质作为判别普洱茶贮藏年限的指标,开展贮藏年限研究。以18种代表性多酚类成分作为特征物质,通过高效液相色谱仪测定,结合主成分分析、聚类分析和偏最小二乘判别法研究不同贮藏年限普洱生茶中多酚类物质的变化特征。结果表明:随着贮藏时间的延长,普洱生茶中儿茶素类组分含量呈逐渐下降的趋势,茶黄素类组分含量呈逐渐上升的趋势,黄酮及黄酮苷类成分中部分组分呈下降趋势,而部分组分呈上升趋势。化学计量学分析表明:相同贮藏年限的普洱生茶样品可聚集在一起,而不同贮藏年限样品之间呈现分离结果。经偏最小二乘判别法分析,不同贮藏年限普洱生茶样品呈现明显的分离趋势。依据偏最小二乘法分析中变量(变量值>1)重要性分析结果,结合含量差异性分析结果,没食子酸、山奈酚、茶黄素-3-没食子酸酯、表没食子儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯7种多酚成分被视为特征性标志成分,可用于鉴别普洱生茶贮藏时间。

植物生长调节剂对番茄产量和品质的影响及膳食摄入风险评估

目的明确不同植物生长调节剂赤霉酸、2,4-滴和噻苯隆对番茄产量和品质的影响,掌握它们在番茄中的残留情况以及对不同人群的膳食摄入风险。方法在番茄花期施用植物生长调节剂赤霉酸、2,4滴和噻苯隆各1次,正常成熟期采摘,分析不同植物生长调节剂处理对番茄产量和品质的影响及残留情况,整合两年的番茄市场监测数据,利用农药残留专家联席会议农药急性膳食风险摄入量计算法和@risk定量风险评估软件,对番茄中3种植物生长调节剂残留在我国不同人群中的膳食摄入风险进行评估。结果 3种植物生长调节剂均可显著提高番茄的产量和品质(P<0.05),其中噻苯隆效果最显著,且产品中相应植物生长调节剂残留量较低,平均值0.0042~0.0058 mg/kg;3种植物生长调节剂在市场监测的300个样品中均有检出,总检出率9.33%,检出平均值0.034~0.069mg/kg;番茄中赤霉酸、 2,4-滴和噻苯隆残留的短期膳食摄入量在0.00104~0.00658mg/kgbw/d,仅占相应每日急性参考剂量的0.60%~7.24%,急性风险较低。结论在番茄花期施用赤霉酸、2,4-滴或噻苯隆可显著提高番茄的产量和品质,且产品中残留量低,番茄中3种植调剂残留在不同人群中的膳食摄入风险均很低,在可接受范围内。

普洱茶中黄酮类化合物含量的测定方法

为了解不同加工工艺和储存年限的普洱茶中黄酮类化合物的含量,建立了同时测定普洱茶中芦丁、金丝桃苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、芹菜素、山奈酚6种黄酮类化合物含量的高效液相色谱检测方法。样品经体积分数为80%甲醇水溶液涡旋超声提取、离心后,高效液相色谱法测定,采用Waters C18柱（4.6 mm×250.0 mm,5μm）,以乙腈-0.5%冰乙酸（18∶82,体积比）的溶液为初始流动相,梯度洗脱,流速1.2 ml/min,检测波长为354nm。结果显示,在最优的检测条件下,各目标化合物的加标回收率为76.26%~108.96%,相对标准偏差均不大于7.18%,6种黄酮类化合物的检出限为0.010~0.040 mg/kg,定量限为0.03~0.10 mg/kg。普洱茶实际样品分析结果表明：不同加工工艺和储存年限的普洱茶中6种黄酮类化合物含量有显著或极显著差异,6种黄酮类化合物含量可作为普洱茶加工工艺及储存年限判别的一个评价指标。

多菌灵和灭蝇胺在平菇及培养料中的残留及消解动态

目的研究多菌灵和灭蝇胺农药在平菇和培养料中的消解动态规律。方法在大棚中开展平菇及其培养料残留消解动态实验,采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)检测平菇和培养料中的农药残留量。结果在培养料中低浓度(1 g/kg)和高浓度(1.5 g/kg)的多菌灵消解半衰期分别为35.4 d和40.1 d,低浓度(0.25 g/kg)和高浓度(0.375 g/kg)灭蝇胺的消解半衰期分别22.5 d和24.2 d。平菇培养料的灭菌会显著减少其中多菌灵和灭蝇胺农药的残留量,低浓度和高浓度的灭蝇胺降解率分别为17.52%和8.04%,低浓度和高浓度的多菌灵降解率分别为43.17%和62.87%。平菇在含有灭蝇胺农药的培养料中栽培,同步采集的平菇子实体中均未检测到灭蝇胺的残留量;平菇在含有多菌灵农药的培养料中栽培,同步采集的平菇子实体中多菌灵的残留量在0.394 mg/kg以上。结论平菇培养料中灭蝇胺农药残留不会向平菇子实体转移,对食用菌产品质量安全的影响较小;平菇培养料中多菌灵农药会向平菇子实体转移,且影响平菇菌丝生长,建议慎用多菌灵。

荞麦类黄酮成分的含量测定与分析研究

目的建立高效液相色谱法同时测定荞麦中芦丁、金丝桃苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、芹菜素和山奈酚6种黄酮成分的含量,并比较分析不同产地荞麦中黄酮类成分差异情况。方法荞麦样品加入20 mL体积分数为80%甲醇水溶液超声辅助提取。高速离心后,经Shiseido CAPCELL PAK C18 MGⅡS5色谱柱(4.6mm×250mm,5.0μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.2mL/min;柱温为30.0±5℃,检测波长为361 nm。采用统计学方法分析不同产地荞麦的黄酮类成分差异。结果各黄酮类化合物在浓度为0.5～50.0mg/L的范围内线性关系良好(r>0.999),平均加标回收率为73.20%～114.90%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSD)为2.02%～6.81%;精密度、稳定性、重复性实验的RSD值均小于5.35%,6种黄酮化合物的检出限为0.07～0.14 mg/L,定量限为0.23～0.45 mg/L。荞麦实际样品分析结果表明不同产地的荞麦中6种黄酮成分含量和总黄酮含量差异显著(P<0.05)。结论该方法分析快速简便、稳定和重复性好,可用于荞麦中芦丁、金丝桃苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、芹菜素和山奈酚6种黄酮成分含量的测定。为荞麦中黄酮的开发利用和含量的测定分析提供参考依据。

分散固相萃取-高效液相色谱法测定水果中三氯生及三氯卡班

目的建立分散固相萃取-高效液相色谱法测定水果中三氯生及三氯卡班残留的新方法。方法样品采用乙腈溶液涡旋超声提取后,加入十八烷基键合硅胶吸附剂(C18)作为分散固相萃取净化剂进行净化(200mg),用高效液相色谱法在278 nm处测定,采用PICKERING C8色谱柱(4.6 mm×250 mm i.d.,5μm),以甲醇:水(78:22,V:V)的溶液为流动相等度洗脱,流速1.2 m L/min。结果在最优检测条件下,各目标化合物的加标回收率为72.9%~104.4%,相对标准偏差在2.1%~9.1%之间。三氯生及三氯卡班的检出限分别为0.05和0.02 mg/kg,定量限分别为0.15和0.06 mg/kg。结论该方法分析快速、简便,适用于水果中三氯生及三氯卡班的测定。

不同茶类的高效液相色谱特征指纹图谱研究

目的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立普洱茶等不同品种茶叶样品的指纹图谱。方法28批茶叶样品经80%甲醇水溶液超声辅助提取,采用Waters C18柱(4.6 mm×250 mm,5.0µm),以乙腈-0.5%乙酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.7 mL/min,紫外检测器于270 nm波长进行目标化合物的检测。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进行数据分析,并建立不同品种、不同厂家茶叶的指纹图谱集。结果不同品种茶叶的相似度在0.772~0.981之间,有18个共有峰,指认了其中儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯7个共有峰。相似度结果结合聚类分析结果表明不同品种的茶叶能被准确识别分开,此方法实现了不同茶叶样品的准确分类和识别。结论不同品种、不同厂家茶叶的品质差异明显,高效液相指纹图谱结合化学计量学工具能够很好地提取茶叶的化学信息,并且能够准确地分类和识别不同品种茶叶,为茶叶的品种分类识别和质量控制提供参考依据。

云南优势水果中植物生长调节剂残留的膳食摄入与风险评估

目的明确水果中植物生长调节剂残留的风险,对水果中植物生长调节剂(plant growth regulator,PGR)残留量实行监测并进行风险评估。方法整合3年的市场监测数据,利用农药残留专家联席会议农药急性膳食风险摄入量计算方法和@risk定量风险评估专用软件,对我国各类人群水果中植物生长调节剂残留膳食摄入风险进行评估。结果 4种水果中均有植物生长调节剂检出,总检出率为17.50%,香蕉的检出率最高,为23.33%,共有6种PGR成分被检出,分别为氯吡脲、赤霉素、噻苯隆、2,4-滴、多效唑和乙烯利,检出率为1.04%～8.96%,乙烯利最高;短期膳食摄入结果显示, 4个水果品种消费带来的有检出PGR残留短期膳食摄入量在0.468～32.65μg/kg bw/d,仅占其ARfD的0.38%～65.29%,均小于100%。结论植物生长调节剂残留膳食摄入风险虽在不同水果品种、不同风险因子和不同人群之间有差异,但整体风险水平均在可接受范围内。

噻苯隆在草莓和土壤中的残留动态及膳食评估

目的明确草莓中施用噻苯隆的作用,评估噻苯隆在草莓和土壤中的残留行为及其产生的膳食摄入风险。方法开展噻苯隆施用在草莓和土壤的残留试验,监测噻苯隆对草莓生长和品质的影响,用农药急性膳食风险摄入量计算法评估草莓中噻苯隆残留对不同人群的急性膳食摄入风险。结果噻苯隆在草莓和土壤中的消解符合一级动力学方程,在草莓中的半衰期为1.31~1.44d,土壤中的残留半衰期为1.69~1.87d,草莓中正常收获期的最大残留量为0.0023mg/kg,土壤中的最终残留量均低于方法定量限;噻苯隆可增加草莓单果重,提高产量,可溶性糖含量也有所升高;草莓中噻苯隆残留对普通人群和儿童的膳食摄入暴露量分别为0.023和0.043μg/(kg bw d),仅占急性参考剂量的0.058%~0.11%。结论喷施噻苯隆可提高草莓的产量,推荐使用剂量为1 mg/L浓度喷施2次,草莓中噻苯隆残留带来的膳食摄入风险极低,均在可接受范围内。

液相色谱-原子荧光法测定大米中4种砷形态

目的建立以0.3 mol/L硝酸为提取剂提取大米中4种砷形态（亚砷酸根AsⅢ、砷酸根AsⅤ、一甲基砷MMA和二甲基砷DMA）的液相色谱-原子荧光（liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry,LC-AFS）分析方法。方法在60℃条件下,超声40 min提取大米样品,上清液供LC-AFS测。比较2种提取方法对稻米中4种砷形态的提取效率,并对提取温度和提取时间等条件进行优化。结果 4种砷形态化合物的检出限为0.002-0.01μg/mL,加标回收率为89.03%-100.70%,RSD不大于4.36%（n=5）。结论此方法可以在1h时内完全分离大米样品中的四种砷形态,操作简单、灵敏,适用于大米中重金属砷的风险评估。

直接竞争ELISA法检测蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸

目的研究竞争性酶联免疫法分析测定蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)残留量。方法样品用乙腈进行前处理后采用ELISA试剂盒检测蔬菜中2,4-D的残留,分析方法的灵敏度、回收率和稳定性;并比较其与超高效液相色谱-质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)在灵敏度、稳定性等方法学参数上的差异。结果经过有机溶剂提取等前处理过程,ELISA与UPLC-MS的检测灵敏度分别可以达到1.739μg/kg和3μg/kg,回收率分别为80.19%~117.37%和80.04%~112.5%;试剂盒稳定性的测定证明其可以在4℃至少保存8个月。结论与UPLC-MS法相比,直接竞争ELISA法简单、高效,检测快速,灵敏度高,适合大批量筛选样品。因此,ELISA法更加适合快速检测蔬菜中2,4-D的残留。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定云南野生菌中甲拌磷及其代谢物

建立了云南野生菌中甲拌磷及其代谢物残留量的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱测定方法。野生菌样品经1%HAc-乙腈提取后,利用PSA填料净化,过滤膜后分析,正离子多反应监测模式检测,外标法定量。甲拌磷及其代谢物在0.05-5.0μg/L浓度范围内具有较好线性关系,检出限范围为0.008-0.08μg/kg,定量限范围为0.03-0.30μg/kg。在3个加标浓度下,平均回收率范围为73.3%-98.5%,相对标准偏差范围为4.4%-9.9%。该方法能够满足云南野生菌中甲拌磷及其代谢物残留分析的要求。

乙酰丙酮分光光度法测定蔬菜甲醛含量及风险评估

【目的】建立蔬菜中甲醛含量测定的快速方法,明确蔬菜中甲醛的残留情况,掌握蔬菜中甲醛含量对人群的膳食暴露风险。【方法】采用单因素试验优化关键实验条件,建立蔬菜中甲醛含量测定的乙酰丙酮分光光度法,分析383个蔬菜样品中的甲醛含量,利用点评估的方法结合膳食数据对蔬菜中甲醛的暴露风险进行评估。【结果】乙酰丙酮分光光度法测定蔬菜中甲醛含量的检出限和定量限分别为0.45、1.5 mg/kg,在1.5、7.5、15 mg/kg添加水平下,回收率在86.33%~92.40%,相对标准偏差为2.23%~4.21%;不同蔬菜中甲醛的检出率为5.00%~72.73%,总检出率为26.37%,不同蔬菜的检出平均值在0.47~1.67 mg/kg;不同蔬菜中甲醛含量对一般人群的膳食暴露水平为0.0019~0.068 mg/kg (bw/d),安全限值(MOS)为14.1~289.8,蔬菜中甲醛含量对不同人群的膳食暴露水平为0.0060~0.15 mg/kg (bw/d),MOS在10.1~33.3,所有评估的MOS均大于1。【结论】乙酰丙酮分光光度法能快速测定蔬菜中的甲醛含量,方法操作简便,灵敏度高;蔬菜中甲醛残留量的膳食摄入风险较低,在可接受范围内。

苯氧羧酸类除草剂残留检测技术的研究进展

以2,4-D为代表的苯氧羧酸类除草剂,低浓度为保花保果生长调节剂,调节细胞生长及愈伤的分化、提高保鲜时间,高浓度为除草剂,该类除草剂难降解,易污染地下水,广泛、大量的应用会使植物产生畸形,影响人体中枢神经系统,具有潜在的致癌性和致突变性。因此,快速、灵敏、准确地检测出苯氧羧酸类残留是保证农产品、环境安全的重要手段,本文概述了苯氧羧酸类除草剂的前处理方法及不同检测方法在检测农产品、环境水样等样品中苯氧羧酸类除草剂残留的研究进展。综合对比了色谱法、联合技术、免疫法、纳米材料及传感器等检测方法在苯氧羧酸类检测中应用的优缺点,提出了未来检测小分子物质的发展趋势。

分散固相萃取净化–超高效液相色谱–串联质谱法测定三七中农药及其代谢物残留

建立三七中农药及其代谢物残留的分散固相萃取–高效液相色谱–串联质谱测定方法。三七样品经水溶液浸润后放置,加入乙腈超声辅助提取后离心,上清液利用PSA(N-丙基乙二胺)、NH_(2)(丙氨基键合硅胶)、GCB(石墨化炭黑)材料进行分散固相萃取净化,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱分离,以甲醇–5 mmol/L乙酸铵溶液(含质量分数为0.05%的甲酸)作为分离流动相梯度洗脱,正负离子同时扫描多反应监测模式下进行分析。10种农药及其代谢物平均加标回收率为90.4%~110.5%,相对标准偏差均不大于7.9%(n=6),检出限为0.3~2.8μg/kg。该方法分析快速、稳定,重复性好,适用于三七中10种农药及其代谢物残留同时分析测定。