下调HMGB2表达对肝癌LM3细胞上皮-间质转化的抑制作用及其AKT/mTOR信号通路机制

目的:探讨下调肝癌细胞中高迁移率族框蛋白2 (HMGB2)表达对肝癌细胞生物学行为及上皮-间质转化(EMT)进程的影响,并阐明其作用机制。方法:对数生长期的人肝癌LM3细胞分为阴性对照组和HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA组),分别以Lipofectamin 2000为载体转染无关序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)和敲除HMGB2序列的RNA oligo。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平,分别采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blotting法检测2组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、 N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,HMGB2 siRNA组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),HMGB2 siRNA组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、mTOR、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:下调HMGB2的表达可降低肝癌LM3细胞迁移和侵袭能力并抑制EMT,其作用机制可能与参与调节AKT/mTOR通路相关蛋白表达有关。

miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),而ADAM9mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。MTT法检测,SGC-7901细胞过表达miR-126或沉默ADAM9基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与相应阴性对照组比较,miR-126-OE组和ADAM9 siRNA组细胞中E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。靶基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌SGC-7901细胞中miR-126低表达而ADAM9基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

慢性乙型肝炎患者血清α1微球蛋白检测的临床意义

目的:检测不同肝功能损伤情况下慢性乙型肝炎(CHB)患者血清α1微球蛋白(α1-MG)的水平,探讨采用α1-MG评价CHB患者肝功能的临床意义。方法:243例CHB患者分为肝肾功能正常组(n=94)、肝功能正常肾功能异常组(n=20)、肝功能异常肾功能正常组(n=100)和肝肾功能异常组(n=29),同时选取健康体检者67人作为对照组,测定各组受试者血清α1-MG水平,同时测定谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)等肝功能指标及血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)等肾功能指标。采用免疫比浊法检测α1-MG水平,采用紫外-乳酸脱氢酶法检测ALT水平,采用紫外-苹果酸脱氢酶法检测AST水平,采用AMP缓冲液法检测ALP水平,采用肌氨酸氧化酶法检测CREA水平,采用紫外-谷氨酸脱氢酶法检测BUN水平。结果:与对照组比较,肝功能异常肾功能正常组患者血清α1-MG水平明显降低(P<0.05),肝肾功能正常组和肝肾功能异常组患者血清α1-MG水平无明显变化(P>0.05),肝功能正常肾功能异常组患者血清α1-MG水平明显升高(P<0.01)。按照α1-MG<10mg·L^(-1)为判断肝功能异常的标准,肝功能异常肾功能正常组患者血清ɑ1-MG阳性率为36%,肝肾功能异常组患者血清α1-MG阳性率为24%;如以α1-MG<15mg·L^(-1)为标准,则肝功能异常肾功能正常组患者血清α1-MG阳性率为68%。肝功能异常肾功能正常组患者血清α1-MG水平与肝功能指标ALT、AST和ALP呈负相关关系(r=-0.934,r=-0.916,r=-0.847,P<0.01),且其数值随着肝损伤程度的加重而降低。结论:α1-MG检测在判断CHB患者肝功能方面具有一定的临床意义,但须排除肾功能损害引起的结果干扰。

α1微球蛋白的生物学特性及临床应用研究进展

α1微球蛋白（α1-MG）属lipocalin家族成员[1],广泛分布在体内各种组织中,除了中枢神经系统以外,包括血液系统在内的其他组织均存在这类蛋白[2].本文就α1-MG最新研究进展进行综述.

人α1微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的构建人α1微球蛋白（α1-MG）基因的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达、纯化，为制备仅。一MG诊断试剂中原料抗体、标准品及质控品奠定基础。方法从人胚胎肝脏中提取总RNA，利用反转录聚合酶链反应技术扩增α1-MG基因。然后克隆至PQE30表达载体，转化大肠杆菌M15中进行表达，并经镍固定金属亲和层析进行纯化，蛋白质印迹进行免疫学鉴定。结果获得了与Genebank报道一致的仪。一MG基因片段，成功构建了成熟人α1-MG的原核表达载体PQE30-α1-MG，质粒转化大肠杆菌并经1mmol／L异丙基硫代半乳糖诱导5h后，可表达相对分子质量约25000的外源蛋白，表达的α1-MG大部分在包涵体中，并可经镍固定金属亲和层析纯化，纯化有效率95％以上，BCA法测定纯化的α1-MG蛋白含量为25mg／L。蛋白质印迹表明，该蛋白可与抗人仅．一MG天然抗体反应。结论通过基因工程方法可获得高效表达的重组α1-MG蛋白，该蛋白具备同天然仅。一MG相同的生物学特性，为下一步进行α1-MG相关研究及应用奠定基础。

（1→3）-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染早期诊断的意义

目的 探讨（ 1→3）-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染早期诊断的意义.方法 收集吉林大学中日联谊医院住院患者送检标本73份（血清、尿液、关节腔穿刺液、胸腹水、肺泡灌洗液等）,同时收集40份健康成人血清作为正常对照.应用SLP真菌检测试剂盒定性及定量检测不同临床标本中（1→3）-β-D-葡聚糖含量.结果 73份标本中检出真菌阳性标本47份,阳性率64.4％.利用SLP肉眼观察法,可观察到深部真菌感染组有明显黑色素形成,而正常对照组则无明显黑色素形成；定量检测结果显示,深部真菌感染组标本中（1→3 ）-β-D-葡聚糖含量较对照组明显增加,且差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 利用SLP试剂盒检测（1→3）-β-D-葡聚糖较传统真菌培养法简便、快速、灵敏度高,可用于深部真菌感染的早期快速诊断.

RNAi抑制高迁移率族蛋白B2表达对人肝癌细胞HepG2迁移及侵袭能力的影响及机制

目的采用RNA干扰技术下调肝癌细胞中高迁移率族蛋白B2(HMGB2)的表达,观察其对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,分为HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA)及阴性对照组(NC),分别以脂质体2000为载体,转染敲除HMGB2序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)及RNA干扰无关序列。采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞中HMGB2 mRNA及蛋白表达水平以验证干扰效果;采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测敲低HMGB2对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot法检测敲低HMGB2对HepG2细胞EMT相关蛋白表达的影响。结果HMGB2 siRNA组细胞HMGB2 mRNA及蛋白表达水平低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),表明RNA干扰成功;细胞划痕及Transwell侵袭实验结果显示,HMGB2 siRNA组细胞愈合率及侵入小室的细胞数量少于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),表明下调HMGB2表达可降低HepG2细胞的迁移及侵袭能力;Western blot结果显示,HMGB2 siRNA组HepG2细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平低于NC组,E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调HMGB2表达可抑制肝癌细胞的上皮间质转化进程,进而降低其迁移及侵袭能力。

鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的影响

目的观察鞣酸(tannicacid,TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠血糖及肾脏功能和形态改变的影响。方法用STZ诱发大鼠DM模型后,随机分为DM模型组、氨基胍(AG)组和TA低高剂量组,另设正常对照组。AG组按40mg.kg-1.d-1给予;TA低高剂量组分别按20及30mg.kg-1.d-1给予;正常对照组和模型组每天给予等体积生理盐水,给药方式均为腹腔注射,共10w。观察给药期间及10w后大鼠的一般状况,检测各组大鼠血糖、血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、24h尿蛋白及观察肾脏形态学变化。结果TA可改善DM大鼠基本状况,与模型组比较,TA组血糖、血清Cr、BUN和尿Cr、尿蛋白均明显降低,光镜和电镜下观察显示,模型组大鼠较正常对照组大鼠肾小球明显增大,细胞数目增多,基底膜节段性增厚,部分足突融合。TA组上述异常均明显减轻。结论TA可明显降低尿蛋白排泄,改善DM大鼠肾脏功能和形态学异常,对DM大鼠具有肾脏保护作用。

单宁酸对糖尿病大鼠肾组织炎症因子表达的抑制作用

目的:观察单宁酸(TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠肾脏组织炎症因子表达的抑制作用,探讨其作用机制。方法:70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM组、氨基胍(AG)组、TA低剂量组和TA高剂量组。处理10周后检测各组大鼠肾脏功能指标[血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白排泄量],PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学染色观察肾组织细胞间黏附分子1(ICAM-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,RT-PCR方法检测肾组织ICAM-1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,TA组大鼠血清Cre、BUN及24 h尿蛋白排泄量降低(P<0.05或P<0.01),大鼠肾小球系膜区PAS阳性物质减少,肾组织ICAM-1及TNF-α蛋白表达水平降低,肾组织ICAM-1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论:TA能降低糖尿病大鼠肾组织ICAM-1及TNF-α的表达,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用。

诊断急性胰腺炎的生化检测指标评析

目的通过检测血淀粉酶(S-Amy)、胰脂肪酶(LPS)、C反应蛋白(CRP)及尿淀粉酶(U-Amy)、尿胰蛋白酶原激活肽(TAP)5项生化指标,探讨急性胰腺炎(AP)早期诊断及病情评估的有效指标。方法将541例急腹症患者分为AP组和非AP组,其中AP组分为轻症AP(MAP)和重症AP(SAP),同时选取80例健康体检者作为正常对照组,于患者入院后6h内采集静脉血并留取新鲜尿液,对各组5项生化指标进行检测和分析。S-Amy、U-Amy、LPS采用速率法,TAP、CRP采用ELISA法。结果 S-Amy、U-Amy和TAP水平在AP组最高,非AP组次之,正常对照组最低,各组之间差异均具有统计学意义(P<0.01)。AP组LPS水平较非AP组及正常对照组显著增高(P<0.01)。AP组与非AP组CRP水平均较正常对照组增高(P<0.01),但AP组CRP水平与非AP组比较无显著差异。SAP组U-Amy、TAP及CRP水平显著高于MAP组(P<0.01),而S-Amy、LPS水平在这两组间无显著差异(P>0.05)。LPS用于AP早期诊断的敏感度为92.1%、特异度为91.6%,显著高于S-Amy、U-Amy、TAP及CRP。结论血、尿淀粉酶、LPS指标对于AP的早期诊断具有重要意义,TAP和CRP有助于评估病变的严重程度、观察疗效及评估预后。

单宁酸对糖尿病大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对糖尿病(DM)大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氨基胍(AG)组和TA低高剂量组,给药10周后处死大鼠。化学比色法检测各组大鼠血清及肾皮质MDA含量及GSH-Px、SOD、CAT活性。将单宁酸加入到体外建立的非酶糖基化体系,孵育2个月,荧光法进行AGEs测定并计算蛋白质糖基化抑制率。结果单宁酸可降低DM大鼠血清及肾皮质MDA含量,提高GSH-Px、SOD、CAT活性并呈浓度依赖性抑制体外蛋白质非酶糖基化反应。结论单宁酸可提升糖尿病大鼠的抗氧化能力,并具有抑制体外蛋白质非酶糖基化的作用。

单宁酸对高糖和糖化终末产物培养条件下肾小球系膜细胞氧化应激及微炎症状态的改善作用

目的:探讨单宁酸对肾小球系膜细胞(GMC)的作用,从氧化应激及微炎症角度阐明单宁酸改善糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:体外培养GMC,分别用高浓度葡萄糖(30mmol·L-1)及糖化终末产物(AGEs)牛血清白蛋白(BSA,250mg·L-1)处理,正常糖培养及不含糖的BSA处理的细胞作为相应对照组,在高糖或AGEs处理的同时采用不同浓度单宁酸(10、20、40和80μmol·L-1)进行干预,培养48h后检测细胞培养上清中丙二醛(MDA)水平及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,ELISA法检测细胞培养上清中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,免疫组织化学法检测GMC中细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达,RT-PCR法检测GMC中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和ICAM-1mRNA的表达水平。结果:与高糖组和AGEs组比较,单宁酸处理组MDA水平明显降低(P<0.05),GSH-Px、SOD及CAT活性明显升高(P<0.05或P<0.01),GMC培养上清中8-OHdG水平明显降低(P<0.05)。与高糖组和AGEs组比较,40和80μmol·L-1单宁酸组ICAM-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与高糖组比较,单宁酸组MCP-1和ICAM-1mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:单宁酸可保护GMC免受氧化及炎症介质的损伤,从而延缓和改善DN的肾小球病变。

慢性乙型肝炎患者血清α1微球蛋白水平与HBV-DNA载量的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清α1微球蛋白(α1-MG)与乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量的相关性。方法收集233例CHB患者血清。将CHB患者根据乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)分为HBsAg阳性患者(190例)和HBeAg阳性患者(43例)。分别测定其α1-MG和HBV-DNA载量,采用免疫比浊法检测血清α1-MG;采用荧光定量PCR法检测血清HBV-DNA载量,分析血清α1-MG水平与血清HBV-DNA载量的相关性。结果HBsAg阳性患者中HBV-DNA高载量患者88例(高载量A组),HBV-DNA低载量患者102例(低载量A组)。高载量A组α1-MG水平为(26.5±8.5)mg/L,低载量A组α1-MG水平为(20.5±5.5)mg/L,两组比较,差异无统计学意义(t=1.1057,P>0.05)。HBeAg阳性患者HBV-DNA载量分析结果显示,HBV-DNA高载量患者15例(高载量B组),HBV-DNA低载量患者28例(低载量B组)。高载量B组α1-MG水平为(19.2±7.2)mg/L,低载量B组α1-MG水平为(18.5±6.3)mg/L,差异无统计学意义(t=1.3251,P>0.05)。结论血清α1-MG水平与HBV-DNA载量无明显的相关性,不能用于判断CHB患者病毒复制情况,对病变的严重程度、观察疗效及评估预后无指导作用。

单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。

Cys C、NGAL联合Angptl4在诊断早期糖尿病肾病中的价值研究

目的:探讨胱抑素C(Cys C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、血管生成素样蛋白4(Angptl4)在早期糖尿病肾病中的临床应用价值。方法:回顾性分析2019年3月-2021年3月吉林省人民医院收治的168例2型糖尿病患者的临床资料,依据《糖尿病肾脏疾病临床诊疗中国指南》的诊断标准以及尿蛋白排泄率(UAER)分为单纯糖尿病组100例和糖尿病肾病组68例,同期收集体检中心健康体检者100例作为对照组。检测三组研究对象的Cys C、NGAL、Angptl4水平,比较三者单独检测和联合检测的诊断价值,并分析其与糖尿病肾病分期的相关性。结果:单纯糖尿病组和糖尿病肾病组的糖尿病病程、高血压史、高血脂比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病肾病组患者的Cys C、NGAL水平均明显高于单纯糖尿病组、对照组,Angptl4水平明显低于单纯糖尿病组、对照组(P<0.05);单纯糖尿病组患者Cys C、NGAL水平均明显高于对照组,Angptl4水平明显低于对照组(P<0.05)。ROC曲线结果显示,三者联合检测的曲线下面积(AUC)为0.903,灵敏度和特异度可达到90.1%、86.8%,优于任意一项单独检测的诊断效能。不同分期糖尿病肾病患者Cys C、NGAL、Angptl4水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman 相关性分析结果显示,Cys C、NGAL与糖尿病肾病分期均呈正相关,Angptl4与糖尿病肾病分期呈负相关(P<0.05)。结论:Cys C、NGAL、Angptl4水平与糖尿病肾病的发生、进展密切相关,联合检测可以为疾病的早期诊断提供实验室依据。

双氢青蒿素通过抑制HMGB2表达及逆转EMT进程抑制肝癌细胞生长及侵袭

目的:观察双氢青蒿素(DHA)对体外生长的肝癌细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞HepG2和LM3,采用不同浓度DHA处理,设立不加药的阴性对照组并以顺铂作为阳性对照。MTT、流式细胞术分别检测DHA对肝癌细胞增殖及凋亡的影响;划痕实验、Transwell实验分别观察DHA对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测DHA对肝癌细胞凋亡相关蛋白、HMGB2及EMT相关蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组相比,DHA处理后的肝癌细胞存活率降低、凋亡率提高,迁移及侵袭能力降低(P<0.05),HMGB2蛋白表达显著降低,凋亡相关蛋白Cleavedcaspase3、Bax表达显著增加,Bcl-2表达显著减少,EMT相关蛋白E-cadherin表达显著增加,N-cadherin、Vimentin表达显著减少(P<0.05)。结论:DHA可抑制肝癌细胞生长,促进其凋亡,降低其迁移及侵袭能力,其机制可能为DHA通过降低HMGB2表达抑制肝癌细胞EMT进程。

减毒沙门氏菌携带siRNA-STAT3质粒对小鼠前列腺移植癌的治疗作用

目的观察减毒沙门氏菌携带siRNA-STAT3质粒对小鼠前列腺移植癌的治疗效果,分析其作用机制。方法构建小鼠前列腺移植癌模型,随机分组,将转化有siRNA-STAT3质粒的减毒沙门氏菌经局部注射到模型构建成功的小鼠体内。观察小鼠一般状态,记录肿瘤体积的变化,RT-PCR和Western bolt方法分析STAT3及其下游基因Bcl-2、c-Myc、HiF1、cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平,铺板法观察菌群分布,HE染色观察肿瘤的形态学变化,免疫组化检查STAT3、HiF1及PCNA蛋白表达情况。结果①小鼠前列腺移植癌模型构建成功,携带有siRNA-STAT3质粒沙门氏菌治疗组移植性前列腺癌瘤体生长受到明显抑制,瘤重减轻;②铺板法检测菌群分布显示减毒沙门氏菌具有嗜肿瘤特性且在肿瘤内长期存活;肝内分布次之,再次为肺,在脾中分布最低;③pGC-Si-STAT3治疗组肿瘤组织的STAT3 mRNA和蛋白表达明显降低;其下游基因Bcl-2、c-Myc的mRNA及HiF1、cyclin D1蛋白的表达水平都不同程度的受到抑制;④免疫组织化学结果显示pGC-Si-STAT3治疗组肿瘤组织的STAT3、HiF1及PCNA表达下调。结论以减毒沙门氏菌作为运载体携带siRNA-STAT3质粒通过调控STAT3下游基因表达,诱导凋亡,对小鼠移植性前列腺癌具有显著的抑瘤作用。

单宁酸对糖尿病大鼠血清及肾脏C反应蛋白表达的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠血清及肾脏C反应蛋白(CRP)表达的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氨基胍(AG)组和TA低高剂量组,给药10周后处死大鼠。ELISA法检测各组大鼠血清CRP水平,免疫组织化学染色观察CRP在肾组织中的表达。结果 DM大鼠血清及肾组织CRP表达增加,单宁酸可降低DM大鼠血清CRP水平,下调肾组织CRP蛋白的表达。结论单宁酸可改善糖尿病大鼠微炎症状态,对保护糖尿病大鼠的肾脏损害具有一定的积极作用。

人α1微球蛋白ELISA检测试剂盒的制备及初步应用

目的制备人α1微球蛋白（alpha 1-microglobulin,α1-MG）ELISA定量检测试剂盒,并初步应用于临床标本的检测。方法用重组人α1-MG蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体,对单抗的特性进行鉴定后,采用双抗体夹心ELISA方法制备α1-MG试剂盒,并进行线性范围、灵敏度、准确性、精密性验证。应用制备的试剂盒检测100份健康人血清中的α1-MG含量,计算正常参考值;分别应用试剂盒及放射性免疫分析法（radioactive immunoassay,RIA）检测87份人血清标本,分析试剂盒与RIA法检测结果的相关性。结果经间接ELISA法筛选及克隆化培养,共获得4株稳定分泌抗α1-MG单抗的杂交瘤细胞株;制备的试剂盒最佳线性范围为0.5-60 mg/L,灵敏度为0.03 mg/L,检测不同浓度α1-MG的回收率在92.7%-97.1%之间,批内、批间变异系数（CV）分别为4.78%-8.57%和4.30%-6.84%;该试剂盒检测健康人血清样本中α1-MG含量正常参考值为15-32 mg/L,与RIA法的检测结果具有良好的相关性（r=0.958 6）。结论制备的人α1-MG ELISA检测试剂盒具有较高的准确性和灵敏度,且与RIA法具有良好的相关性,符合临床免疫分析的要求,适用于临床检测和科研应用。

α1-微球蛋白、C-反应蛋白、D-二聚体联合检验在妊娠期高血压疾病诊疗中的意义

目的观察分析妊娠期高血疾病孕妇血清中α1-微球蛋白(α1-MG)、C-反应蛋白(CRP)、血浆D-二聚体(D-D)的变化规律及其临床意义。方法回顾性分析2015年10月-2016年12月该院妊娠期高血压疾病孕妇52例为研究组,同期健康孕妇及未孕妇女82例为对照组。采用全自动生化分析仪测定各组孕妇血清中α1-MG、CRP含量,采用全自动血凝仪测定各组孕妇血浆D-D含量。结果研究组孕妇血清中的α1-MG、CRP、D-D浓度均高于对照组,且子痫孕妇要高于子痫前期孕妇,重度子痫前期孕妇高于轻度子痫前期孕妇。结论妊娠期高血压疾病孕妇血清α1-MG、CRP、血浆D-D含量随病情加重而增高。动态监测孕妇血清中α1-MG、CRP、血浆D-D浓度可作为妊娠期高血压疾病诊断、病情监控及防治并发症保护母婴安全的良好指标。