2021—2023年湖南省无害化处理场CSFV、PRV、PRRSV污染情况调查

为了解湖南省2021—2023年无害化处理场猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)污染情况,采用RT-qPCR方法对采集的1825份淋巴结、脾脏、耳尖等组织样品进行CSFV、PRV、PRRSV核酸检测,并对2022年衡南县PRRSV阳性样品进行分型检测及Nsp2基因测序。结果显示:CSFV、PRV、PRRSV的阳性检出率分别为3.01%、1.81%、30.14%;双重污染率为2.52%,以PRRSV与其他2种病原双重污染为主,三重污染率较低,为0.05%。2022年衡南县无害化处理场的PRRSV阳性检出率为24.12%,以春、冬季阳性率较高;北美型(NA-PRRSV)、高致病型(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)阳性检出率分别为98.39%、20.97%、43.55%;经Nsp2基因测序,1条序列存在“1+29”个不连续氨基酸缺失,为HP-PRRSV毒株,17条序列存在“111+1+19”个不连续氨基酸缺失,为类NADC30毒株。结果表明:2021—2023年,湖南省无害化处理场CSFV、PRV污染率维持在较低水平,PRRSV污染率较高,呈逐年上升趋势,其中类NADC30毒株为优势流行毒株,建议持续做好猪瘟及猪伪狂犬病的免疫接种及效果评估工作,加强PRRSV的遗传变异监测及养殖场的饲养管理和生物安全管理,以保障猪群生产安全。

湖南省羊养殖户布鲁氏菌病知信行调查

为了解湖南省羊养殖户对布鲁氏菌病(以下简称布病)防治知识知晓情况及防治态度和行为状况,2021年采用便利抽样方法,在湖南省所有县(市、区)抽取羊养殖户进行布病知信行问卷调查。结果显示:在1 913个羊养殖户中,有82.96%(1 587/1 913)听说过布病;在听说过布病的羊养殖人员中,布病防治知识和防治行为的知晓合格率分别为69.84%和73.60%;64.95%的羊养殖户对患有布病后及时治疗的认识不足,63.19%对劳动后清洗消毒的意识不强;不同年龄和不同文化程度羊养殖人员的布病知晓合格率存在明显差异(P <0.05),年龄越大、文化程度越低,知晓合格率就越低。结果表明,湖南省羊养殖户较为重视布病防治,基本能采取规范的行为做好布病防控,但仍有部分养殖户防范意识较低,存在高危行为。建议有关部门继续加大对羊养殖户的布病宣传教育力度,全面提高羊养殖户的布病防治意识及自我保护能力,防止人畜感染。

2014-2022年湖南省家畜布鲁氏菌病监测结果统计分析

为了解湖南省家畜布鲁氏菌病(简称布病)流行情况,从“全国动物卫生监测平台疫病监测系统”数据库中,下载2014-2022年湖南省布病监测数据,使用SPSS软件进行统计分析。结果显示:2014-2022年全省共对22 544个场点的594 180份血清样品进行了布病抗体检测,共检出阳性样品4 381份,个体阳性率为0.74%(95%CI:0.72%~0.76%),检出阳性群体471个,平均群体阳性率2.09%(95%CI:1.91%~2.28%);羊、牛、猪的个体阳性率分别为0.91%(95%CI:0.88%~0.94%)、0.24%(95%CI:0.21%~0.26%)、1.01%(95%CI:0.87%~1.17%),群体阳性率分别为2.48%(95%CI:2.25%~2.73%)、0.86%(95%CI:0.62%~1.15%)、1.96%(95%CI:1.16%~3.08%);全省14个市(州)的63个县(市、区)检出布病抗体阳性,检出阳性市州数量最多的是2020年和2021年,检出阳性县(市、区)数量最多的是2022年;2016年检出的阳性场点数最多,达89个,夏季6-8月份阳性检出数量最多;相对牛场和猪场,羊场的群体阳性率最高;交易市场的群体阳性率最高,其次是散户和商品代场。结果表明,湖南省近9年来家畜布病流行率持续较低,发生区域性大流行的风险较小,但流行范围较广,部分地区、部分种群和场点散发疫情风险较高,需要重点加强防范,应继续加强布病综合防控,加大调运监管力度,持续推进布病净化工作。

2022年湖南省兽医实验室检测能力比对及非洲猪瘟检测能力验证

实验室检测能力比对与能力验证是评估实验室检测质量的重要手段。2022年4月,按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求,湖南省组织全省14个市级77个县级兽医系统实验室开展了检测能力比对,267个实验室开展了非洲猪瘟能力验证。市级开展禽流感病毒H5/H7亚型核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、O型口蹄疫病毒抗体检测3个项目,县级开展非洲猪瘟病毒核酸、O型口蹄疫病毒抗体以及布鲁氏菌抗体检测3个项目,非洲猪瘟检测实验室开展非洲猪瘟病毒核酸检测项目,每个项目各5份盲样。结果显示:12个市级和59个县级系统实验室所有比对项目检测结果全部准确,实验室整体准确率为78.02%,1355份样品中1317份样品检测结果准确,样品整体准确率为97.20%;267个参加非洲猪瘟能力验证的实验室中,224个实验室核酸检测结果准确,实验室整体准确率为83.90%,1335份样品中1265份样品结果准确,样品整体准确率为94.76%,其中屠宰企业样品准确率最低(93.30%)。结果表明:湖南省兽医实验室检测能力整体良好,但部分县级兽医系统实验室及屠宰企业实验室检测能力有待加强。各地应继续加强实验室检测能力建设,强化技术培训,全面提高检测能力和水平。

2022年湖南省家禽H7N9亚型禽流感监测与分析

为了解湖南省家禽(鸡、鸭、鹅)H7N9亚型禽流感的免疫抗体水平及其流行情况,2022年在全省14个市州,采用配额抽样方法,在种禽场、商品代场、散养户和活禽市场共采集46112份禽血清和53246份禽拭子样品,通过血凝抑制试验、荧光定量PCR方法分别进行免疫抗体和病毒核酸检测。结果显示:H7N9亚型禽流感免疫抗体平均场群合格率为93.27%,平均个体合格率为90.60%,仅在活禽市场的1份鸡拭子样品中检测到病毒核酸阳性;鸡H7N9亚型禽流感免疫抗体平均场群合格率和个体合格率(94.66%和91.51%)均高于水禽(83.26%和81.86%);种禽场的免疫抗体平均场群合格率和个体合格率最高,活禽市场最低,两者差异具有统计学意义(P<0.05);全省14个市州的H7N9亚型禽流感免疫抗体平均场群合格率和个体合格率均在70%以上。结果表明:2022年湖南省家禽H7N9亚型禽流感免疫效果较好,在饲养场禽群中也未检出病原,发生大规模疫情的风险较低,但在活禽市场中仍检出病原,且水禽以及散养户和活禽市场禽群的免疫抗体水平略低,疫情散发风险依然存在。建议进一步加强对H7N9亚型禽流感的免疫监测以及动物检疫监管工作,不断提升公共卫生安全防护水平。

猪化脓隐秘杆菌的分离与鉴定

从一例肝、肺化脓性结节,脾出血性肿大的病猪体内分离到一株革兰氏阳性、细长、形态不规则的杆菌,该菌在TSA平板、普通绵羊血琼脂、巧克力平板上生长缓慢,在普通绵羊血琼脂上呈α-溶血。对该菌的16S rDNA进行PCR扩增、测序、比较,结果显示该菌与化脓隐秘杆菌的16S rDNA有99%的同源性,进一步用API生化鉴定,结果也与其相符。该菌在24~52 h内100%致死小白鼠,腹腔接种新西兰兔,接种兔72 h内死亡,表明该菌为致病性细菌。

湖南规模奶牛场牛病毒性腹泻的血清学调查

牛病毒性腹泻病毒（简称BVDV）,又称牛黏膜病病毒（BMDV）,与猪瘟病毒和羊边界病病毒（BDV）同属于黄病毒科瘟病毒属。

2014年-2015年湖南省规模猪场猪伪狂犬病血清学调查

为了解湖南省规模化猪场猪伪狂犬病免疫状况及猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒感染情况，2014年-2015年，采用随机抽样的方式，采集343个不同规模猪场血清样品7049份，采用ELISA方法开展PRV抗体血清学调查。结果显示，160个规模猪场中，检测免疫猪血清3415份，PRVgB抗体合格数为22064），合格率仅为64．60％，表明规模猪场猪伪狂犬病免疫不确实；343个规模猪场中，210个规模猪场PRVgE抗体阳性，场阳性率61．22％；检测猪血清样品7049份，PRVgE抗体阳性数为1661份，阳性率为23．56％，其中2014年PRVgE抗体阳性率为21．71％，2015年PRVgE抗体阳性率为25．17％，呈上升趋势。全省14个市州的规模猪场均存在不同程度的PRV感染，不同地区感染率差异明显，永州感染率最高，长沙感染率最低。不同养殖规模PRV的感染率不尽相同，其中，存栏数200头以下PRV感染率较高，存栏数500～1000头感染率较低；种猪场免疫抗体优于商品猪场，PRV感染率较商品猪场低。结果表明，PRV在湖南省感染普遍存在，疫苗免疫在一定程度上可以阻止临床病例，但仍然无法根除隐性感染，对规模猪场伪狂犬病采取综合防控和净化措施势在必行。

野生鸟类禽流感病毒感染情况的调查

为了解野生鸟类禽流感病毒(AIV)的携带感染情况,2006年～2010年,本研究在湖南省主要候鸟迁徙地收集115只野鸟组织或拭子样品、75份野鸟的新鲜粪便样品和72份血清样品。组织或拭子样品采用RT-PCR方法检测和鸡胚接种病毒分离鉴定,血清样品分别进行H5(含Re-5和Re-4)、H6、H7、H9、H10和H11抗体检测。结果表明,从斑鸠和绿头鸭组织中分别分离到H5N1亚型和H3N2亚型AIV;72份血清中有17份抗体为阳性,其中H5(Re-5)亚型5份、H5(Re-4)亚型1份、H6亚型1份、H7亚型2份和H9亚型8份,阳性率分别为6.94%、1.39%、1.39%、2.78%和11.11%。H10和H11亚型未检测到抗体阳性。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank上猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株的核苷酸序列与古典美洲株的核苷酸序列,设计一对高致病性PRRSV特异性引物,结合快速的RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立高致病性PRRSV快速RT-PCR检测体系。通过测序和同类试剂盒检测效果比对,证实该体系检测结果准确,体系特异性和灵敏度试验结果显示,该体系对猪瘟病毒、普通PRRSV、禽流感病毒无扩增产物,至少能检测经10万倍稀释后的临床阳性样品。该方法可直接对可疑组织样品进行检测,操作简单、快速、价廉、受环境因素污染概率小,适合临床样品的检测。

3株猪红斑丹毒丝菌湖南株的分离与鉴定

从湖南3个不同地区的临床疹块型猪病病例中,分离获得3株能在2 d内致死小白鼠,1～4 d内致死鸽的革兰氏阳性菌,生化鉴定和16S rDNA PCR测序鉴定结果显示3株分离菌均为猪红斑丹毒丝菌,药敏试验显示,3株猪红斑丹毒丝菌均对青霉素等耐药,对恩诺沙星等敏感。

猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测

为了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,选用了两个厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗,对80头试验仔猪进行了免疫注射,并在6、7、8、9、11、13、20周龄采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体;疫苗的免疫副作用小;使用VP1ELISA和LPB-ELISA检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好。

引起猪繁殖障碍综合征的六种传染病的血清学监测

作者采用试剂盒 7套 ,监测了六种能引起猪繁殖障碍综合征的传染病 ,对来自有繁殖障碍症状的 182场次进行猪瘟 (HC)抗原检测 ,并对包括这 182场次在内的 335个猪场病例的血清样品 1790份及田间血清样品 2 895 0份进行HC、猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS)、伪狂犬病 (PR)、日本乙型脑炎 (JE)、细小病毒感染 (PPV)、布鲁氏菌病 (Bruc .)等六种传染病的抗体监测。结果表明 ,在有繁殖障碍症状猪场 ,HC抗原检出率高达 6 9.8% ,并且在不使用疫苗的情况下 ,PRRS、PR、JE和PPV的抗体阳性场分别为 4 6 .9%、33%、10 .5 %和 5 2 .6 %。不使用疫苗时 ,血清样品的PRRS和PR的抗体阳性率也高。PPV较为普遍 ,它与JE也不容忽视。HC与PRRS、PR、JE和PPV中的一种或几种混合感染可能是引起繁殖障碍造成严重损失的主要原因。Bruc.在湖南省的猪群中已得到控制。要控制猪繁殖障碍综合征 ,必须注重综合防制 ,优化免疫程度、把握引种关。

2018年湖南省规模猪场伪狂犬病血清学调查

为了解湖南省规模化猪场猪伪狂犬病免疫状况及猪伪狂犬病毒感染情况,2018年在湖南省14个市州208个规模猪场采集4288份猪血清,采用ELISA方法检测血清中的伪狂犬病毒抗体。结果显示,免疫猪PRV gB抗体个体阳性率为78.1%,PRV gE抗体个体阳性率为21.0%,场阳性率为38.9%;从不同养殖规模来看,存栏量在1000头以上的大型猪场PRV gE抗体阳性率最高,为22.9%;在季节分布上,夏季猪群的PRV gE抗体阳性率最高,为25.1%;在不同的年龄阶段中,以种母猪PRV gE抗体阳性率最高,为36.2%。表明猪伪狂犬病在湖南地区仍广泛流行,野毒感染情况较为普遍。

小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒双重荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

对GenBank中的小反刍兽疫野毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)及疫苗毒株的基因序列进行分析,设计两对引物和两条特异探针,建立小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒株的双重荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性检测表明,建立的双重荧光RT-PCR方法,可特异检测野毒(FAM通道)和疫苗毒(VIC通道)。灵敏度实验表明,FAM通道可检测到10^(-5)稀释度的RNA(3.576 ng/mL),VIC通道可检测到10^(-3)稀释度的RNA(27.6 ng/mL)。重复性实验表明,该双重荧光RT-PCR方法重复性较好。用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份组织样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且野毒检测结果与实验室确诊阳性结果一致,可以用于临床检测。

小反刍兽疫疫苗临床免疫效果试验

为评估小反刍兽疫弱毒活疫苗(75/1株)的临床免疫效果,通过免疫试验、免疫场的跟踪检测以及荧光RT-PCR检测方法,对疫苗免疫安全性、免疫抗体持续期、抗体效价消长情况进行了临床免疫测试和评估。结果显示,疫苗免疫安全性良好,免疫后14d可以检测到疫苗核酸,免疫后7d开始产生特异性抗体,抗体持续时间达12个月以上。研究表明临床用小反刍兽疫疫苗具有良好的免疫原性,可产生良好的临床免疫效果。