miR-525-5p、围脂滴蛋白3的表达与胶质瘤预后的关系研究

目的 探讨微核糖核酸-525-5p(mi R-525-5p)、围脂滴蛋白3(PLIN3)的表达与胶质瘤预后的关系。方法选取2018年2月至2020年7月青岛市市立医院收治的102例胶质瘤患者,收集术中部分瘤组织和瘤旁组织采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测mi R-525-5p、PLIN3 m RNA表达,免疫组织化学染色法检测PLIN3表达。通过Target Scan数据库预测mi R-525-5p与PLIN3的结合位点,分析二者在胶质瘤组织中表达的相关性。根据胶质瘤组织中PLIN3 m RNA表达均值分为高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制高/低PLIN3 m RNA表达胶质瘤患者生存曲线,多因素Cox回归分析胶质瘤患者预后影响因素。结果 与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中mi R-525-5p表达降低,PLIN3 m RNA表达升高(P<0.05)。与瘤旁组织比较,胶质瘤组织中PLIN3阳性率升高(P<0.05)。mi R-525-5p与PLIN3存在结合位点。mi R-525-5p与PLIN3 m RNA表达在胶质瘤组织中呈负相关(P<0.05)。PLIN3 m RNA高表达组3年总生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化、世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分级Ⅲ~Ⅳ级、PLIN3 m RNA≥1.86为胶质瘤患者死亡的独立危险因素(HR>1,P<0.05)。结论 胶质瘤组织中mi R-525-5p低表达和PLIN3 m RNA高表达,二者表达呈负相关,PLIN3 m RNA高表达与胶质瘤患者预后不良有关。

新型阳离子磷酸胆碱聚合物可作为反义寡核苷酸基因的运输载体

背景:病毒类基因载体虽然具有较高的转染效率,其安全性一直受到人们的质疑。目的:以阳离子磷酸胆碱聚合物作为基因药物运输的载体,研究其对人类c-myc反义寡核苷酸(AS-ODN)的负载和运输能力,并对其安全性和有效性进行评价,方法:应用原子转移自由基聚合法合成具有高度生物相容性的双嵌段磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70,并对其溶液进行表征。用DNA凝胶电泳法对MPC30-DEA70与针对AS-ODN生成不同N/P比值的基因复合物进行表征。将MPC30-DEA70/AS-OD基因复合物转染至体外培养的HEK293细胞,检测其细胞相容性、转染效率和细胞内转运机制。结果与结论:MPC30-DEA70在pH=4.0-11.0范围内的0.01 mol/L PBS中显示出高度水溶性,其正电性随pH值降低而增强。MPC30-DEA70/AS-ODN基因复合物在DNA凝胶电泳中显示出不同程度的电泳迟滞,随电性增强而显著。MTT法检测显示MPC30-DEA70对HEK293细胞株的毒性呈剂量依赖性,高浓度下细胞毒性显著增强。流式细胞术检测发现复合物的转染随N/P比值增加而显著增强;共聚焦显微镜观察到AS-ODN分子在细胞核内的转运,提示其有效的核定位。证实新型阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输反义寡核苷酸,是一种高效安全的非病毒类转基因载体。

曲妥珠单抗联合放疗对HER2高表达胃癌细胞的协同杀伤作用

目的:研究曲妥珠单抗联合放疗对人类表皮生长因子受体2(HER2)高表达胃癌细胞NCI-N87的协同杀伤作用。方法:应用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法筛选曲妥珠单抗杀伤胃癌细胞的IC20浓度;将NCI-N87分为对照组与加药组,两组依次给予照射剂量不同的X线(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy),应用克隆形成实验分析两者的杀伤作用;凋亡实验分4组:对照、曲妥珠单抗、2 Gy照射、2 Gy照射+曲妥珠单抗,流式细胞仪用于测定凋亡率。结果:IC20为10μg/ml。与单纯放疗相比,曲妥珠单抗与放疗同时作用可明显降低细胞存活率,差异具有统计学意义(P<0.05)。凋亡率为对照(3.80±0.26)%、曲妥珠单抗(4.84±0.14)%、2 Gy照射(6.83±0.17)%、联合组(13.60±0.35)%,曲妥珠单抗或照射组均可增加NCI-N87细胞凋亡率,其中凋亡率在联合组中最高(P<0.05)。结论:曲妥珠单抗和放疗可协同杀伤HER2高表达的胃癌细胞。

双嵌段磷酸胆碱基聚合物作为c-myc AS-ODN基因运输载体研究

目的 探讨双嵌段磷酸胆碱基聚合物MPC30-DEA70 作为反义寡核苷酸（AS-ODN）运输载体的安全性和有效性.方法 将载体MPC30-DEA70（N）与c-myc AS-ODN（P）在不同N/P比值的条件下复合,应用DNA凝胶电泳法、荧光显微镜、流式细胞术和四甲基偶氮唑盐（MTT）法对复合物溶液进行检测,观察复合物在HeLa细胞中的转染情况.结果 c-myc AS-ODN能与载体MPC30-DEA70电性中和,N/P比值越大复合物正电性越强;MPC30-DEA70/AS-ODN复合物能够进入细胞,转染效率随着N/P比值增大而增大;同时随着N/P比值增大复合物对细胞的增殖抑制作用显著增强.结论 MPC30-DEA70可以有效负载和运输c-myc AS-ODN,抑制HeLa细胞增殖,是一种新型的、安全有效的非病毒类转基因载体.

放射治疗与免疫治疗之间的关系

放射治疗是诊断后一半以上癌症患者的主要抗癌方式,与化学疗法相比,其具有局部肿瘤控制的优势,且系统性副作用相对较少。然而,放射治疗的疗效受到获得性肿瘤耐药性的限制,导致复发和转移的风险。自从免疫疗法在癌症治疗中出现以来,现在已经确定放疗与此类治疗的关联可以促进放射诱导的抗肿瘤免疫的出现。因此,这种组合近年来引起了科学界越来越大的兴趣,并正在大量临床前模型中进行研究,也在许多临床试验中付诸实践。在这篇综述中,我们旨在总结放射治疗与免疫系统之间的相互影响以及放射治疗与免疫治疗相结合对肿瘤治疗效果的影响。

新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC_(30)-DEA_(70)转染血管平滑肌细胞的体外研究

目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70(PC聚合物)转染进入体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)的安全性和有效性。方法应用ATRP法合成具有高度生物相容性的PC聚合物MPC30-DEA70;植块贴壁法原代培养大鼠VSMCs;MTT法检测PC聚合物与VSMCs的细胞相容性;应用FM及CLSM观察PC聚合物在细胞内的分布和定位;FCM法检测PC聚合物在VSMCs中的转染效率和荧光强度。结果 PC聚合物与原代培养的VSMCs具有较好的细胞相容性,随浓度的增高表现出一定的细胞毒性;PC聚合物可以转染进入VSMCs,大部分分布于细胞质及核周围,少部分可以进入到细胞核内;PC聚合物在VSMCs中具有较高的转染效率和荧光强度,并呈剂量依赖性。结论 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70可以转染进入血管平滑肌细胞,是一种安全有效的非病毒类药物运输载体。

阳离子磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸转染大鼠心肌成纤维细胞的研究

目的:探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体的反义寡核苷酸(AS-ODN)对离体培养的大鼠心肌成纤维细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法:MTT法检测MPC与心肌成纤维细胞的细胞相容性;应用激光扫描共聚焦显微镜(CLAM)检测复合物在细胞内的定位,流式细胞仪(FCM)检测转染效率及荧光强度,Western blot检测AT1受体蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:MPC浓度>40μg/mL时才出现明显细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围,少量分布于细胞核内。流式结果显示转染效率及荧光强度随N/P比增加而明显增大。Western blot结果显示,转染复合物后各组细胞AT1受体及Ⅰ型胶原蛋白的表达也相应减少。结论:MPC30-DEA70在安全浓度范围内就能够携带AT1R-ASODN以较高的转染率进入离体培养的大鼠心肌成纤维细胞,并成功靶向抑制AT1R及Ⅰ型胶原蛋白的表达。从而可以推断阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载反义寡核苷酸(AS-ODN),靶向性抑制基因的表达,为新型非病毒性基因载体的研究提供了一定的理论依据。

阿托伐他汀对血管平滑肌细胞中转染的TNF-α启动子活性影响的研究

目的:探讨阿托伐他汀(Atv)在转录水平的抗炎作用机制。方法:将构建好的含有人类TNF-α启动子的以虫荧光素酶(Luciferase)为报告基因的质粒DNA转染至体外培养的平滑肌细胞中,以AngⅡ刺激并经不同浓度的Atv处理后,通过检测Luciferase的活性来观察启动子活性的变化。结果:启动子在VSMCs中可高效稳定的表达;而经AngⅡ刺激的VSMCs中,TNF-α启动子活性较未受刺激时明显上调(P<0.05)。在VSMCs中0.1~10μmol/L的Atv可抑制经AngⅡ刺激后上调表达的TNF-α启动子活性,并且呈现剂量依赖关系(P<0.05)。结论:Atv对TNF-α启动子活性的抑制,证明了其对促炎细胞因子在转录水平的潜在抑制作用。

超声引导下经皮腹膜后穿刺置管引流前先行腹腔穿刺引流对重症胰腺炎的应用价值探讨

目的探讨超声引导下经皮腹膜后穿刺置管引流前先行腹腔穿刺引流对重症胰腺炎的临床应用价值。方法选取2014年3月至2018年11月山东省青岛市第八人民医院收治的重症胰腺炎患者168例,随机分为观察组和对照组,每组84例。观察组在超声引导下经皮腹膜后穿刺置管引流前先进行腹腔穿刺引流,对照组仅行超声引导下经皮腹膜后穿刺置管引流。观察并记录两组患者的实验室检查指标、时间指标、医疗费用、严重并发症发生情况、中转手术及感染发生情况并进行组间比较。结果治疗前两组血淀粉酶、尿淀粉酶、白细胞计数、血钙和血糖水平比较差异无显著性(P>0.05);治疗后两组血淀粉酶、尿淀粉酶、白细胞计数、血糖水平均明显低于治疗前,且观察组明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05);治疗后两组血钙水平明显高于治疗前,且观察组明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。观察组患者的器官衰竭持续时间、积液消失时间、C反应蛋白恢复正常时间、外周血白细胞恢复正常时间、全身炎症反应综合征消失时间、体温恢复正常时间、血淀粉酶恢复正常时间、尿淀粉酶恢复正常时间、抗生素使用时间、住院时间、ICU住院时间、医疗费用明显低于对照组,多器官功能衰竭、急性呼吸窘迫综合征、多器官功能障碍综合征及中转手术发生率也低于对照组,差异均有显著性(P<0.05),但两组患者感染发生率比较差异无显著性(P>0.05)。结论超声引导下经皮腹膜后穿刺置管引流前先行腹腔穿刺引流可在不增加临床感染风险的情况下有效缩短病情缓解时间,降低严重并发症的发生率,提高临床治疗有效率。