深圳市宝安区873例β-地中海贫血携带者基因谱及血常规特征分析

目的分析深圳市宝安区妇幼保健院873例β-地中海贫血(简称地贫)携带者基因谱及不同基因型携带者的血常规特征。方法对2017年1月至2020年12月于宝安区妇幼保健院就诊的873例女性进行血常规和地贫基因检测,采用血细胞分析仪检测红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH),采用PCR-反向斑点杂交法检测非缺失型α-地贫和β-地贫,采用缺口聚合酶链反应(GAP-PCR)凝胶电泳法检测缺失型α-地贫。结果在755例β-地贫单纯杂合子携带者中检测到13种基因型,包括4种β^(+)-地贫、8种β^(0)-地贫和1种β^(E)-地贫。β^(E)-、β^(+)-和β^(0)-3组地贫携带者Hb、MCV和MCH依次降低,RBC依次增高,比较差异有统计学意义(P<0.05)。在43例α-地贫合并β^(+)-地贫携带者中检测到9种基因型,在75例α-地贫合并β^(0)-地贫携带者中检测到17种基因型。与β^(+)-地贫或β^(0)-地贫单纯杂合子相比,β^(+)-地贫或β^(0)-携带者合并α^(+)-或α^(0)-地贫时,Hb、MCV和MCH明显增高,比较差异有统计学意义(P<0.05),β^(0)-地贫携带者合并α^(0)-地贫时,Hb、MCV和MCH明显高于合并α^(+)-地贫,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论β-地贫携带者呈现明显的分子异质性,临床表现为小细胞低色素性贫血,但贫血程度差异性很大。合并α-地贫可缓解β-地贫携带者的贫血表现,β^(0)-地贫合并α^(0)-地贫比合并α^(+)-地贫表型更轻,在产前筛查中应予以重视,避免漏检。

胎儿宫内人巨细胞病毒感染的产前诊断及宫内感染胎儿妊娠结局

目的探讨2016-2021年深圳市宝安区妇幼保健院人巨细胞病毒(HCMV)胎儿宫内感染率,以及宫内感染胎儿的超声表现和妊娠结局。方法对4685例行羊水穿刺孕妇的羊水标本进行HCMVDNA检测,并回顾性分析部分病例的HCMV-IgG和IgM检测结果,对11例DNA阳性病例进行染色体核型分析、超声检查并追踪妊娠结局。结果4685例羊水标本中4674例HCMV-DNA阴性,其中2076例孕妇中26例血清HCMVIgM阳性,1482例中IgG阳性1454例。11例孕妇羊水HCMV-DNA阳性,对11例孕妇进行血清HCMV-IgM、IgG和DNA检测,并对尿液进行HCMV-DNA检测,其中HCMV-IgM阳性3例,阴性8例;HCMV-IgG阳性8例,未检测3例;孕妇尿液HCMV-DNA阳性2例,阴性7例,未检测2例;血清HCMV-DNA阴性9例,未检测2例。11例HCMV宫内感染的孕妇中,有2例穿刺前HCMV-IgM阳性,9例穿刺原因为胎儿超声异常或唐氏筛查高风险;7例超声检查结果有HCMV感染相关表现,其中6例引产,1例出生后未发现异常,4例超声未提示感染相关表现,正常分娩后未发现异常。结论羊水HCMV-DNA检测可准确诊断先天性CMV感染,孕妇血清Ig和DNA检测对诊断参考价值不大。胎儿宫内HCMV感染后,部分会出现超声异常,但部分感染胎儿出生后未致病。

深圳地区女性生殖道HPV感染及基因型结果分析

目的：研究深圳市宝安区女性人乳头瘤病毒（HPV）感染情况，以及不同年龄段 HPV 阳性率和各亚型的分布情况。方法采用聚合酶链式反应-反向斑点杂交法（PCR-RDB）对2011年1月至2012年12月在深圳市宝安区妇幼保健院就诊的患者（2627例）进行23种 HPV 基因分型检测。结果2627例样本中 HPV 阳性率为23．94％（629例）。其中单一低危型感染占15．10％，以 HPV43型为主；单一高危型感染占55．17％，以 HPV52、HPV16、HPV58型为主；混合感染占29．73％。15～＜21岁、21～＜31岁、31～＜41岁、41～50岁与＞50岁年龄组 HPV 感染率分别为50．0％、24．7％、20．8％、25．8％、42．1％，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论深圳市宝安地区 HPV 感染率为23．94％，基因型分布以 HPV 52、16、58、43型为主，15～20岁年龄段感染率高于其他年龄段。

多重PCR检测毒力型艰难梭菌的方法学研究及应用

目的建立多重PCR方法检测毒力型艰难梭菌。方法设计艰难梭菌种特异tpi引物和毒力基因tcdA、tcdB特异性引物,建立多重PCR方法。利用已知菌株,验证方法的特异性和最低检出限。与厌氧培养法、ELISA法比较其检测临床菌株和其毒素分泌的准确性。结果多重PCR方法检测艰难梭菌的最低检出浓度为0.7 pg/μ1,特异性为100%。53株厌氧培养法鉴定的艰难梭菌临床分离株,多重PCR方法检测tpi基因均为阳性,其中tcdA+/tcdB+为39株,tcdA-/tcdB-为14株。ELISA法检测毒素A/B显示23株为阳性、30株为阴性。23株ELISA法毒素A/B阳性的艰难梭菌多重PCR方法检测结果均为tcdA+/tcdB+。结论多重PCR方法可用于检测毒力型艰难梭菌具有较高的临床应用价值。

高胆血红素血症新生儿细胞因子表达水平的探讨

目的:探讨某些细胞因子在病理性高胆血红素血症新生儿中临床意义。方法:将病理性高胆血红素血症新生儿分为3组,无菌采集病理性高胆血红素血症新生儿股动脉血清,均采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定TNF-α、TNF-β、GM-CSF、sIL-2R的表达水平。结果:①高胆一组与高胆二组细胞因子比较,仅GM-CSF有显著性统计学意义(P<0.01)。②高胆一组与高胆三组细胞因子比较,仅TNF-α有显著统计学意义(P<0.01)。③高胆二组与高胆三组细胞因子比较,TNF-α、TNF-β、GM-CSF有显著统计学意义(P<0.01)。④高胆三个组与正常组比较,TB IL、DB IL、TNF-α、TNF-β、GM-CSF均有显著统计学意义(P<0.01),仅sIL-2R无统计学意义(P>0.05)。结论:TNF-α、TNF-β、GM-CSF可做为病理性高胆血红素血症新生儿诊疗指标,为围产期病理性高胆血红素血症新生儿早期干预及其保健提供基础免疫学理论依据。

羊水细胞培养技术的临床应用

目的探索羊水细胞染色体培养改良方法,提高培养、收获成功率,满足临床诊断需要。方法对493例羊水标本进行细胞培养和染色体收获,并对实验细节进行优化,建立标准操作程序。结果羊水培养成功率99.8%(492/493),发现21-三体6例、18-三体2例、其他异常2例。结论采取严格质量控制;保留换液后的上清,解决因收获失败无法诊断的问题;采取肝素抗凝等,消除母血细胞干扰,可使羊水细胞培养成功。

实时PCR和颗粒凝集法检测儿童呼吸道肺炎支原体感染

目的分析呼吸道感染儿童中肺炎支原体的感染情况,比较肺炎支原体核酸(MP-DNA)和抗体(MP-Ab)检测结果。方法收集2011年深圳市宝安区妇幼保健院儿科门诊及住院呼吸道感染患者2 781例,利用实时荧光PCR和颗粒凝集法分别检测MP-DNA和MP-Ab。利用McNemar's和Kappa检验比较两种方法检测结果;利用χ2检验比较不同季节和年龄段儿童肺炎支原体感染率。结果①MP-Ab阳性率(19.17%)明显高于MP-DNA(5.57%)(χ2=257.0,P<0.001),两法间的一致性较差(kappa=0.115;95%CI,0.076～0.154);②MP-Ab滴度为<1∶40、1∶40、1∶80、1∶160及≥1∶320组中MP-DNA的阳性率分别为4.2%、6.2%、9.2%、10.0%及22.2%,差异有统计学差异(χ2=99.48,P<0.001);③儿童MP冬季的感染率(31.01%)明显高于其它三季(P<0.001)。④不同年龄段患儿MP感染率存在差异(χ2=378.209,P<0.001),≥6岁年龄段最高(59.66%)。结论①MP-Ab检测MP感染的阳性率高于MP-DNA,MP-DNA的阳性率随抗体滴度的增高而增加;②儿童肺炎支原体感染有季节性及年龄段差异。

实时PCR和PCR-RDB法检测人乳头瘤病毒的比对研究

目的：比较实时 PCR 法和 PCR-反向点杂交法（PCR-RDB）检测 HPV 的一致性。方法收集109份女性生殖道样本，利用实时 PCR 法和 PCR-RDB 法分别检测 HPV 感染和基因型分布情况，不一致样本采用 PCR-悬浮芯片杂交法复检。结果83.5％（91／109）的样本两种方法结果一致（kappa＝0.671），18例不一致样本 PCR-悬浮芯片杂交法复检显示7例与实时 PCR相符，11例与 PCR-RDB 相符；高、低病毒载量组间 PCR-RDB 法的检测结果差异无统计学意义（χ2＝1.476，P ＝0.224）。结论实时 PCR 和 PCR-RDB 两法用于 HPV 检测一致性一般；HPV 病毒载量在103～108范围内时 PCR-RDB 法的阳性率较稳定。

84株肺炎克雷伯杆菌耐药性分析

目的：探讨肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的耐药性。方法：采用Micro Scan auto SCAN4微生物分析仪测定84株肺炎克雷伯杆菌的耐药性。结果：肺炎克雷伯杆菌对氨苄青霉素的耐药率超过94．0％，氧哌嗪青霉素耐药率83．3％，亚胺硫霉素耐药率15.5％，其余药物耐药率为25．0％～76．2％。结论：亚胺硫霉素对肺炎克雷伯杆菌的耐药率最低．应作为治疗重症肺炎克雷伯杆菌感染的首选用药。

α地中海贫血不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性研究

目的:探讨α地中海贫血(简称地贫)不同基因型携带(患)者红细胞参数的差异性。方法:回顾性分析深圳市宝安区妇幼保健院2012~2016年确诊的1610例女性α地贫携带(患)者红细胞参数,对照组为1849例非地贫健康妇女。采用PCR-反向斑点杂交法检测3种非缺失型α地贫,采用Gap-PCR凝胶电泳法检测3种缺失型α地贫,采用Beckman Coulter LH750血细胞分析仪测定红细胞数量(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)。结果:对照组、静止型α地贫、标准型α地贫和HbH病Hb、MCV、MCH和MCHC依次递减(P<0.05);对照组、静止型α地贫和标准型α地贫RBC依次增高(P<0.05),但HbH病RBC数量较标准型α地贫降低(P<0.05)。静止型α地贫α^(QS)α/组较其它4型(α^(CS)α/、α^(WS)α/、-α^(3.7)/和-α^(4.2)/)RBC增高(P<0.05),MCV和MCH降低(P<0.05)。标准型α地贫α~0-杂合组RBC比α^+-纯合或双重杂合组增高(P<0.05),MCV和MCH降低(P<0.05)。HbH病α^(WS)α/--^(SEA)、-α^(3.7)/--^(SEA)或-α^(4.2)/--^(SEA)、α^(CS)α/--^(SEA)或α^(QS)α/--^(SEA)3组Hb依次降低(P<0.05),-α^(3.7)/--^(SEA)或-α^(4.2)/--^(SEA)组MCV和MCH比其他两组降低(P<0.05),α^(CS)α/--^(SEA)或α^(QS)α/--^(SEA)组RBC比其它两组降低(P<0.05)。结论:α地贫携带(患)者随着缺失或突变基因数量的增加,Hb、MCV、MHC和MCHC降低,RBC增高,但部分严重贫血的基因型RBC会降低;各组内不同基因型红细胞参数变化各有特点,突变型引起的贫血重于缺失型,但α^(WS)α/--^(SEA)型贫血轻于其他类型HbH病。

地中海贫血携带(患)者基因型分布及HbA_2参数特征

目的分析地中海贫血(简称地贫)携带(患)者基因型分布及血红蛋白(Hb)A_2的参数特征。方法回顾分析2 194例α-地贫和970例β-地贫女性携带(患)者的基因型分布以及其中1 438例α-地贫和646例β-地贫携带(患)者HbA_2的水平。选取1 629名非地贫健康女性,作为对照组。结果α-地贫组分为静止型组(740例)、标准型组(1 400例)和HbH病组(54例)。静止型组有5种基因型,以-α3.7/αα和-α4.2/αα为主;标准型组有9种基因型,以--SEA/αα为主;HbH病组有5种基因型,以-α3.7/--SEA为主。对照组、静止型组、标准型组和HbH病组的HbA_2水平依次降低(P<0.05),但对照组与静止型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。β-地贫组分为βE-地贫组(26例)、β+-地贫组(400例)和β0-地贫组(544例),βE-地贫组只有βCD26/βN 1种基因型;β+-地贫组有4种基因型,以βIVS-Ⅱ-654/βN和β-28/βN为主;β0-地贫组有8种基因型,以βCD41-42/βN和βCD17/βN为主。对照组、β+-地贫组、β0-地贫组和βE-地贫组的HbA_2水平依次升高(P<0.05)。结论 HbA_2对β-地贫和HbH病的筛查参考价值较大,遗传咨询中应同时结合血常规检测结果进行分析,从而避免静止型、标准型的漏检。

地中海贫血实验室筛查指标评价

目的探讨多项实验室指标用于筛查地中海贫血(简称地贫)基因携带者的临床应用价值。方法选取在深圳市宝安区妇幼保健院体检、婚检和产检的人员1 373例,对其均进行血常规血细胞分析、血红蛋白成份分析和地贫基因诊断。以基因诊断为金标准,对已明确诊断的α-地贫组548例、β-地贫组248例、α-合并β-地贫组33例和非地贫组544例,进行红细胞参数[红细胞数量(red blood cell count,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,HB)含量、红细胞压积(hematocrit,HCT)、平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、平均血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC)和血红蛋白A2(hemoglobin A2,Hb A2)含量]比较;计算MCV、MCH和Hb A23项血液学指标联合筛查结果的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果地贫组与非地贫组比较,地贫组HB、HCT、MCV、MCH和MCHC均减低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与非地贫组相比较,β地贫组Hb A2值明显升高(P<0.05)。MCV与MCH 2项平行联合筛查地贫的灵敏度及特异度分别为94.0%和82.9%;MCV、MCH和Hb A2-HPLC 3项平行联合筛查地贫的灵敏度及特异度为97.7%和39.2%。结论 Hb A2定量分析是筛查β-地贫极有价值的实验室指标,但对于筛查α-地贫敏感性较差,漏检率高。MCV、MCH两者平行联合或与Hb A2-HPLC三者平行联合筛查有较高的检测灵敏度,但特异度不甚理想。因此在进行地贫筛查时,需综合分析实验室各项指标,以降低漏诊率。

正常足月分娩母亲及新生儿血清中GM-CSF与SIL-2R的表达

目的:探讨正常足月分娩母亲及新生儿血清中GM-CSF、SIL-2R表达水平,为围产期母亲及新生儿系统保键提供基础免疫数据。方法:无菌采集正常足月分娩母亲静脉、出生5min新生儿脐静脉及3天新生儿股静脉血,用美国RD有限公司提供的试剂,采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测GM-CSF、SIL-2R表达水平。结果:①出生5min新生儿GM-CSF、SIL-2R及出生3天新生儿SIL-2R与母亲表达水平比较,无统计学意义(P>0.05)。②出生3天新生儿GM-CSF与母亲表达水平比较,差异有非常显著性(P<0.01)。结论:深圳正常足月分娩母亲及新生儿血清中GM-CSF、SIL-2R的表达水平以出生3天新生儿GM-CSF表达水平升高,是新生儿在新环境中生长发育的生理性需求;为围产期母亲及新生儿系统保健提供了基础免疫数据。

健康足月分娩母亲及新生儿血清中EGF的表达水平

目的:探讨健康足月分娩母亲及新生儿表皮生长因子(EGF)在血清中的表达水平,为围产期母亲及新生儿保健提供基础免疫数据。方法:无菌采集健康足月分娩母亲静脉血、出生5min新生儿脐静脉血及3天新生儿股静脉血,均分离血清。由美国RD有限公司提供试剂,采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定EGF的表达水平。结果:①健康足月分娩出生5min、3天新生儿EGF表达水平较高,随着出生天数递增而升高。②与母亲比较,EGF表达水平差异有非常显著性(P<0.01)。结论:掌握了深圳健康足月分娩母亲及新生儿EGF表达水平;新生儿随着出生天数的递增EGF水平升高,是机体生长发育的生理性需要;为围产期母亲、新生儿系统保健提供了基础免疫数据。

肿瘤坏死因子在正常足月分娩母亲及新生儿的表达

目的:探讨正常足月分娩母亲及新生儿肿瘤坏死因子(TNF)的表达水平,为围产期母亲及新生儿系统保健提供基础免疫数据。方法:无菌采集正常足月分娩母亲静脉血、出生5min新生儿脐静脉血及3天新生儿股静脉血,用美国RD有限公司提供的试剂,采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定肿瘤坏死因子的表达水平。结果:①正常足月分娩出生5min、3天健康新生儿TNF-α、TNF-β表达水平较高,并随着出生天数的递增而升高(P<0.01)。②与母亲比较差异均有非常显著性(P<0.01)。结论:了解了深圳正常足月分娩母亲及新生儿TNF的表达水平;新生儿随着出生天数的递增,体内TNF表达水平增高,这是人体生长、发育时间段的生理性需要;为围产期母亲及新生儿系统保健提供了基础免疫数据。

婴儿艰难梭菌携带状况及菌株特征研究

目的调查婴儿艰难梭菌的携带状况及菌株特征。方法收集2015年8-11月在该院住院或门诊治疗的1岁内婴儿粪便标本238份,利用免疫层析法快速初筛艰难梭菌,阳性标本再利用CDIF平板进行厌氧培养以获得菌株,利用PCR方法检测艰难梭菌毒素A、B的编码基因tcdA、tcdB和二元毒素编码基因cdtA、cdtB,运用slpA测序分型(slpA ST)方法对菌株进行基因分型。结果 238份粪便标本共分离出50株艰难梭菌,<3月、3~<6月和6月至1岁三组婴儿艰难梭菌的分离率分别为9.3%,17.6%和27.3%,三组见比较差异有统计学意义(χ~2=6.940,P=0.031<0.05)。52.0%(26/50)的菌株为产毒株,其中69.2%(18/26)的菌株产毒模式为tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-。50株艰难梭菌可分为11种slpA ST型,产毒株最常见的基因型为slpA ST fr-02和kr-02,而非产毒株则为xr-03。结论 1岁内婴儿艰难梭菌携带率较高,且过半为产毒株,大多同时产毒素A和B。产毒株与非产毒株的基因型存在差别。

艰难梭菌婴幼儿分离株毒力及基因型分布研究

目的明确深圳地区婴幼儿粪便中分离出的艰难梭菌的毒力及其基因型。方法收集深圳市宝安区妇幼保健院2014-2015年分离出的49株艰难梭菌菌株,PCR检测其毒素A、B的编码基因tcd A、tcd B的携带状况,数字化PCR-核糖体分型方法进行基因分型。结果 49株艰难梭菌tcd A、tcd B携带率分别为44.9%(22/49)和59.2%(29/49),其中22株tcd A、tcd B均为阳性,7株为tcd A阴性、tcd B阳性;49株菌可分为22种核糖体型,最常见的核糖体型为RT017(7/49,14.3%),BA03(5/49,10.2%),BA16(5/49,10.2%)和BA13(4/49,8.2%)。7株RT017菌株均为tcd A-tcd B+,而最常见的tcd A^+tcd B^+菌株(44.9%,22/49)则来自RT017以外的15种核糖体型。结论深圳地区婴幼儿中分离出的艰难梭菌半数以上为产毒株,且产毒株多同时携带tcd A、tcd B基因;基因型则以RT017为主,且均为产毒素B而不产毒素A菌株。

低比例母体细胞污染对α-地中海贫血产前诊断的影响研究

目的研究低比例(<10%)母体细胞污染对α-地中海贫血产前诊断的影响,为后续进行相关的高灵敏度母体细胞污染鉴定提供前期基础。方法选取2019年1—10月在深圳市宝安区妇幼保健院确诊为Bart’s水肿胎儿(基因型为--SEA/--SEA)的样本4例及正常对照孕妇的样本4例(基因型为αα/αα),建立母体细胞污染浓度梯度为50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%模型。研究现行常用的荧光定量PCR技术的鉴定能力及低比例母体细胞污染对α-地中海贫血基因分型结果的影响。结果荧光定量PCR技术对于母体细胞污染比例为12.5%的鉴定能力(25%,1/4)已不可靠,对于6.25%及以下均无法鉴定。同时,低至3.125%的母体细胞污染仍能够严重影响α-地中海贫血,尤其是点突变型的基因分型结果,造成误判。结论低比例母体细胞污染使用现有荧光定量PCR技术容易漏检,且影响这类α-地中海贫血基因分型结果。

Beckman化学发光检测系统促甲状腺素性能评价

目的评价Beckman Access全自动化学发光免疫分析仪测定促甲状腺激素（TSH）的分析性能。方法用Beckman Access全自动化学发光免疫分析仪测定相应要求标本的TSH含量，分别计算批内精誊度、批间精密度、偏差和可报告范围以及分析灵敏度。结果TSH的批内精密度为3．5O％，批间精密度4．80％；偏差3．4％;可报告范围0．01～150．0mIU／L；检测低限为0．006mIU／L，生物检测限为O．024mIU／L，功能灵敏度为0．024mIU／L。结论Beckman Access化学发光检测系统测定TSH具有重复性好、可报告范围宽、灵敏度高等优点，适合于临床应用。

两个不同检测系统血糖测定结果的偏差评估与可比性研究

目的通过对两个检测系统（OlympusAU640和Vitros350）方法进行对比分析，评估两个系统间检测血糖（Glu）结果的偏差是否可以接受。方法参照CLSI《EP9-A2文件》的要求，以Olympus AU 640检测系统为目标检测系统（葡萄糖氧化酶法）、Vitros350检测系统为待评检测系统（干化学法）测定Glu，分别测定朗道质控物（水平2和水平3）各20次和新鲜血浆标本48份。结果新鲜血浆标本Glu测定经配对t检验检测系统间有统计学意义（P〈0．001），相关系数0.9988。两检测系统测定Glu的不精密度变异系数均小于3．3％，以检测系统1为目标检测系统，临床可接受性能评价检测系统2未超过T±5％范围。结论两个不同检测系统测定Glu结果存在偏倚，但具有可比性。