短串联重复序列D7S2201基因座的群体遗传学研究

用扩增片段长度多态性技术分析短串联重复序列D7S2201基因座的遗传多态性，在262个中国成都地区汉族无关个体及119个泰国曼谷地区泰人无关个体中分别发现7个和5个等位基因，首次获得该基因座在两群体中的频率分布，其等位基因片段大小范围为100～124bp。两群体的基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。该基因座在两群体中的个人识别能力（PD）、杂合度（H）、多态性信息含量（CPI）及非父排除率（PE）分别为0.7038、0.5992、0.4789、0.2900和0.7351、0.5882、0.5012、0.2770。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。χ2检验表明两群体间等位基因频率分布无显著性差异。

片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法

目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时在两个等位基因特异性引物3'端第3或第4位碱基引入错配以增加特异性,下游为公用引物。PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP纯合子为长度不同的单一谱带,杂合子则为两条带,其结果与直接测序完全一致。两条特异性上游引物3'端第3或第4位碱基引入错配后非特异性延伸显著减少,且对PCR反应条件的严格性要求明显降低。结论片段长度差异等位基因特异性PCR是一种简单快速而有效的SNP分型新方法;两条特异性引物3'端第3。

大鼠液压冲击脑损伤TGF-β1及其受体TβR I的表达

目的观察脑损伤后TGF-β1及其受体TβRI蛋白表达及其时序性变化,探讨脑损伤的分子机制及法医学脑损伤时间推断。方法用免疫组织化学方法观察大鼠液压冲击脑损伤后TGF-β1及其受体TβRI蛋白在伤后不同时间(30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d)的表达情况,以正常大鼠及手术大鼠作为对照。结果 (1)正常及手术对照组大鼠脑组织内有低水平的TGF-β1及TβRI表达;(2)脑损伤后1～3d,大脑皮质和脑干TGF-β1/TβRI蛋白表达逐渐增加,7 d时仍维持在高表达水平;(3)海马冲击后12 h～1 d逐渐增加,3 d时仍处于高表达水平,7 d时已开始下降。结论脑损伤可诱导TGF-β1/TβRI基因在脑内表达,其时序性改变可望用于法医学脑损伤时间推断。

武汉汉族群体3个多拷贝Y-STR基因座的遗传多态性

目的提供DYS385、DYS459和DYS464基因座的群体遗传学资料。方法用荧光标记引物及ABI 3100型基因分析仪对武汉地区176名汉族男性无关个体的DYS385、DYS459和DYS464 3个多拷贝Y-STR基因座进行分型。结果在DYS385和DYS459基因座的个体,可观察到1～2个不同长度的扩增产物;DYS464基因座个体,可观察到1～4个不同长度的扩增产物。DYS385基因座检出14个等位基因及47种单倍型,DYS459检出4个等位基因及7种单倍型,DYS464检出9个等位基因及51种单倍型,其单倍型多样性分别为0.9591、0.6047和0.9560。3个基因座构成的联合单倍型共有133种,其多样性值达0.9909。结论3个多拷贝Y-STR基因座均为高多态性的遗传标记,联合应用具有较高的个体分辨能力。

卡方检验和精确检验在HWE检验中的应用

综述了几种不同数据处理方法卡方检验和精确检验在法医人类遗传标记群体遗传学研究Hardy-Wein鄄berg平衡检验中的应用。强调了精确检验在多等位基因标记系统,尤其是以VNTR、STR为代表的法医DNA分析研究中的重要性。

大鼠液压冲击脑损伤后bFGF及其受体FGFR1的表达

目的观察脑损伤后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体FGFR1的表达及其时序性变化,探讨脑损伤的分子机制及法医学脑损伤时间推断。方法用免疫组织化学技术观察大鼠侧位中度液压冲击脑损伤后bFGF及FGFR1蛋白在伤后不同时间(30min,1,3,6,12h,1,3,7d)的表达情况,以正常大鼠及手术大鼠作为对照。结果正常对照组和手术对照组大鼠脑组织内有低水平的bFGF和FGFR1表达。脑冲击伤后6h,大脑皮层和脑干bFGF和FGFR1蛋白表达开始显著增加,1～3d达高峰,7d时已有所下降;海马冲击后3h即开始增加,1d达峰值,此后逐渐下降,7d时恢复正常。结论脑损伤可诱导bFGF/FGFR1的表达,提示机体对脑损伤存在自身保护机制,其表达的时序性改变可望用于法医学脑损伤时间推断。

武汉汉族群体23个Y染色体双等位基因标记遗传多态性研究

筛选汉族群体中具有多态性的Y染色体双等位基因标记并获取其群体遗传学数据。采用片段长度差异等位基因特异性PCR和PAGE技术对武汉地区160名男性汉族无关个体的23个Y染色体双等位基因标记（M7，M9，M50，M88，M89，M95，M111，M117，M119，M121，M122，M134，M159，M164，M175，M214，LINE1，MSY2，RPS4Y711，SRY＋465，IMS-Js7-164520，IMS-JST021354和IMS-Js7-003305）进行分型。除M50、M159和M164外，其余20个标记在武汉汉族群体中均具有遗传多态性，其基因多样性（GD）范围为0．0126～0．4855，共检出35种不同单体群组合（Hg1～35），单体群多样性（HD）为0．9471。表明20个Y染色体双等位基因标记组成的单体群具有较高的遗传多样性，在法医学应用和群体进化研究中具有较高的实用价值。

大鼠液压冲击脑损伤bFGF及其受体FGFR1 mRNA表达

目的 观察脑损伤后 bFGF及其受体 FGFRl mRNA表达及其时序性变化,探讨脑损伤的分子机制及法医学脑损伤时间推断。方法 用原位杂交(ISH)和RT-PCR技术观察大鼠液压冲击脑损伤后bFGF及FGFRl mRNA在伤后不同时间(30min、1h、3h、6h、12h、1d、3d、7d)的表达情况,以正常大鼠及手术大鼠作为对照。结果(1)正常及手术对照组大鼠脑组织内有低水平的bFGF及FGFRl mRNA表达;(2)脑损伤后6h～3d,大脑皮质和脑干bFGF/FGFRl mRNA水平逐渐增加,7d时已有所下降,但仍未恢复到基础水平;(3)海马冲击后3h即开始显著增加,3d开始下降,7d时已恢复到基础水平。结论 脑损伤可诱导bFGF/FGFRl基因表达,机体对脑损伤存在自身保护机制,其表达的时序性改变可望用于法医学脑损伤时间推断。

汉族人群DXS9898基因座的遗传多态性

目的研究汉族群体DXS9898基因座的遗传多态性,为法科学应用提供基础数据。方法应用PCR及PAG电泳技术,对成都地区汉族群体199名女性无关个体及97名男性无关个体进行群体遗传学调查。结果共检出6个等位基因,片段大小为189～214bp,其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。家系调查证实等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。女性样本杂合度为0.5930;男、女性样本个人识别能力(Dp)分别为0.5667、0.9420;父-母-女三联体鉴定的非父排除率(PE)为0.5862。结论DXS9898基因座在法科学个人识别及女性小孩的亲权鉴定中具有较高的实用价值。

成都地区汉族人群D2S441位点的遗传多态性研究

为研究 STR位点 D2S441的遗传多态性，为法医学应用提供基础数据，应用 PCR及 PAG电泳技术对 260名成都地区汉族无关个体进行了调查，共检出 9个等位基因及 26种基因型，首次获得汉族群体频率分布 ,其等位基因片段大小范围为 131～ 155bp。该位点基因型频率分布符合 Hardy－ Weinberg平衡。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。其个人识别能力（ Dp）、杂合度（ H）、多态性信息含量（ PIC）和非父排除率（ PE）分别为 0.9084、 0.7885、 0.7390和 0.5778，表明该位点在法医学个人识别及亲子鉴定中具有较高的实用价值。

微测序技术检测武汉汉族群体26个Y-SNPs的遗传多态性

目的研究汉族群体26个Y-SNPs的遗传多态性,探讨其在法医学和人类进化研究中的应用价值。方法自行设计引物并构建用于检测26个Y-SNPs的3个SNaPshot复合分型检测体系,然后用构建的复合分型检测体系对120名武汉汉族男性无关个体进行分型。结果成功构建了用于检测26个Y-SNPs的3组荧光复合扩增检测体系,每一复合体系中,同一位点的2个不同等位基因显示为不同颜色的产物峰,不同位点的等位基因之间片段大小不同。所有26个Y-SNPs在武汉汉族群体中均具有遗传多态性,120名武汉汉族男性个体中共检出26种单倍型,其频率范围为0.008 3～0.125 0,单倍型多样性为0.934 9。结论所构建的26个Y-SNPs荧光复合扩增检测体系具有简便、高效、准确的特点,在法医学应用和群体进化研究中具有一定实用价值,可作为Y-STRs标记的有效补充。

用新设计引物调查武汉汉族Penta D和Penta E基因座遗传多态性

目的 研究PentaD和PentaE基因座分型引物设计 ,调查PentaD和PentaE基因座在武汉汉族人群中的遗传多态性。方法 用重新设计的PentaD和PentaE基因座分型引物 ,采用热启动PCR和PAGE技术对 2 81名武汉地区汉族无关个体进行分型调查 ,并将其分型结果与Promega公司的PowerPlexTM16系统荧光标记复合扩增试剂盒分型结果进行比较。结果 新设计引物扩增产物的片段大小范围分别为 15 3～ 198bp和 10 7～ 2 12bp ,其分型结果与PowerPlexTM16系统的分型结果完全一致 ,且用银染法检测的灵敏度显著提高 (由 0 5ng提高到 0 2ng)。PentaD和PentaE基因座在武汉汉族群体分别检出 10个和 2 1个等位基因 ,其基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。家系调查证实了其等位基因的传递符合孟德尔遗传规律。两基因座的个体识别能力 (DP)分别为 0 92 62、 0 9860 ,非父排除率 (PE)分别为 0 665 1、 0 83 2 5。结论 新设计引物用于PentaD和PentaE基因座的分型检测准确可靠 ,两基因座多态性程度高 ,在法医学个人识别和亲子鉴定中具有使用价值。

中国成都汉族及泰国群体D7S2846基因座的遗传多态性

研究STR基因座D7S2 846的遗传多态性 ,为法科学应用提供基础数据。应用PCR及PAG电泳技术 ,对376名中国成都汉族无关个体及 131名泰国无关个体进行了调查。两群体分别检出 8个和 7个等位基因 ,首次获得该基因座基因在两群体中的频率分布。两群体基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。该基因座在两群体中的个人识别能力 (Dp)分别为 0 85 70、 0 86 0 2 ,杂合度 (H )分别为0 6 915、 0 6 870 ,多态性信息含量 (PIC)分别为 0 6 445、 0 6 5 5 3 ,非父排除率 (PE )分别为 0 415 2、 0 40 85。D7S2 846基因座在法医学个人识别及亲子鉴定中具有较高的实用价值。

单核苷酸多态性研究进展

单核甘酸多态性（ SNPs）是继 RFLP和微卫星多态性标记之后的新一代遗传标记系统，具有密度高、遗传稳定、分析易自动化等特点。 SNPs可通过电泳、 PCR、酶切及测序等方法检测，已广泛应用于基因作图、疾病相关性分析、群体遗传学及药物研究等领域。

武汉汉族8个Y染色体双等位基因标记遗传多态性

目的筛选汉族群体中具有多态性的Y染色体双等位基因标记并研究其等位基因及单体群频率分布, 为法医学应用和群体进化研究提供基础数据。方法采用片段长度差异等位基因特异性PCR和PAGE技术对武汉地区160名男性汉族无关个体的8个Y染色体双等位基因标记(M9、M89、M111、M119、M122、M134、IMS-JST003305 和SRY+465)进行分型。结果 8个双等位基因标记在武汉汉族群体中均具有遗传多态性,其基因多样性(GD)范围为 0．0126-0．4830,共检出9种不同单体群(Hg1～9),其单体群多样性(HD)为0．7776。结论 8个Y染色体双等位基因标记组成的单体群在法医学应用和群体进化研究中具有一定的实用价值,可作为Y-STRs标记的有效补充。

大鼠液压冲击脑损伤TGF-β1及其受体TβR mRNA的表达

目的 :研究脑损伤后转化生长因子β1(TGFβ1)及其 型受体 (TβR ) m RNA表达及其时序性变化 ,为脑损伤的分子病理诊断、法医学鉴定及临床治疗提供依据 ,进一步研究脑损伤的分子机制。方法 :用原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术观察大鼠液压冲击脑损伤后 TGFβ1及 TβR m RNA在伤后不同时间 (30分钟 ,1、3、6、12小时及 1、3和 7日 )的表达情况 ,以正常大鼠及手术大鼠作为对照。结果 :正常及手术对照组大鼠脑组织内有低水平的 TGFβ1及 TβR m RNA表达 ;脑损伤后 1日 ,大脑皮质和脑干TGFβ1/ TβR m RNA水平显著增加 ,3日达峰值 ,并至少维持达 1周时间 ;海马冲击后 12小时即显著增加 ,1～ 3日达高峰 ,7日时已开始下降。结论 :脑损伤可诱导 TGFβ1/ TβR 基因表达 ,提示机体对脑损伤存在自身保护机制 ,其表达的时序性改变可望用于法医学脑损伤的时间推断。

基因分型错误或异常的量化评估

基因分型错误或异常是质量控制和保障体系关注的重点,其中分型错误率的量化是实验室质量评估的一项重要指标,而现有的实验室质量控制体系却很少涉及。本文就常见基因分型错误或异常产生的原因、后果以及如何量化和最大限度降低其影响等方面进行了分析。

STR位点D19S253和D8S1179的法医学意义及应用研究

为评估STR位点D19S253和D8S1179的法医学应用价值，应用PCR和PAG垂直电泳技术对两位点的种属特异性，检测灵敏度，以及同一个体不同组织分型的同一性及不同基质和不同保存时间的斑痕分型等与法医应用有关的问题进行了研究，D19S253和D8S1179位点的检测灵敏度分别为0．25ng及0．5ng，同时两位点具有较高的种属特异性，同一性及较好重复性，且能够复合扩增，表明D19S253和D8S1179是法医学检案中较实用的两个STR标记。

KCNQ1内含子1a中STR基因座遗传多态性及PIA分型

目的调查汉族群体KCNQ1基因内含子1a中STR基因座的遗传多态性,并采用PIA分型技术确定等位基因的亲代来源。方法用PCR-STR分型技术对230例武汉汉族无关个体样本进行KCNQ1基因内含子1a中STR基因座分型检测;同时选用两种甲基化敏感的限制酶(msRE)HhaⅠ和HpaⅡ对家系中孩子的基因组DNA进行消化后,采用PIA分型技术检测父源等位基因。结果KCNQ1内含子1a中STR基因座在汉族人群中检出10个等位基因、24种基因型,其个体识别能力(PD)、多态性信息含量(PIC)和非父排除率(PE)分别为0.852、0.66和0.484。HhaⅠ和HpaⅡ可消化个体的母源等位基因,PIA分型仅能检测出单一的父源等位基因。结论KCNQ1内含子1a中STR基因座在汉族群体具有较高的遗传多态性,PIA分型技术可以确定个体等位基因的亲代来源,具有较高的法医学应用价值。