枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bglS)在酵母菌中的克隆与表达

将大肠杆菌质粒 pFG1中含枯草芽胞杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bg1S)的2.7kb EcoRI 片段克隆到大肠杆菌/酵母菌穿梭质粒上组建成杂种质粒 YCSH,转化 S.cerevisiae并得到表达。两种不同方向的插入子(YCSH1和 YCSH 5)在酵母菌中表达出的β-1,3-1,4葡聚糖酶活性相差2.3倍。根据酶作用底物专一性测定和酶反应的最适 pH 分析表明:YCSH中 bg1S 基因产物与出发菌株 B.subtilis 1.88的基本酶学特性完全相同,但 YCSH 中 bg1S基因在酶母中的表达水平远比大肠杆菌中低。

枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质研究

β-葡聚糖是大麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份,约占大麦总重量的10％。β-葡聚糖酶（Endo-1,3-1,4-β-Glucanase）能专一性地分解大麦β-葡聚糖,产生可利用的还原糖。因此,是啤酒酿造业,农副产品加工业中一个亟待开发应用的重要工业用酶。本文报道了对枯草杆菌（B.SubtiliS 1.88）中分离制备的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质的研究结果。1

七种蜂采花粉的化学成分分析

花粉的营养成份丰富,且具有特殊的药用功能。近年来,已经有不少关于混合花粉成份分析的报道。但是,有关单花种花粉成份系统研究的报道尚不多见。而这类研究,对于花粉的进一步应用和植物生殖生理的探讨,均具有潜在的意义。本文报道了云南七种常见食用花粉蛋白质、游离氨基酸、总氨基酸和矿物元素分析的方法与结果。

β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因亚克隆研究

β-1,3-1,4-葡聚糖酶（endo-1,3-1,4- -Glucanase）能专一性地分解大麦、燕麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份β-1,3-1,4-葡聚糖,产生还原糖,从而提高大麦和燕麦可利用糖源的含量,促进淀粉的释放。在啤酒酿造中,该酶在提高麦芽利用率,增加麦汁浸出量,加快糖化液和啤酒的过滤速度,避免啤酒浑浊等方面均有重要作用。最近,作者从Bacillus subtilis 1.88中分离到了含bgls基因的7.1kbEcoRI DNA片段,携带该片段的重组质粒pFG（表达出专一性降解大麦β-1,3-1,4-葡聚糖的酶活性。为了研究bgls基因的结构、功能和表达等特征,我们对bgls基因进行了亚克隆。

云南主要粮食和豆类作物籽粒氨基酸分析研究

随着人民生活的提高。品质育种已成为农作物育种的基本任务之一。作物籽粒的氨基酸含量与组成,是作物蛋白质营养水平评价的主要依据,也是品质育种的重要指标。分析研究粮食和豆类作物的氨基酸成份和含量,对于客观地评价它们的营养水平,科学地指导人们的营养消费。

云南古茶树(园)遗传多样性的ISSR分析

云南省保存有20多万亩古茶园，这些古茶树（阿萨姆变种Camellia sinensis vat．assamica）种质资源可能含有各种优良基因，对未来茶树良种选育有重要意义。本研究采用ISSR分子标记技术对云南省十个有代表性的古茶园遗传多样性进行分析，十个居群的多态位点百分率（P）为56．5％-90．9％；Nei’氏遗传距离（He）居群平均是0．281，阿萨姆变种水平内是0．461；Shannon多样性指数（HD）居群平均是0．418，阿萨姆变种水平内是0．653。而居群间遗传分化系数Gst=0.391，和Shannon多样性指数分析（36．0％）和AMOVA分析结果（39．7％）相一致，说明阿萨姆变种60．9％的遗传变异来自居群内的个体间，39．1％的遗传变异来自居群间。研究结果揭示阿萨姆变种居群遗传多样性高，居群间遗传变异存在中度的遗传分化，这可能是由于茶树种内高度异的特性和生境片段化所致。基于观察到的居群遗传信息，建议采取就地保护和迁地保护的保护策略。

云南3种野生稻中抗病基因同源序列的克隆及序列分析

根据已报道的NBS LRR类和STK类抗病基因结构中的氨基酸保守区域 ,设计简并引物 ,通过PCR扩增及克隆 ,从普通野生稻 (OryzarufipogonGriff.)、药用野生稻 (OryzaofficinalisWall.)、疣粒野生稻 (Oryzameye rianaBaill.)中共获得 14类NBS LRR类抗病基因同源序列 ,其中普通野生稻中的有 7类 ,药用野生稻中的有 2类 ,疣粒野生稻中的有 6类。药用野生稻中TO12代表序列与普通野生稻中TR19代表序列 ,同属一类 ,且具有 10 0 %的同源性 ,说明不同种野生稻中的同一类 (聚类 )抗病基因同源序列是完全一致的。同时 ,还获得 5类STK类抗病基因同源序列 ,其中普通野生稻中的有 4类 ;药用野生稻中的有 1类。通过氨基酸同源性比较分析 ,发现笔者克隆到的抗病基因同源序列与已克隆的抗病基因L6、N、Bs2、Prf、Pto、Lr10和Xa2 1等的氨基酸同源性都相当低 (均低于 2 5 % ) ,暗示了这些抗病基因同源序列可能是目前尚未报道的抗病基因的同源序列。

水稻抗病基因同源序列的克隆及测序分析

根据已知的 NBS- L RR类及丝 /苏氨酸蛋白激酶类抗病基因结构中氨基酸的保守区域 ,设计了两组简并引物用于扩增广谱抗稻瘟病品种云系 2号中的抗病基因同源序列。结果一共获得 11类的 NBS- L RR类抗病基因同源片段及 16类的丝 /苏氨酸蛋白激酶类抗病基因同源片段。所有 11类的抗病基因同源系列均含有 NBS- L RR类抗病基因的保守序列 ,如 P-loop、Kinase 2、Kinase 3a以及跨膜区域等。所有 16类的蛋白激酶的序列均含有丝 /苏氨酸蛋白激酶所共有的催化区 (共有氨基酸序列 :DL KPEN)、 (共有氨基酸序列 :GT/ SXXYXAPE)以及蛋白激酶的其他催化区。两条 NBS- L RR类的抗病基因同源片段 YR1、YR12分别与抗病基因 I2 C- 2及 Xa1氨基酸同源性很高 (>5 0 % )。7条丝 /苏氨酸蛋白激酶类的抗病基因同源片段与已克隆的 Xa2 1、Pto、L r10等抗病基因的氨基酸序列超过 6 0 %的相同以及 76 %～

古茶园、台地茶园遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP-毛细管电泳法对云南省西双版纳地区4个有代表性的古茶园和2个台地茶园(阿萨姆茶Camellia sinensis var.assamica)进行遗传多样性分析。研究表明:阿萨姆茶变种水平的遗传多样性为:P= 92.31%,期望杂合度He=0.1366,Shannon多样性指数Ho=0.2323;古茶园居群水平是45.55%,勐腊居群最高P=59.11%,勐宋居群变异度最低P=36.44%;而台地茶中,有性系勐海大叶群体种P=35.02%,无性系云抗10号则非常低P=13.77%,台地茶居群水平是24.2%;古茶园和台地茶遗传多样性相差很大,依次是古茶园>有性系台地茶>无性系台地茶。研究还发现古茶园与台地茶园之间,南糯山居群、勐腊易武居群与其他居群间存在多条特异谱带,可作为南糯山居群和勐腊易武居群的分子指纹图谱,应用于这两个居群所产晒青毛茶的鉴别。

云南大理茶资源遗传多样性的AFLP分析

采用AFLP标记对仅在云南南部及周边地区狭域分布的茶树近缘植物大理茶11个居群204个个体的遗传多样性进行了研究。分析结果表明:(1)大理茶遗传多样性水平低。在物种水平上,He=0.099,Ho=0.178;在居群水平上,He=0.083,Ho=0.137;(2)居群间的遗传分化较低。基于Nei’s遗传多样性分析得出的居群间遗传分化系数Gst=0.1606;Shannon’s居群分化系数为16.04%。AMOVA分析显示:大理茶的遗传变异主要存在于居群内,占总变异的80.97%,居群间的遗传变异占19.03%;(3)两两居群间的Nei’s遗传一致度(I)的范围为0.971～0.997。经Mantel检测,居群间的遗传距离和地理距离之间不存在显著的正相关关系(r=0.1127,P<0.001)。推测人类活动的干扰和生境的片断化是导致大理茶濒危现状的主要因素。基于观察到的居群遗传信息,建议采取就地保护和迁地保护的保护策略。

分子标记技术及其在水稻基因定位上的应用

分子标记作为一种新兴的遗传标记手段,因其特有的优势而得到广泛的应用,带动了许多领域的快速发展。本文主要对分子标记的一般特点,基于全基因序列、简单重复序列、已知的特定序列、反转录转座子、单核苷酸的分子标记的类型及各类型代表性技术的基本原理和各自的优缺点进行详尽的综述,并进一步介绍了近年来分子标记在水稻基因定位上的相关应用,如水稻高产、优质、抗逆和抗病等重要农艺性状基因的分离克隆。最后还对分子标记技术在遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等方面的应用前景予以展望,以期该技术能发挥更大的作用。

云南栽培稻种SSR遗传多样性比较

采用64个SSR标记对96份云南水稻(Oryza sativa)地方品种和选育品种的遗传多样性进行比较分析。结果发现64个标记都具有多态性,共检测到741个等位基因,每个多态性位点检测到的等位基因数为2-29个,平均11.57个;Nei基因多样性指数(He)范围在0.345(RM321)-0.932(RM1)之间,平均为0.56。水稻品种的遗传多样性并非按地理位置均匀分布,而是在相似系数为0.17的水平上明显分为2个不同类群,即籼稻类群和粳稻类群,且籼粳亚种间的SSR多样性差异不明显,籼稻平均等位基因数(Ap)和Nei基因多样性指数(Ap=10.6,He=0.46)与粳稻品种(Ap=10.7,He=0.48)十分接近,可能与这些品种间存在一定频率的基因交流有关。糯稻和非糯稻在籼稻群和粳稻群中都有表现,没有特别的分布规律。云南栽培稻选育品种与地方稻亲缘关系较近,其遗传基础可能来源于云南水稻地方品种。本研究结果表明,SSR标记能较好地区分云南栽培稻品种,且云南水稻地方品种遗传多样性丰富,存在大量的优质性状可供育种实践选择。

cDNA文库构建策略及其分析研究进展

cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。经典cDNA文库存在克隆的片段短等缺点,而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息,从而克隆cDNA全长;对文库进行均一化处理即均一化cDNA文库,可以增加克隆低丰度mRNA的机会;差减cDNA文库在研究生物体某一时期基因差异表达上具有重要的意义;改进的固相cDNA很大程度上提高了建库的效率和质量。本文以阐述基本原理为主,介绍几种近年来常用的cDNA构建的方法及其优缺点。

野生茶树大理茶种质资源现状调查

2006年10月至2007年5月对野生茶树大理茶种质资源进行调查,调查结果显示:大理茶种主要存在于滇西和滇西南地区,目前发现的分布点有44个。导致大理茶严重被毁的主要原因是农业开垦、过度放牧、砍伐采摘等。据此提出了对野生茶树资源的保护对策。

珍稀濒危植物——云南药用野生稻自然生态群的新发现及其特性

野生稻包括云南药用野生稻 (OryzaofficinalisWall .exWatt.,染色体组CC ,染色体数2n =2 4 )是宝贵的基因资源库 ,自然分布急剧减少。 2 0 0 1年 ,在云南耿马孟定遮甸新发现了1个药用野生稻分布点 ,该地药用野生稻植株高度可塑性大 ,可以根据密度和荫蔽情况自动大幅度调节株高 ;比其它生态群的结实率高 ;而其自然发病和人工接种鉴定发现抗稻瘟病能力中等偏上 ,抗白叶枯病害能力强 ,抗螟虫和稻飞虱能力也很强。品质分析结果表明该居群药用野生稻蛋白质含量比其它野生稻的高 ,而直链淀粉含量偏低 ,说明品质较好。本发现对采取有效措施进行药用野生稻原生地保护 。

云南蔷薇属部分种质资源的SSR遗传多样性研究

利用简单重复序列SSR标记技术对蔷薇属（Rosa L．）13份野生种、变种、变型及29份栽培品种的遗传多样性进行了研究。用筛选出的18对SSR引物对42份材料DNA进行PCR扩增，在18个位点共检测到148个等位基因，每一位点的等位基因变幅为6～14个，平均8．2个。材料问遗传相似系数为0．282—0．892，表明在分子水平上具有丰富的遗传多样性。在相似系数为0．456时，基于SSR标记的聚类分析将13个蔷薇野生种分为5个组，这与植物形态学分类结果大体一致。在遗传相似系数为0．43水平上，聚类分析将42份供试材料分为5大组群。初步探讨了野生种之间以及野生种与栽培品种之间的亲缘关系。

云南景洪直立型普通野生稻抗稻瘟病Pi-ta^＋等位基因的克隆与分析

用PCR法从景洪直立紫杆普通野生稻中克隆了抗稻瘟病基因Pi-ta+的4672bp序列,该序列包含完整的编码框、内含子和终止密码子下游的331bp。所克隆的直立型紫杆普通野生稻Pi-ta基因序列的编码区与已报道的日本栽培稻社糯(Yashiro-mochi)和元江普通野生稻相应序列间的同源性分别为99.86%和98.78%。与社糯的Pi-ta基因相比,其编码区有4个核苷酸的差异并导致3个氨基酸残基的改变,而内含子区域有6个核苷酸差异。对该序列进一步分析发现,其推导的氨基酸残基的918位为丙氨酸,属于稀有的抗稻瘟病的Pi-ta+等位基因。景洪直立型普通野生稻Pi-ta+基因因其编码序列和推导的氨基酸序列与社糯有所不同,推测其抗病能力大小和抗菌谱可能与社糯的Pi-ta基因不同。直立型普通野生稻中Pi-ta+等位基因的克隆为进一步利用该基因改良栽培稻抗病能力提供了前期物质基础。

云南3种野生稻中抗白叶枯病基因的鉴定

白叶枯病是水稻生产上最重要的细菌性病害之一,培育抗病新品种是防治白叶枯病最经济有效的途径。然而,栽培稻来源的抗病基因数量有限,并且部分抗病基因的抗病谱窄。因此,从野生稻中发掘抗病基因,将有利于培育抗病谱广且抗病能力强的水稻新品种。本研究通过抗性鉴定和PCR分析,检测云南野生稻中的抗白叶枯病基因。结果表明,云南野生稻对2个代表性白叶枯病菌Y8和PXO99具有不同程度的抗性,疣粒野生稻甚至达到免疫的程度。功能标记检测结果显示,3种野生稻中均不含xa5、xa13和Xa21抗病基因,元江普通野生稻含Xa23和Xa3/Xa26基因或其同源基因,景洪普通野生稻中含Xa1、Xa3/Xa26和Xa27基因或同源基因,药用野生稻含Xa3/Xa26基因或同源基因,而疣粒野生稻含有Xa27抗性基因。本研究结果为进一步发掘和克隆云南野生稻中的抗白叶枯病新基因提供了理论参考。