目的探究miR-142-5p与泛素蛋白连接酶1(WWP1)的靶向性及miR-142-5p靶向作用WWP1对前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法采用RT-PCR检测前列腺癌组织和癌旁组织中miR-142-5p与WWP1 mRNA的表达情况;采用荧光素实验验证miR-142-5p与WWP...目的探究miR-142-5p与泛素蛋白连接酶1(WWP1)的靶向性及miR-142-5p靶向作用WWP1对前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法采用RT-PCR检测前列腺癌组织和癌旁组织中miR-142-5p与WWP1 mRNA的表达情况;采用荧光素实验验证miR-142-5p与WWP1的靶向关系。体外培养前列腺癌细胞PC-3细胞并分为NC组、miR-142-5p组、WWP1组和miR-142-5p+WWP1组。各组细胞采用对应模拟物转染后,使用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,使用划痕实验检测细胞迁移能力;使用蛋白质印迹实验检测侵袭迁移相关蛋白(E-cadherin,N-cadherin和Vimentin)相对表达水平;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果癌组织中miR-142-5p相对表达水平显著低于癌旁组织(0.68±0.16 vs 1.88±0.22;t=19.727;P<0.05);癌组织中WWP1 mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(2.07±0.24 vs 0.24±0.13;t=32.027;P<0.05)。miR-142-5p野生纯合子和WWP1野生纯合子混合组荧光霉素活性显著低于其他各组(P<0.05),荧光霉素验证miR-142-5p和WWP1存在结合位点。相比NC组,miR-142-5p组miR-142-5p相对表达水平显著升高(P<0.05),WWP1水平显著降低(P<0.05);相比NC组,WWP1组miR-142-5p相对表达水平显著降低(P<0.05),WWP1水平显著升高(P<0.05)。相比WWP1组,miR-142-5p+WWP1组miR-142-5p相对表达水平显著升高(P<0.05),WWP1 mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05)。相比NC组,miR-142-5p组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05);相比NC组,WWP1组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);相比WWP1组,miR-142-5p+WWP1组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-142-5p可以靶向结合WWP1降低前列腺癌组织中WWP1表达,miR-142-5p靶向作用WWP1可抑制体外培养的前列腺癌细胞PC-3的侵袭和迁移,同时促进其凋亡。展开更多
文摘目的探究miR-142-5p与泛素蛋白连接酶1(WWP1)的靶向性及miR-142-5p靶向作用WWP1对前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法采用RT-PCR检测前列腺癌组织和癌旁组织中miR-142-5p与WWP1 mRNA的表达情况;采用荧光素实验验证miR-142-5p与WWP1的靶向关系。体外培养前列腺癌细胞PC-3细胞并分为NC组、miR-142-5p组、WWP1组和miR-142-5p+WWP1组。各组细胞采用对应模拟物转染后,使用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,使用划痕实验检测细胞迁移能力;使用蛋白质印迹实验检测侵袭迁移相关蛋白(E-cadherin,N-cadherin和Vimentin)相对表达水平;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果癌组织中miR-142-5p相对表达水平显著低于癌旁组织(0.68±0.16 vs 1.88±0.22;t=19.727;P<0.05);癌组织中WWP1 mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(2.07±0.24 vs 0.24±0.13;t=32.027;P<0.05)。miR-142-5p野生纯合子和WWP1野生纯合子混合组荧光霉素活性显著低于其他各组(P<0.05),荧光霉素验证miR-142-5p和WWP1存在结合位点。相比NC组,miR-142-5p组miR-142-5p相对表达水平显著升高(P<0.05),WWP1水平显著降低(P<0.05);相比NC组,WWP1组miR-142-5p相对表达水平显著降低(P<0.05),WWP1水平显著升高(P<0.05)。相比WWP1组,miR-142-5p+WWP1组miR-142-5p相对表达水平显著升高(P<0.05),WWP1 mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05)。相比NC组,miR-142-5p组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05);相比NC组,WWP1组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);相比WWP1组,miR-142-5p+WWP1组单位面积内侵袭细胞数目、划痕愈合率、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-142-5p可以靶向结合WWP1降低前列腺癌组织中WWP1表达,miR-142-5p靶向作用WWP1可抑制体外培养的前列腺癌细胞PC-3的侵袭和迁移,同时促进其凋亡。