一株血清8a型禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

【目的】研究福建南平地区禽腺病毒(FAdV)血清8a型分离株的遗传演化情况及致病性,旨在为防控血清8a型FAdV感染提供参考。【方法】2022年8月,采集福建南平地区部分肉鸡养殖场出现的以包涵体肝炎为特征的肝脏病料,采用PCR技术检测FAdV核酸,将获得的阳性样品接种在无特定病原体(SPF)鸡胚上进行病原的分离纯化,利用hexon基因测序及序列分析等方法进行病毒鉴定,并在测定分离株毒力的基础上进行动物致病性试验。【结果】接种10 d后,鸡胚死亡,肝脏肿大、出血、坏死、呈土黄色;PCR鉴定和hexon基因序列分析表明,分离株与GenBank上的FAdV E型8a血清型澳大利亚TR59毒株的序列同源性高达99.5%,将该分离株命名为FJNP。FJNP株对1日龄SPF鸡的致死率为44%(11/25);剖检显示,感染鸡肝脏肿大、出血、边缘钝圆、呈土黄色、出现白色坏死点,脾脏和肾脏也出现肿大、出血等症状;肝脏组织病理学检查结果显示,感染鸡肝细胞大量变性坏死,肝细胞核可见嗜碱性包涵体及大量淋巴细胞浸润。实时荧光定量PCR检测显示,感染鸡体内多个组织器官均检测到病毒,且主要分布在肝脏,攻毒3、5、7、14、21 d在泄殖腔中均能检测到病毒。【结论】本研究从临床表现为包涵体肝炎的病鸡肝脏病料中分离到一株具有较强致病性的血清8a型FAdV。

福建省2018年~2020年非免疫鸡群滑液囊支原体感染的流行病学调查

自2010年以来,滑液囊支原体(MS)在我国不同种类和品种鸡群中的感染率持续升高。为调查2018年~2020年福建省肉鸡和蛋鸡群MS感染情况和感染规律,本研究采用商品化ELISA抗体检测试剂盒对1 668份非免疫蛋鸡血清样品进行MS抗体检测;采用本实验室建立的Taq Man qPCR法对2 777份白羽肉鸡上颚裂拭子样品进行MS检测;对3个规模化养殖场的非免疫蛋鸡群进行MS抗体和病原持续跟踪检测,分析MS抗体产生与MS感染之间的关系;并对临床MS分离株的vlhA基因进行遗传进化分析,以了解MS感染菌株的遗传背景和来源情况。结果显示:福建地区2018年~2020年非免疫蛋鸡群MS抗体总阳性率为64.09%(1 069/1 668),非免疫肉鸡群病原总阳性率为49.62%(1 378/2 777);MS抗体阳性率和病原阳性率在肉鸡和蛋鸡中均表现为随日龄增加而升高。各年龄段蛋鸡MS抗体均为阳性,1月龄蛋鸡MS抗体阳性率为4.4%,2、3月龄蛋鸡MS抗体阳性率显著上升,4月龄蛋鸡MS抗体阳性率大于50%,并可持续至7月龄~15月龄;白羽肉鸡在8日龄~14日龄时MS阳性率开始显著升高,22日龄~28日龄时阳性率超过50%,至36日龄~42日龄时达到92.17%;通过对3个非免疫蛋鸡群的MS抗体和病原持续跟踪检测发现,同一时间点抗体阳性率显著低于病原阳性率;通过vlhA基因遗传进化分析表明,福建地区MS分离株属于不同的进化分支,其来源复杂。本研究结果表明,福建地区2018年~2020年蛋鸡群和肉鸡群MS感染率高,存在严重的水平传播,且同时存在垂直传播的可能性,MS感染菌株来源复杂,临床应采用Taq Man qPCR法对鸡群开展早期MS感染监测。因此,本研究有助于了解和掌握MS在鸡群中的感染情况和规律,为及时采取防控措施降低鸡群MS感染率并提高防治效果奠定了基础。

O_(78)血清型大肠杆菌对蛋鸡的致病性及丙/丁酸单甘油酯的保护效果

【目的】研究O_(78)血清型大肠杆菌对蛋鸡的致病性,以及单甘油酯对蛋鸡O_(78)血清型大肠杆菌不同致病方式的保护效果,为绿色无抗养鸡提供理论支撑和实践经验。【方法】对福建省某鸡场分离的血清型O_(78)禽源致病性大肠杆菌(APEC),采用口服、颈部皮下和气管内壁接种不同日龄的试验鸡,评价菌株的致病性,建立攻毒模型,然后评估以丙酸单甘油酯、丁酸单甘油酯为主要成分的水溶性液态添加物FraC34对鸡大肠杆菌病的保护效果。【结果】(1)12日龄海兰蛋鸡雄雏口服接种细菌3.0×10~9CFU·羽^(-1),可造成100%发病;但22日龄海兰蛋鸡雄雏分别口服接种细菌3.0×10~9CFU·羽^(-1)和6.0×10~9CFU·羽^(-1)时不发病。12日龄海兰蛋鸡雄雏颈部皮下接种细菌0.4×10~9CFU·羽^(-1),可造成70%的试验鸡发病,22日龄海兰蛋鸡雄雏气管内壁接种细菌1.5×10~9CFU·羽^(-1),可造成25%鸡只发病;(2)在饮水中添加FraC34,早期可改善鸡肠道健康,降低肠道对APEC的易感性,在饮水中添加2～3 L·m^(-3)的FraC34,能够显著降低经由口服途径感染APEC造成的发病率和死亡率,还能够降低经气管内壁接种APEC所造成的死亡率,并且显著降低发病率;当饮水添加3 L·m^(-3)时,可以维持感染鸡的日增重。【结论】鸡O_(78)血清型的APEC对幼雏具有极大的危害性,造成严重经济损失,而中大雏对该菌株具有一定的耐受性;养殖环节添加FraC34,对于鸡感染APEC具有一定的保护作用,并且可以维持鸡的生产性能,可替代部分抗生素的使用,达到较为理想的保护效果。

福建白羽肉鸡鸡毒支原体的分离鉴定及最小抑菌浓度测定

为了解福建白羽肉鸡中鸡毒支原体(MG)对临床常用药物的敏感性,本研究从2个商品代白羽肉鸡养殖场采集了疑似患慢性呼吸道病(CRD)的鸡喉拭子40份,接种于适宜的支原体培养基上进行纯化。通过对菌株生物学特性分析、细菌形态学观察、PCR测序及动物回归试验进行鉴定,并利用最低抑菌浓度(MIC)测定了分离株对临床常用抗菌药的敏感性。结果显示,本试验成功获得2株MG,命名为MX和HY。将分离株接种于含有酚红的支原体液体培养基中能分解葡萄糖产酸使培养基颜色由红变黄;固体培养基于低倍镜下观察到典型的“荷包蛋”状菌落;分离株经过Dienes染色后的菌落中心呈致密深蓝色,边缘淡蓝,且30 min后不褪色,并具有较强吸附红细胞的能力,呈现典型MG培养特征;动物回归试验和分离株pvpA基因测序结果显示,2株MG分离株均具有较强致病性,证实其与R株的亲缘关系最近;药敏试验结果显示,MX和HY对泰妙菌素、氟苯尼考和泰乐霉素表现出了高度敏感性,其次是盐酸恩诺沙星、盐酸大观霉素,而对具有与泰乐霉素类似分子结构和抗菌谱的畜禽专用抗生素替米考星敏感性较差,此差异可能与临床上长期应用该药有关。研究结果表明,福建地区商品代白羽肉鸡中存在致病性MG流行,泰妙菌素可以作为临床防治MG的首选药物。

鸡传染性法氏囊病病毒DK株VP2基因序列分析及其对SPF雏鸡的致病力

为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。

一株鸡传染性法氏囊病毒变异株的鉴定与致病性

近日,在福建省南平市某鸡场发现一株新的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)流行株,并将其命名为IBDV-FJ02.为了明晰IBDV-FJ02株遗传变异情况和临床致病特征,进行了A节段基因组序列和特征性氨基酸位点的分析、基于A节段和B节段的新型基因型分类以及对无特定病原体(SPF)鸡致病性的研究,旨在为鸡传染性法氏囊病的防治提供依据.结果显示:IBDV-FJ02株A节段核苷酸序列与早期变异株E的同源性最高,达95.6%,与中国变异株SHG558在同一分支上;IBDV-FJ02株VP2-4-3蛋白氨基酸序列第222位氨基酸为T,第249位为K,第318位为D,参考变异株中仅GLS、E与其一致,位点N^(213)、T^(222)、K^(249)、 D^(318)、E^(323)均符合变异株的特征.根据新型基因型分类方案,显示IBDV-FJ02株属于A2dB1基因型,即IBDV新型变异株类群.致病性测定结果显示:IBDV-FJ02株感染3周龄SPF鸡并不会导致感染鸡只死亡,在感染后21 d内,主要引起鸡只法氏囊的严重萎缩和脾脏的轻微肿大.上述结果表明,IBDV-FJ02株是一种IBDV新型变异株,具有明显的IBDV变异株致病特点.

鸡传染性支气管炎病毒HQ P_(10)毒株非编码区序列分析

研究旨在探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异情况,为鸡传染性支气管炎的防控提供基础数据.通过对IBV HQ毒株第10代鸡胚培养病毒的5＇端非编码区（5＇UTR）和3＇UTR序列进行cDNA末端快速扩增（RACE）和序列分析.结果表明：HQP10的5＇UTR长度为525 nt,相较于Beaudette毒株,序列中发生4个位点的碱基缺失突变,1个位点的碱基插入突变,导致其SL1-SL4茎环结构有所改变,与参考毒株的相应序列同源性在94％～99％之间;而3＇UTR长度为363 nt,与参考毒株相应序列的同源性在45％～98％之间,与H120的同源性在93.3％,而与H52株、M41株的同源性则较低,分别为46.4％和45.9％.UTR对病毒RNA的合成具有重要作用,HQP10毒株UTR中的突变对病毒复制效率的影响还有待进一步研究.

浅析规模化鸡场鸡病诊断技术

近年来,随着规模化鸡场数量的逐渐增多,其各种鸡病发生的愈发频繁,对养殖效益影响愈发严重。笔者将多年的工作经验总结如下,供同行参考。1群体检查1.1一般状态,首先对鸡的饮水、啄食以及行动进行观察。健康鸡通常视力以及听觉较为敏感,周围出现惊扰会立即作出反应。

白羽肉种鸡雏小肠球虫与大肠杆菌混感的诊疗

白羽肉鸡是我国主要的肉鸡养殖品种之一,白羽肉鸡具有生长周期短,生长速度较快、出栏率高、饲料利用料较高等多种优点,在我国广泛养殖。鸡球虫病是由艾美耳属多种球虫寄生在鸡肠上皮细胞的一种原虫病,艾美耳属多种球虫可以感染不同品种、不同品种、不同年龄阶段的鸡,尤其雏鸡危害较大。由于鸡球虫危害大、分布广,感染雏鸡后可以造成不同程度的死亡,发病率高至50%~70%,死亡率为20%~30%,严重时高达80%,严重危害养鸡业的发展.

鸭病毒性肝炎的研究现状

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV)引起的一种高度致死性、高度传播性的传染病。症状为雏鸭精神萎靡,食欲不振,而后出现神经症状,运动多呈共济失调,两腿痉挛,死亡雏鸭呈特征性的角弓反张姿势。

白羽鸡致病性大肠杆菌、沙门氏菌的分离鉴定及抗生素耐受性分析

【背景】大肠杆菌、沙门氏菌是肉鸡养殖中的主要致病菌,可造成巨大的经济损失,其耐药情况不容忽视。【目的】从病死鸡体内分离致病性大肠杆菌、沙门氏菌并对其进行鉴定,分析其耐药特性。【方法】常规方法分离纯化目标菌株,结合生化试验、16SrRNA基因序列分析、生长曲线验证进行鉴定,采用纸片扩散法进行药敏试验,分析其耐药率及多重耐药性。【结果】共分离得到10株大肠杆菌和10株沙门氏菌(包括4株肠道亚种、1株亚利桑那亚种和5株邦戈尔沙门氏菌种);大肠杆菌仅对碳青霉烯类药物敏感,对其他类药物耐药性较强;沙门氏菌对碳青霉烯类药物敏感,对其他类药物则呈现不同程度的耐药性;所有分离菌均为多重耐药菌。【结论】分离得到了病原菌并确定了其耐药特性,为白羽鸡养殖中大肠杆菌、沙门氏菌的防治提供了参考。

鉴别滑液囊支原体MS-Y田间株与MS-H疫苗株多重PCR方法的建立

为了建立一种快速准确鉴别滑液囊支原体MS-Y分离株和活疫苗MS-H的方法,根据滑液囊支原体ppm和deoD基因的2个碱基突变位点序列,运用错配扩增突变分析(MAMA)PCR方法,设计了2对特异性引物和1对通用引物,用于扩增目的基因,通过优化反应条件,建立一种能同时鉴别出MS-Y和MS-H的多重PCR检测方法,并检测了该方法的特异性和敏感性。结果显示,利用特异性引物的多重PCR方法能同时鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和滑液囊支原体MS-Y分离株的DNA,分别扩增出相应的特异目的条带,检测MS-H株的最低敏感度为4.21×10^(5)copies/μL,检测MS-Y株的最低敏感度为6.47×10^(5)copies/μL;而利用通用引物对检测滑液囊支原体DNA的最低浓度为2.18×10^(3)copies/μL,检测MS-H DNA的浓度下限均为1×10^(5)CCU/mL,检测MS-Y DNA的最低浓度为1×10^(3)CCU/mL。本研究建立了一种能同时快速鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和MS-Y分离株的多重PCR方法。