人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究

目的探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果组织块培养法成功培养出FLS。RA患者FLS细胞4～7d细胞数量明显增加,8～12d细胞可以长满瓶底。第3代以后细胞均质性最好,3～7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化。软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16d后FLS细胞可以长满瓶底。FCM分析RA第4代FLSCD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%。RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32)pg/ml,IL-1β为(4.67±0.82)pg/ml。结论组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性。

IL-6和IL-18基因启动子多态性与广东汉族人群类风湿性关节炎相关性研究

目的了解我国广东地区汉族人群白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)基因启动子单核苷酸多态性及与类风湿性关节炎(RA)的相关性。方法应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测168名健康体检者和120例RA患者的IL-6基因启动子-572和-174及IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性。结果对照组和患者组IL-6基因启动子-572位点、-174位点和IL-18基因启动子-607C/A位点、-137G/C位点均存在单核苷酸多态性。IL-6-572位点、-174位点和IL-18-607位点基因型和等位基因频率分布在RA组和对照组间差异均有显著性(P<0.001)。IL-18-137位点基因型频率在两组间无统计学意义(P=0.141),但等位基因分布频率在两组间差异有显著性(P=0.024)。经Logistic回归分析,年龄、性别、IL-6-572位点、-174位点和IL-18-137位点与RA有相关性(P<0.05)。结论广东汉族人群IL-6基因启动子-572和-174单核苷酸多态性与RA可能相关,IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性与RA是否相关需进一步研究。

486株肠球菌菌型分布及耐药性研究

目的 分析临床分离的肠球菌的菌型特点和对常用抗生素的耐药性。方法 在VITEK 32仪器上用GPI鉴定卡及API系统鉴定感染性疾病各种临床标本分离的肠球菌 ;在VITEK 32仪器上用GPS 10 7药敏卡及K -B法测定肠球菌对药物的敏感性。结果 从痰或咽拭子、尿液、宫颈分泌物、伤口分泌物等处分离的 4 86株肠球菌分别占总数的 30 7% ,2 9 2 % ,16 5 % ,13 0 % ;粪肠球菌和屎肠球菌占总数的 92 4 %。高水平氨基糖苷类耐药(HLAR)粪肠球菌和屎肠球菌检出率高达 6 0 % ;屎肠球菌对青霉素等 β -内酰胺类抗生素耐药率明显高于粪肠球菌。未检出耐万古霉素肠球菌 (VRE)。结论 肠球菌是本地区呼吸道、泌尿系感染主要病原菌之一。临床应重视HLAR株引起的感染 ,根据药敏结果合理用药。

28个临床化学指标3种不确定度评定方法的比较

目的探讨3种不确定度评定方法的优劣,为临床实验室选用不确定度的评定方法提供思路。方法用3种方法评定28个临床化学指标的不确定度,方法 1是澳大利亚临床生物化学家协会(AACB)建议方法;方法 2是诺德创新中心(Nordtest)建议方法;方法 3是根据室内质控数据计算不确定度。3种方法评定的扩展不确定度(U)分别与分析目标[生物学变异和美国临床实验室改进修正案(CLIA)允许总误差]比较。结果 28个指标,方法2除K和Na外,26个指标的U均比方法1高;除Na外,27个指标的U均比方法 3高。方法 1除Alb外,27个指标的U均比方法 3高。与生物学变异比较,28个指标用方法1、方法 2、方法 3评定U分别有54%、28%、62%达到理想值,12%、32%、8%达不到要求;与CLIA允许总误差比较,分别有58%、18%、74%达到理想值,2%、2%、2%达不到要求。结论临床实验室用方法 2评定测量不确定度,比方法 1和方法 3考虑到更多的不确定度来源,与生物学变异比较不合格率明显增加,提示实验室需对检测过程进行质量改进。

Akt shRNA载体的构建及其对结肠癌细胞株Lovo Akt基因表达的抑制作用

目的构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,通过RNAi下调Akt基因在结肠癌Lovo细胞系中的表达,观察对结肠癌细胞生长的影响。方法将靶向人Akt基因的两条shRNA(Akt1-U6-1#;Akt1-U6-2#)表达序列克隆到入门载体pENTRTM/U6的黏性末端,测序鉴定后与目的表达载体Plentio/Block-iT DEST Vector进行LR位点特异性重组;分别将入门载体与目的表达载体转染入Lovo细胞,对细胞株行RT-PCR和Western blotting检测,观察siRNA对靶基因Akt的抑制效果。结果 DNA测序证实pENTRTM/U6-TF-shRNA入门载体和Plentio/Block-iT DEST目的表达载体为阳性克隆,转染Lovo细胞后,Akt基因在mRNA和蛋白水平的表达量受到明显抑制。结论成功构建了靶向人Akt的shRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制Lovo细胞Akt基因表达,为进一步研究Akt的功能和肿瘤的基因治疗奠定了实验基础。

PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达

目的构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白。结论成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达。

血脂测定结果的临床可接受性分析

血脂测定标准化是保证测定结果准确可靠的基础，标准化的核心是量值溯源。此目标的达到可以通过自建检测系统（不能溯源的检测系统）与目标检测系统（可溯源的检测系统）比对实验来实现。本文将我院检验科（总院和2个分院共3个实验室）中的一个实验室检测系统作为目标检测系统，与其他实验室所用自建检测系统测定的总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、载脂蛋白A1（ApoA1）、载脂蛋白B（ApoB）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）结果进行方法学比较，帮助纠正自建检测系统的偏倚，使自建检测系统检验结果可以溯源，提高临床可接受水平。

类风湿性关节炎患者外周血IL-1RI水平的变化

目的探讨外周血白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)水平与类风湿性关节炎的相关性。方法应用酶联免疫吸附技术检测类风湿性关节炎(RA)患者94例,其中活动期和非活动期各47例;系统性红斑狼疮(SLE)患者40例,其中活动期和非活动期各20例;急性上呼吸道感染(AURTI)患者20例;健康体检者20名的外周血血清IL-1RI水平。结果各组间差异均有统计学意义(P<0.001)。RA组、SLE组、AURTI组和健康对照组均数间两两比较,RA组与各组间均有统计学意义(P<0.01),其余各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。RA和SLE按临床症状分活动期和非活动期后各组均数间两两比较,RA活动期组与各组间差异均有统计学意义(P<0.05),RA非活动期与各组间差异均有统计学意义(P<0.05),其余各组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论外周血IL-1RI与类风湿性关节炎免疫炎症相关,可以作为RA的诊断和疗效判断指标之一。

pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达

目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白。方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆。重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性。结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白。结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好。

人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建人细胞周期素依赖蛋白激酶2(CDK2)基因RNA干扰慢病毒载体。方法:利用Invitro-gen公司在线软件设计人CDK2(NM001798)shRNA序列,退火形成dsoligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,再与慢病毒载体重组,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和CDK2基因重组慢病毒载体转染293FT细胞,包装成病毒后,收集细胞培养上清液,测定病毒滴度。结果:测序证实pENTRTM/U6-CDK2-shRNA为阳性克隆,与慢病毒载体重组后测序结果显示也为阳性克隆,CDK2基因重组慢病毒载体传染293FT细胞后48h,细胞培养上清液,病毒的滴度为6×108TU/L。结论:成功构建人CDK2基因RNAi慢病毒载体,为研究CDK2在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。

补阳还五汤加减治疗冠心病对血脂和雌二醇代谢的影响

目的:探讨补阳还五汤加减治疗冠心病血脂和雌二醇(E2)代谢的变化。方法:49例冠心病患者服用补阳还五汤加减治疗两个月,应用酶法检测治疗前后的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG),均相酶法检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),免疫透射比浊法检测载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB),化学发光免疫法检测雌二醇(E2)。结果:治疗后TC、LDL-C、ApoB降低,ApoA1升高,与治疗前比较差异有显著性意义(P<0.05),TG、HDL-C、E2治疗前后比较无统计学差异(P>0.05)。结论:补阳还五汤加减治疗冠心病有助于改善血脂代谢。

SARS患者继发细菌性感染菌型及耐药性研究

目的 探讨 SARS患者继发细菌性感染的发病机理、病原菌菌型分布及耐药现状。方法 对本院收治 38例 SARS继发细菌性感染患者的痰液等标本中分离的 5 5株细菌进行菌型分类 ,体外作 MIC药敏试验并分析药敏结果。结果 共分离出 5 5株细菌 ,其中革兰阴性杆菌 2 5株 (非发酵菌 2 0株 ) ,革兰阳性球菌 2 0株 (凝固酶阴性葡萄球菌 13株 ) ,白色假丝酵母菌 10株 ;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCo NS) 9株 ,非发酵菌对三代头孢、四代头孢抗生素耐药率高达 5 8.8% ,白色假丝酵母菌对氟康唑均敏感。结论 SARS患者继发细菌性感染以非发酵菌为主 ,凝固酶阴性葡萄球菌次之 ,症状重者出现菌型变化或二重感染 ,菌群失调后有白色假丝酵母菌感染者 ;SARS患者继发细菌性感染对抗生素的耐药率较高 ,且可能发生菌型变化 ,应引起临床重视。

动态监测SARS病人IL-1α、IL-1β、TNFα和IL-6含量及其意义

目的 :动态监测SARS病人IL 1α、IL 1β、TNFα和IL 6含量并探讨其意义。方法 :采用酶联免疫吸附法定量检测早期、恢复期SARS病人以及出院后SARS随访者 ,一线未患SARS健康医护人员及健康体检者血清中IL 1α、IL 1β、TNFα和IL 6含量。结果 :IL 1α和IL 1β含量在早期、恢复期与其他组比较均显著升高 (P <0 0 5 )。SARS早期组TNFα均值显著高于其他组(P <0 0 0 5 ) ,SARS恢复期组均值显著高于SARS随访组、急诊等一线未患SARS组和健康对照组 (P <0 0 1)。SARS早期组IL 6均值显著高于其他各组 (P <0 0 0 5 ) ,SARS随访组与急诊等一线未患SARS组和健康对照组间均值比较 ,均有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :SARS在发病过程中其病理损伤与细胞因子IL 1、TNFα和IL 6有关。

设定目标在临床化学室内质量控制中的应用

室内质量控制（质控）主要基于统计学的概率原理,通过用单个或组合的统计学过程控制规则和控制图表进行监控。Bio Rad公司Unity Real Time质控数据管理软件可帮助实验室从多角度对质控结果进行分析,通过设定当前技术水平（state of the art）、不精密度-生物学变异（imprecision-BV）、

雌激素受体基因多态性的研究进展

雌激素受体是雌激素发挥作用的关键 ,对雌激素受体结构和功能的研究有助于一些疾病的治疗。本文就雌激素受体分子生物学物征、基因多态性及其检测方法 。

有机硅消泡剂消泡机理、特性及用途研究

讨论了有机硅消泡剂的消泡机理,详尽阐述了其特性和用途。

类风湿关节炎相关抗体实验室检测文献初步评价

目的运用循证检验医学的研究方法对类风湿关节炎(RA)相关抗体的实验室检测已发表的文献进行初步评价。方法利用Cochrane系统评价专用软件Revman4.2并结合循证检验学特点进行Meta分析。结果Anti-CCP、IgM-RFs均有较高的阳性检出率,但两者间的阳性检出率差异没有显著性(P>0.05)。AKA对于RA的阳性检出率相对最低。IgA-RF与Anti-CCP的阳性检出率差异无显著性(P>0.05)。Anti-CCP比AKA阳性检出率高(P<0.001),IgM-RFs比AKA阳性检出率高(P<0.001),IgM-RFs比IgA-RFs阳性检出率高(P<0.001),IgA-RFs比AKA阳性检出率高(P<0.001)。结论对于RA而言,Anti-CCP、IgM-RFs、IgA-RF具有较高的阳性检出率,但对RA的实验室诊断方案需进一步研究。

男性不育症患者精浆CRP和IL-1α水平检测的临床意义

目的:探讨男性不育症患者精浆C反应蛋白(CRP)和白细胞介素-1α(IL-1α)水平检测及临床意义。方法:收集123例男性不育症患者精液标本,均作精液常规检验,根据白细胞数(WBC)不同分为正常组、+组、++组、+++组和++++组;处理后的精浆采用免疫比浊法测定CRP,酶联免疫吸附法定量测定IL-1α。结果:精浆CRP、IL-1α水平随WBC水平的增加而递增。除正常组和+组、+++组和++++组间CRP结果比较无统计学意义(P>0.05)外,CRP和IL-1α在其他各组间比较,差异均有显著性(P<0.05);精浆CRP、IL-1α水平与WBC水平呈正相关。结论:CRP、IL-1α定量检查有助于诊断男性不育症患者生殖系感染和疗效观察。