鲍鱼脏器碱提多糖的分离纯化、结构表征及抗氧化活性研究

目的:分离纯化鲍鱼脏器碱提多糖(alkali-extracted abalone vscera polysaccharides,Aavp),并研究其结构和抗氧化活性,以期为鲍鱼脏器碱提多糖的开发及应用提供参考。方法:通过热碱提醇沉获得鲍鱼脏器碱提粗多糖,经DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-400 HR纯化得到高纯度多糖,并利用气相色谱、高效液相色谱、红外光谱和热重分析仪等工具分析其结构及抗氧化活性。结果:粗多糖纯化后得到四个组分,包括Aavp Ia、Aavp Ib、Aavp IIa和Aavp IIb,其中Aavp IIa得率较高,选择其进一步进行结构分析。分析发现,Aavp IIa由木糖和半乳糖组成,分子量为166513 Da;糖苷键构型为α型,组成如下:半乳糖1→4糖苷键摩尔百分比为11.81%,半乳糖1→3糖苷键为34.14%,半乳糖1→2糖苷键为10.14%;木糖1→3糖苷键摩尔百分比为33.85%,1→2和1→4糖苷键共占10.06%。热重分析显示,Aavp IIa在226.4-332.6℃下断裂分解,热失重率为43.65%。抗氧化实验显示Aavp IIa对O2-·的清除率为85.89%,对DPPH·的清除率为62.17%,具有一定的抗氧化活性。结论:提取的鲍鱼脏器碱提多糖是一类杂多糖,并具有一定的抗氧化活性。

鲍鱼脏器碱提多糖制备工艺及对L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤的修复活性

目的:优化鲍鱼脏器碱提多糖(Alkali-extracted abalone viscera polysaccharides,Aavp)提取工艺,并研究纯化Aavp对L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤的预防和修复作用,以期为鲍鱼脏器碱提多糖的开发及应用提供参考。方法:通过热碱提醇沉法获得鲍鱼脏器碱提粗多糖,并利用响应面法优化提取工艺,最后分析纯化Aavp对L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤的预防和修复能力。结果:鲍鱼脏器碱提粗多糖最佳提取工艺条件为:料液比1:150 g/mL,提取时间2 h,提取温度70℃,在此条件下,鲍鱼脏器碱提粗多糖得率为8.57%。在L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤预防试验中,不同剂量的纯化Aavp(20、50和100μg/mL)对L929细胞氧化损伤均具有极显著的预防作用(P<0.001),但没有表现出剂量效应,其中中剂量组(50μg/mL)的细胞存活率最高(71.94%±3.08%),略优于阳性对照的维生素E组,但无显著性差异。在修复试验中,不同剂量的纯化Aavp(20、50和100μg/mL)对L929细胞氧化损伤均具有极显著的修复效果(P<0.001),并呈现剂量效应,而高剂量组(100μg/mL)的细胞存活率最高(90.93%±1.17%),略高于阳性对照的维生素E组(87.96%±3.05%)。结果表明鲍鱼脏器碱提多糖对L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤具有出较好的预防和修复作用。结论:鲍鱼脏器碱提多糖具有一定的L929细胞H_(2)O_(2)氧化损伤修复能力。

片仔癀通过BCL-2及Caspase途径参与急性淋巴白血病耐药细胞株MOLT-4/ADM耐药逆转机制的研究

目的探讨片仔癀对耐阿霉素的急性淋巴细胞白血病细胞株MOLT-4/ADM药物耐受逆转的机制。方法在不同浓度片仔癀作用MOLT-4/ADM细胞48 h后,用MTS法检测MOLT-4/ADM增殖的影响;利用流式细胞术检测MOLT-4/ADM细胞凋亡率;实时荧光PCR检测耐药基因MDR1以及BCL-2 mRNA、Caspase-3/8/9 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(western blotting)检测凋亡蛋白BCL-2、Caspase-3/8/9以及多药耐药蛋白(P-gp)表达。结果0.4 mg/ml片仔癀组对MOLT-4/ADM耐阿霉素的IC50逆转倍数为4.02倍。0.2 mg/ml片仔癀组凋亡率为(9.87±0.47)%,0.4 mg/ml片仔癀组凋亡率为(15.17±0.69)%,0.8 mg/ml片仔癀组凋亡率为(20.32±0.87)%,均高于阴性对照组(6.06±0.35)%。随着片仔癀用药浓度的增大,BCL-2 mRNA表达下降,而Caspase-3/8/9 mRNA升高。BCL-2蛋白表达下降,而Caspase-3/9蛋白表达量升高,Caspase-8蛋白相对变化不大。结论片仔癀可以通过BCL-2以及Caspase途径诱导凋亡,增加MOLT-4/ADM对阿霉素的敏感性。

杏鲍菇甲壳素对大鼠实验性脂肪肝的预防作用

为研究杏鲍菇甲壳素对脂肪肝的预防作用,采用给脂肪肝模型大鼠对其喂食不同浓度杏鲍菇甲壳素,以考来烯胺为阳性对照,饲养5周后观察其血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、总甘油三酯(total triglycerides,TG)水平,肝脏组织中的TC、TG、丙二醛(malonaldehyde,MDA)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及肝组织病理学变化情况。结果表明:杏鲍菇甲壳素能极显著性(P<0.01)地降低大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平,显著提高肝脏组织中SOD活性(P<0.05)、降低MDA活性,减轻肝组织脂肪性样变,减少TC、TG在肝组织中积累,并呈现剂量效应,并值得注意的是,与考来烯胺组相比,杏鲍菇甲壳素高剂量组的预防效果与之相近,无差异性(P>0.05)。结论:杏鲍菇甲壳素具有预防脂肪肝形成的作用。

杏鲍菇结构物质预防脂肪肝和降血糖的研究

设计不同剂量的杏鲍菇纤维素分别联合高脂饲料饲养大鼠,以考来烯胺为阳性对照,研究杏鲍菇纤维素对大鼠高脂血症性脂肪肝预防作用,预防5周后检测大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平,肝脏组织中MDA、SOD活性及观察肝组织病理学变化情况.实验结果:杏鲍菇纤维素能降低大鼠血清中ALT、AST、TC、TG水平(P<0.01),显著提高大鼠肝脏组织中SOD活性、降低MDA含量(P<0.05),且具有剂量效应.肉眼观察模型组肝脏体积明显增大,整个肝脏呈奶黄色,而喂养杏鲍菇纤维素的肝脏有不同程度的好转;组织病理学也发现杏鲍菇纤维素各组的肝细胞无脂肪变性,无脂肪空泡,并值得注意是,与考来烯胺组相比较,杏鲍菇纤维素高剂量组的预防效果与之相近,无差异性(P>0.05),实验结果显示,杏鲍菇纤维素具有预防高脂血症性脂肪肝形成的作用;采用打击高血糖模型检测杏鲍菇浸提物的体内降血糖效果,结果发现:与模型对照组比较,各剂量组大鼠血糖的下降百分率显著性增高,其中高剂量组达到极显著性(P<0.001);在糖耐量试验中,高、中剂量组大鼠糖耐量与模型对照组比较均呈较显著差异(P<0.01),低剂量组大鼠糖耐量与模型对照组比较呈显著差异(P<0.05);高剂量对正常大鼠空腹血糖无明显影响(P>0.05).实验结果显示,杏鲍菇浸提物具有辅助降血糖功能.

地热田碱性蛋白酶菌株的选育与酶性质的研究

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus.)菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体发酵液中提取粗酶液,经CMC-I阳离子交换层析和SepHadex G-75凝胶层析,得到单一组分;通过Native-PAGE、SDS-PAGE电泳鉴定,粗酶至少含有3种碱性蛋白酶同工酶;单组分碱性蛋白酶的比活力为3875U,相对分子量约为31KDa.

低颞部大骨瓣减压术治疗重度颅脑损伤的临床效果

目的分析低颞部大骨瓣减压术治疗重型颅脑损伤的临床效果。方法选取2010年2月~2016年2月在本院进行手术治疗的92例重型颅脑损伤患者作为研究对象,按照手术方法的不同将入选患者分为观察组(50例)和对照组(42例)。观察组采用低颞部大骨瓣减压术治疗,对照组采用标准大骨瓣减压术。比较两组的治疗效果。结果观察组术后3、5 d,1周的颅内压水平以及并发症发生率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的GOS评分及预后分级情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重型颅脑损伤患者行低颞部大骨瓣减压术治疗的临床效果较理想,临床应用价值较高,值得推广应用。

白细胞介素3受体α亚基与急性髓系白血病的靶向治疗

目前的化疗方案可能已达到治疗急性髓细胞白血病(AML)的极限,今后急性髓系白血病治疗的探索方向更多地是转向靶向治疗。单克隆抗体治疗已经在复发AML中产生明显的缓解率。在AML越来越多的异常分子描述中,白细胞介素3受体(IL-3R)α值得高度关注。IL-3R是造血生长因子受体家族成员之一,其α亚基CD123是白血病干细胞的特异标志,在白血病的发生和白血病细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用。绝大部分急性髓系白血病高表达IL-3Rα。针对IL-3Rα靶向治疗的Ⅰ期临床研究已显示出一定的疗效。

不同发酵条件对地热田H-1菌种产碱性蛋白酶活性研究

对一株地热田产碱性蛋白酶菌株H-1的发酵条件进行了单因素试验,研究了不同氮源、pH值、温度对产碱性蛋白酶活性的影响.结果表明:液体发酵菌株H-1产碱性蛋白酶的最适温度为40℃、最适pH值为8.0、最适的无机氮源、有机氮源分别为硫酸铵、豆饼粉.

伊曲康唑治疗白血病合并侵袭性真菌感染的临床疗效

目的探讨伊曲康唑治疗白血病合并侵袭性真菌感染的临床疗效。方法选取2011年1月—2015年1月福建医科大学附属协和医院收治的白血病合并侵袭性真菌感染患者66例,随机分为试验组和对照组,每组33例。试验组患者给予伊曲康唑治疗,对照组患者给予伏立康唑治疗。比较两组患者临床疗效及不良反应发生情况。结果试验组患者总有效率高于对照组,不良反应发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论伊曲康唑治疗白血病合并侵袭性真菌感染的临床疗效显著,抗菌效果良好,并且不良反应少,安全性高。

食用菌壳聚糖-卡波姆复合凝胶的稳定性及其抑菌效果

以食用菌壳聚糖为原料，卡波姆为凝胶增稠剂，三乙醇胺为中和剂制备含1％壳聚糖的壳聚糖卡波姆复合凝胶，通过研究pH对该复合凝胶稳定性、色度、水分活度、质构特征及抑菌效果的影响，确定复合凝胶的最优pH值.结果表明：壳聚糖凝胶与卡波姆具有较好的相容性，复合凝胶的质地均匀细腻，无异味，性质温和，稳定性好；pH对复合凝胶的外观特性、水分活度、质构特性影响较小，但pH值越大，贮藏期内霉变越小；pH 7.0～7.5的复合凝胶对金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）、大肠埃希菌（ Escherichia coli）和白色假丝酵母菌（ Candida albicans）的抑菌效果特别明显，抑菌率分别为92％、94％和96％.

pH对魔芋胶复配体系凝胶特性及色泽的影响

考察pH对魔芋多糖、κ-卡拉胶与大豆分离蛋白混合凝胶强度、弹性、咀嚼性、黏度及色泽等的影响。结果表明:在强酸性条件下(pH<4),凝胶特性较差,但此时色泽最好,较透明,易于上色;随着酸度的减小(pH<pI),凝胶特性显著提高,此时凝胶特性较好,色泽呈乳白色;当到达蛋白质等电点时,表现出最高的凝胶强度和咀嚼性;当pH中性时,黏度最大,凝胶强度、弹性、咀嚼性均较高,色泽较好,呈乳白色;在碱性条件下,凝胶强度和咀嚼性有所提高,但是,当碱性超过一定值(pH>8),凝胶强度反而下降,凝胶偏黄,色泽较差且有浓碱味。

杏鲍菇胞壁β-葡聚糖的分离纯化及结构分析

杏鲍菇胞壁粗多糖经过羧甲基纤维素(CMC)离子交换柱、Sephadex G-75凝胶柱分离纯化得到一色谱纯多糖(PEWP)。采用高效液相色谱、红外光谱及化学分析等方法对PEWP的纯度、分子量及基本结构进行研究。结果表明:PEWP分子量为41 209 u,糖基组成为葡萄糖;红外光谱分析结果表明,PEWP具有多糖的特征吸收峰和典型的β-糖苷键构型;高碘酸氧化及Smith降解分析结果表明,PEWP中1→4糖苷键残基比例为83.3%,1→6糖苷键残基比例为12.8%,1→3糖苷键残基比例为2.4%,1→2糖苷键残基比例为1.5%。

高三尖杉酯碱联合阿糖胞苷治疗复发难治性急性髓系白血病

我们采用高三尖杉酯碱联合小剂量阿糖胞苷(HA方案)治疗复发难治急性髓系白血病1例并获得缓解,报告如下。

杏鲍菇β-葡聚糖促人胃粘膜上皮细胞增殖和迁移效果研究

为研究杏鲍菇β-葡聚糖(PEWP)对胃黏膜的保护作用,以含有不同浓度PEWP的培养液培养人胃黏膜上皮细胞,测定其增殖率和迁移率,并以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况。结果表明:低浓度PEWP能促进体外胃黏膜上皮细胞的增殖和迁移,加速损伤区域上皮细胞的生长,具有保护胃黏膜的作用。

壳聚糖涂膜对鲜切芋头保鲜效果的研究

本文主要研究不同浓度的壳聚糖可食性膜对鲜切芋头保鲜效果的影响,测定了冷藏期间主要的生理生化指标变化.实验结果表明:不同浓度的壳聚糖可食性膜对延缓鲜切芋头的褐变及可溶性固形物的降解、Vc含量的减少、可溶性总糖的降解都有一定的效果,其中以2%壳聚糖涂膜效果最为显著.

灵芝菌丝体对4种抗生素的敏感性研究

[目的]检测灵芝菌丝对4种抗生素卡那霉素、头胞霉素、氨苄青霉素、潮霉素的敏感性。[方法]在PDA培养基中分别添加不同浓度的4种抗生素,观察抗生素对灵芝菌丝生长的影响。[结果]头孢霉素、氨苄青霉素、卡那霉素对灵芝菌丝生长基本没有影响,在某些试验浓度中对菌丝生长还具有微弱的促进作用。潮霉素对灵芝菌丝生长具有较强的抑制作用,20mg/L的潮霉素能完全抑制灵芝菌丝的生长。[结论]为建立农杆菌介导的灵芝遗传转化提供理论依据。

蔬菜浓缩汁防褐变及后浑浊工艺的研究

本试验通过对蔬菜汁多酚氧化酶的钝化条件的研究,以及游离果胶酶对蔬菜汁果胶降解的正交设计试验和固定化果胶酶处理,得出结论:(1)在100℃下加热3min可使多酚氧化酶钝化,达到防止褐变的要求.(2)游离果胶酶的用量对产品可溶性固形物的含量影响最大,在F0.05(2,4)=6.940和F0.10(2,4)=4.320条件下,具有显著性;反应温度次之.(3)经过壳聚糖固定化酶处理后,蔬菜汁的澄清度比对照提高2.6%,色值比对照提高15.48%,可溶性固形物的含量提高了10%.4℃放置48h,可明显观察到经过固定化果胶酶处理后的蔬菜浓缩汁比对照具有很好的稳定性.

AmrB对嗜水气单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药性的影响

AmrB是药物外排系统的重要成员,探讨AmrB与嗜水气单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药性的关系,对研究嗜水气单胞菌耐药机制有重要意义。将amrB基因克隆至pET-28a载体上,双酶切和测序验证得到重组质粒amrB-pET-28a。对amrB-pET-28a/BL21进行诱导表达和镍柱纯化,制备得到效价为1∶6 400的兔抗AmrB抗血清。诱导获得嗜水气单胞菌AH1卡那霉素、链霉素和庆大霉素耐药菌株,Western blotting分析AmrB在耐药菌株中的表达量。Phoretix 1D和SPSS分析表明,AmrB的表达量在卡那霉素、链霉素和庆大霉素耐药菌株中显著地高于对照菌嗜水气单胞菌AH1,分别是对照的2.16、2.65和2.13倍,提示AmrB在嗜水气单胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药过程中起重要作用,这将有助于了解嗜水气单胞菌耐药的分子机制。

国产锁定加压钢板治疗股骨远端C型骨折的疗效分析

目的对国产锁定加压钢板治疗股骨远端C型骨折的临床效果进行埭讨。方法2008年1月至2010年6月，采用该方法治疗股骨远端C型骨折26例，术后定期复查，观察骨折愈合及膝关节功能恢复情况。结果26例获得6～24个月随访，随访结果膝关节功能恢复满意。结论国产锁定加压钢板治疗股骨远端C型骨折，膝关节功能恢复满意，并发症少。国产锁定加压钢板价格实患，能满足基层医院临床需求。