高毒力肺炎克雷伯菌hfq基因缺失株的构建及其生物学特性分析

目的构建高毒力肺炎克雷伯菌NTHU-K2044菌株hfq基因缺失株(△hfq),并通过表型试验分析hfq基因对高毒力肺炎克雷伯菌生长特性、环境适应能力和毒力等生物学特性的影响。方法利用同源重组技术对NTUH-K2044菌株进行hfq基因敲除;通过表型试验,比较高毒力肺炎克雷伯菌野生株和△hfq突变株在细菌生长速度、抗环境胁迫能力、生物膜形成、荚膜形成中性粒细胞杀菌活性和大蜡螟幼虫感染致死率等方面的差异性。结果成功构建高毒力肺炎克雷伯菌NTUH-K2044△hfq缺失株,表型试验表明△hfq缺失株的生长速度显著减慢,菌落变小和超黏性下降;在pH9、pH5.5、0.7 mmol/L SDS、5%NaCl、0.1%H2O2环境和50℃高温等环境胁迫条件下,△hfq缺失株生长受到显著抑制;在毒力方面,△hfq缺失株生物膜形成能力下降,荚膜形成能力下降且荚膜合成基因magA和rmpA表达量明显下降,中性粒细胞杀菌试验存活率下降,大蜡螟幼虫致死能力显著降低。结论Hfq蛋白作为RNA伴侣分子能够参与转录后调控进而对高毒力肺炎克雷伯菌生理、环境适应性及毒力致病性具有重要的调控作用。这为寻找治疗和控制高毒力高耐药肺炎克雷伯菌新靶标提供了基础。

CRKP血流感染危险因素和耐药及毒力特征

目的分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)血流感染危险因素、耐药及毒力特征。方法收集南昌大学第一附属医院从血液中分离的肺炎克雷伯菌(KP)248株,采用全自动微生物分析仪进行生化鉴定和药敏试验,根据药敏结果分为CRKP组73株,碳青霉烯类敏感的肺炎克雷伯菌(CSKP)组175株。病例系统查询两组KP血流感染患者所对应的临床资料,聚合酶链反应(PCR)检测两组菌株的耐药基因、荚膜血清型基因和毒力基因。结果多因素Logistic回归分析显示肾脏疾病、烧伤、机械通气、留置导尿管、留置引流管、碳青霉烯类抗菌药物使用和替加环素使用是碳青霉烯类抗菌药物耐药的独立危险因素(P<0.05)。血流感染中CRKP组患者病死率53.42%高于CSKP组患者(P<0.05)。CRKP组对15种抗菌药物的耐药率均大于CSKP组(P<0.05)。73株CRKP菌株中检测出KPC基因69株,阳性率为94.52%;NDM基因4株,阳性率为5.48%;其中有1株同时携带KPC和NDM基因。CRKP组检出3株K1型、2株K2型、1株K20型、2株K54型。结论本研究血流感染中CRKP菌以KPC为主,但也存在NDM的流行。CRKP菌株多药耐药情况严重,患者病死率高,并且出现高毒力血清荚膜分型。临床应针对CRKP血流感染独立危险因素,加以干预和控制。

耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌IS2-qnrS1的分子流行病学特征

目的 探究耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)IS2-qnrS1的分子流行病学特征。方法 收集南昌大学第一附属医院2018年1月-2019年6月分离的非重复CR-hvKP 96株。聚合酶链式反应(PCR)检测毒力和耐药基因,PCR连锁检测IS2与qnrS1,脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分析分子流行病学特征,血清抗性和生物膜试验分析毒力特征。结果 96株CR-hvKP菌中,IS2-qnrS1检出率为83.33%(80/96),mrkD、terW、silS和iutA基因携带率均>80.00%,IS2-qnrS1阳性CR-hvKP菌株均为K64荚膜血清型;所有菌株均表现出多药耐药,其中氟喹诺酮类耐药率为100.00%(80/80),且耐药基因qnrS1和KPC-2携带率均为100.00%,高于阴性组(P<0.001);临床资料表明:62.50%(50/80)患者来自重症监护室(ICU),12.50%(10/80)曾入住过ICU,标本来源以痰液(42.50%,34/80)和血液(30.00%,24/80)为主。PFGE和MLST数据显示,IS2-qnrS1阳性CR-hvKP菌具有克隆相关性,均属于ST11型-B克隆组。IS2-qnrS1阳性CR-hvKP菌中,42.50%(34/80)表现血清耐受。结论 IS2-qnrS1在医院CR-hvKP菌中存在克隆传播,均为ST11型-B克隆组,且携带多种毒力基因和耐药基因,呈现出较强血清耐受,应积极地防控IS2-qnrS1型CR-hvKP菌株感染,控制其传播。

K2血清型肺炎克雷伯菌毒力及分子流行病学特征

目的 探讨K2血清型肺炎克雷伯菌株(K2-Kpn)的多位点序列分型(MLST)、临床特点、毒力和分子流行病学特征。方法 收集南昌大学第一附属医院2014-2020年临床标本分离的非重复肺炎克雷伯菌1 603株,使用Vitek-2 Compact全自动微生物系统进行菌株鉴定及药敏试验,“拉丝”试验检测菌株高黏液表型(HM);聚合酶链式反应(PCR)检测6种荚膜血清型、9种毒力基因和13种常见耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和MLST分析同源性;血清抗性、生物膜和大蜡螟试验分析毒力表型。结果 检出18株K2-Kpn, HM试验阳性14株,均不携带magA基因,其他8种毒力基因的检出率均>70.00%;K2-Kpn检出耐碳青霉烯类和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的耐药株数均为4株,PCR检出产KPC型碳青霉烯酶1株、NDM型3株,产bla型β内酰胺酶5株、bla型7株和bla型1株,另有16株携带PMQR基因;在18株K2-Kpn中发现7种MLST型别(ST14、25、65、86、374、375和4025),类ST65是最主要的MLST组别,PFGE结果显示K2-Kpn具有多克隆性;K2-Kpn对血清杀伤均有抗性(除ST374和375外),表现不同的生物膜形成能力和大蜡螟毒力。结论 K2-Kpn在医院具有多克隆流行性,类ST65为其主要的临床流行株;血清抗性,生物膜形成和毒力基因携带是预测K2-Kpn高毒力菌株的主要参数;对老年且患有严重基础疾病患者,应积极地防控K2-Kpn感染和传播。