海藻糖低温保存血小板miRNA差异表达分析

目的探讨海藻糖低温保存血小板过程中miRNA的变化。方法收集3份来自相同血型无偿献血员的单采血小板,少量混匀后,平均分为2组。对照组:新鲜血小板组(22℃,100%血浆储存的新鲜血小板2 h);实验组:海藻糖低温保存血小板组(10℃,70%海藻糖保存液储存5 d);采用高通量测序方法对两组样品进行了Small RNA测序,进行生物信息分析,主要包括已知miRNA鉴定、miRNA差异表达分析及富集分析。结果 2组样品经Small RNA高通量测序,平均每个样品获得了11兆净读值(Clean reads),经过生物信息分析,分别获得了821个已知miRNA。通过差异表达分析,在已知的miRNA中共有460个差异表达miRNA,其中194个miRNA表达上调,266个miRNA表达下调,其中显著差异表达已知miRNA共44个,分别在钙离子通路、MAPK通路、凋亡路径、轴突导向等储存损伤相关路径中富集程度较高。相对于对照组,实验组中hsa-miR-4449、hsa-miR-1296表达显著上调(P<0.01,且差异倍数>2),hsa-miR-665表达被抑制。结论血小板经过海藻糖低温保存后的miRNA呈现出特征性表达变化,提示miRNA活动参与了低温时海藻糖对血小板储存损伤的保护作用。

海藻糖低温保护血小板的研究进展

细胞治疗已经成为临床广泛采用的治疗方法,其中输注血小板制剂是治疗各种原因导致的血小板减少、外科急创伤和手术大出血的重要手段。常规使用的22℃震荡保存法会使血小板制剂存在细菌繁殖和血小板活化的风险。为了提高血小板制剂储存质量,减少储存损伤的发生,人们尝试在低温条件下用海藻糖保存液保护血小板,取得了一定效果。本文就低温条件下海藻糖保护血小板的研究进展进行综述。

地震伤员后期治疗临床用血分析

目的了解地震伤员后期临床用血特点及分布,更好地指导突发事件的血液贮备,保障及时有效的血液供应。方法对本院收治的地震后期外送的147名伤员进行临床用血的回顾性分析。结果全部地震伤员中共有76名临床用血,占收治伤者的51.70%,大多数为手术治疗时用血。平均用血红细胞和血浆用量超过1000ml和1500ml,以A和O型者为多。冷沉淀和血小板用量较少。结论地震突发事件后伤者后期临床用血主要发生在手术治疗过程中,红细胞用量较大;由于伤情多有挤压伤,其血浆用量也较大。应做好应急预案,保障足够的血液供应。

血小板裂解液的制备及生物学效应观察

目的制备高含量细胞因子的血小板裂解液（PL）。方法采用反复冻融法[-80℃~37℃冻融3次（冻24 h/次）]和超声法（285 W,每次超声处理5 s停止5 s,共10次）处理10份单采血小板制剂（30 m L/份）,ELISA法对细胞因子,血小板衍生长因子（PDGF）-AA、PDGF-AB、PDGF-BB,转化生长因子-β1（TGF-β1）,血管内皮生长因子165（VEGF165）检测,同时将2种方法制备的PL按10%比例加入常规培养基DMEM/F12培养第5代人脐血间充质干细胞,观察传至第7代细胞增殖情况,并与FBS液培养（组）比较。结果血小板保存3 d后制备成的PL各因子含量均升高,0 d浆与3 d浆相比,PDGF-AA（ng/m L）为0.071±0.024 vs 2.494±0.326,PDGF-AB（pg/m L）为36.079±15.54 vs 5 866.572±859.31,PDGF-BB（pg/m L）为33.258±21.23 vs 641.69±80.58;VEGF165（pg/m L）为26.661±5.42 vs 122.652±10.59;TGF-β1（pg/m L）为55.556±6.16 vs 3 930.022±827.68（P〈0.05或〈0.01）。超声法可释放更高含量的细胞因子,3 d反复冻融组与3 d超声组比较,PDGF-AA（ng/m L）为0.095±0.025 vs 1.28±0.236,PDGF-AB（pg/m L）为12 424.746±3 738.03 vs 19 610.987±10 430.26;PDGF-BB（pg/m L）为5 429.184±1 824.53 vs8 397.039±611.93;VEGF165（pg/m L）为128.379±46.69 vs 374.552±32.48;TGF-β1（pg/m L）为8 820.789±1 755.45 vs 14 686.780±7 164.89（P〈0.05或〈0.01）。结论反复冻融法和超声法均能有效释放血小板内的细胞因子;超声法处理血小板能释放更高含量的细胞因子,可替代FBS用于细胞培养。

1种新型血细胞处理仪的性能评价

目的评价南格尔血细胞处理仪BBS926的主要性能指标。方法分别以ACP215全自动血液细胞处理系统制备冰冻解冻去甘油红细胞和手工制备洗涤红细胞为对照组,NGL BBS 926制备冰冻解冻去甘油红细胞和洗涤红细胞为试验组,按照GB18469-2012版《全血及成分血质量要求》对获得的产品进行外观,血容量,白细胞残留数,血红蛋白含量,上清FHb含量,体外溶血率,甘油的残余量,细菌污染等指标检测。结果 ACP215组和NGL BBS926实验组制备的冰冻解冻去甘油红细胞上清中FHb含量分别为(0.28±0.07)g/L和(0.40±0.16)g/L,溶血率分别为(0.13±0.02)%和(0.34±0.20)%,2者间差异具统计学差异,对照组优于试验组,但均满足国家标准。手工组和NGL BBS 926获得的洗涤红细胞HGb含量分别为(56.78±7.75)g和(50.64±3.82)g,上清FHb含量分别为(0.32±0.18)g/L和(0.62±0.42)g/L,溶血率分别为(0.08±0.05)%和(0.17±0.11)%,2者间差异均具统计学意义,对照组优于试验组,但均满足国家标准。结论该处理仪所制备的血细胞产品各项指标均符合国家《全血及成分血质量要求》,且具自动化、高效、避免污染等优点,可用于临床血细胞处理。

基于磁珠的ABO血型蛋白质芯片的构建及初步应用分析

目的构建一种以磁珠为标记物的,用于血型检测的可视化蛋白质芯片。方法用人免疫球蛋白G(IgG)及磁珠标记的抗人IgG进行琼脂糖浓度、点样浓度、温度和固定时间等实验条件的摸索。根据优化的条件,经过铺片、点样、固定、封闭等程序构建ABO血型检测蛋白质微阵列,加入血液样品进行反应,最后用磁珠标记的抗体进行检测。结果通过条件的优化发现,在1.0%的琼脂糖基片表面,以100μg/mL的蛋白质稀释液点样,之后在24℃固定8h,能够得到更优的信号强度。检测不同稀释度的抗原抗体,正定型效价可达到1∶819 2,反定型可达到1∶4 096。检测14例临床样品,结果样点清晰、肉眼可见,且结果判定与试管法一致性达100%。结论成功构建了基于磁珠的血型检测可视化蛋白质微阵列。

游离背阔肌扩张皮瓣移植修复严重烧伤后腹壁瘢痕畸形1例

腹壁烧伤瘢痕临床中相对少见,往往会导致严重的畸形和功能障碍。育龄女性大多有生育需求,腹部烧伤瘢痕将阻碍孕程中腹部的正常扩张,但其对女性生育的风险影响目前尚无确切的评价依据[1-4]。随着现代社会的发展,人们对腹壁的外观提出了更高的要求,女性尤甚。

人诱导多能干细胞体外扩增生成红系集落并构建红系祖细胞株的研究

目的将人诱导多能干细胞(hi PSCs)分化成为红系祖细胞并构建稳定的红系祖细胞株。方法采用与滋养层细胞共培养的方式,添加10 ng/m L的TPO、5 U/m L的EPO、25 ng/m L的SCF、5 ng/m L的Flt-3、20 ng/m L的IL-3的诱导因子,诱导hi PSCs分化成为红系集落,构建稳定的红系祖细胞株;倒置显微镜观察获得的细胞株形态,瑞氏染色并计数,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞表面标志物。结果 hi PSCs诱导构建的红系祖细胞株遗传性状稳定并可长期传代,细胞呈集落样生长,外观上与正常红系祖细胞无差异。分类计数构建的红系祖细胞株比例(%):P0与P5代细胞为84.90±4.93 vs 72.20±6.24(P<0.05);流式检测,hi PSCs诱导构建的红系祖细胞株细胞表面标志物CD235a阳性率(%)表达:P0与P5代细胞为3.02±0.75 vs 5.87±0.37(P<0.05)。结论诱导hi PSCs生成的红系祖细胞株在表面标志继承性和遗传性状方面都是稳定的。

多能干细胞诱导分化成血小板的研究进展

人类多能干细胞包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞,二者均可以在体外无限增殖及实现向巨核系分化,从而产生血小板,现已成为研究血小板生成的有力工具,尤其是特定疾病来源的诱导多能干细胞更是研究血小板疾病发病机制及药物筛选的重要工具。随着血小板体外培养技术的不断进步,相信在不久的将来各种基因相关的血小板疾病发病机制可以得到明确。此外,诱导多能干细胞来源的血小板也可作为临床用血的重要来源。

采用扩张桡动脉分叶皮瓣美学修复面部严重瘢痕挛缩畸形

目的探讨采用扩张的桡动脉分叶皮瓣一次性修复面部严重瘢痕挛缩畸形患者多器官亚单位的美学效果。方法回顾性分析自2020年5月至2022年5月,陆军军医大学第一附属医院整形外科收治的4例面部严重瘢痕挛缩患者的临床资料。均一期于前臂埋置扩张器并定期注水形成扩张桡动脉皮瓣;二期术前通过数字减影血管造影标记桡动脉穿支位置;术中切除并彻底松解面部瘢痕,对严重鼻畸形患者行自体肋软骨鼻支架搭建;根据术前穿支定位及面部继发创面大小,设计并切取扩张桡动脉分叶皮瓣行游离移植,一次性实现对面部多器官亚单位(两个及以上)的美学重建。术后随访观察6~12个月面部器官亚单位形态与美学特征,评估患者满意度、术后浅感觉恢复和瘢痕情况。结果4例患者共于前臂埋置扩张器4个,扩张倍数2.2~8.0倍,无扩张器破裂、皮肤坏死等并发症发生。术中利用分叶皮瓣修复4个亚单位患者1例(鼻部、口周、眼周、颏部),3个亚单位患者2例(鼻部、口周、眼周),2个亚单位患者1例(鼻部、眼周)术后皮瓣均成活,无严重血管危象发生;3例供区直接缝合,1例联合皮片移植封闭供区。术后随访6~12个月,皮瓣厚度、色泽等与周围组织相近,面部器官及其亚单位美学特征显著改善,触压觉、痛觉、温度觉均不同程度恢复,术区瘢痕评分显著改善,供区恢复较好,无明显并发症发生;患者术后满意度较高。结论采用扩张桡动脉分叶皮瓣可以一次性重构面部多器官亚单位,并取得良好的美学效果,是面部多器官严重瘢痕挛缩畸形美学修复的良好策略。