高原低氧对雄性大鼠学习记忆及其额叶中的NR2A、P-NR2A、P-NR2B表达影响

目的探讨高原低氧对雄性大鼠学习记忆及其额叶中的NR2A、P-NR2A、P-NR2B表达影响。方法将48只SPF级的SD大鼠随机分为常氧组(分为1D组、5D组、12D组)和低氧组(分为1D组、5D组、12D组),共6组(8只/组)。通过水迷宫法评价雄性大鼠学习记忆能力,HE染色法观察额叶组织神经细胞形态,Western Blot法检测NR2A、P-NR2A、P-NR2B表达情况。结果水迷宫实验结果显示,随着训练次数的增加,大鼠发现平台的路程逐渐缩短;随着遗忘时间延长,大鼠穿越平台目标象限的次数减少。HE染色实验结果显示,各组额叶神经细胞结构形态完整,常氧组与低氧组神经细胞形态结构及数量无显著差异。在相同时间点与常氧组比,低氧组的NR2A在第一、五天的表达明显升高,在第十二天降低,差异有统计学意义(P<0.05);低氧组的P-NR2A、P-NR2B表达均明显升高(P<0.05)。结论低氧对雄性大鼠学习记忆能力均有一定程度的损害,可能机制是下调NR2A蛋白,上调P-NR2A蛋白,P-NR2B蛋白表达。

高原鼠兔、高原鼢鼠肠道菌群对低压低氧环境下大鼠海马组织Aβ、Tau及BDNF蛋白的影响

为了探究暴露低压低氧不同时间以及移植高原鼠兔、高原鼢鼠肠道菌群后暴露低压低氧环境是否会影响SD大鼠海马组织β淀粉样蛋白(beta-amyloid protein, Aβ)、tau及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表达水平,首先将SD大鼠随机分为常氧组、低压低氧组和低压低氧处理组,低压低氧组根据暴露低压低氧时间又分为第1、3、7、15、28天组,低压低氧处理组则根据处理因素分为低压低氧对照组、低压低氧+抗生素处理组、低压低氧+抗生素+鼢鼠菌处理组、低压低氧+抗生素+鼠兔菌处理组、低压低氧+抗生素+SD大鼠菌处理组(10只/组),共11组;然后采用尼氏染色观察常氧组和低压低氧组海马组织神经细胞的形态变化,采用Western-blot检测各组Aβ、tau及BDNF蛋白表达水平。结果显示,与常氧组相比,低压低氧组从第3天开始海马组织CA1区的神经细胞排列疏松紊乱,细胞核固缩明显,并具有时间依赖性;Aβ、tau蛋白水平分别从低压低氧暴露第7天、3天开始显著升高,并随低压低氧暴露时间的延长进一步升高,其中以tau蛋白升高尤为明显;BDNF蛋白在低压低氧暴露初期显著升高,而后随低压低氧暴露时间的延长逐渐降低,与Aβ和tau蛋白水平呈现显著的负相关。此外,与抗生素处理组相比,在低压低氧环境下,移植高原鼠兔肠道菌群的大鼠海马组织中Aβ、tau蛋白的表达显著下降, BDNF的表达明显升高。实验结果初步表明,低压低氧可上调大鼠海马组织Aβ、tau蛋白表达,下调BDNF蛋白表达;肠道菌群移植可上调低压低氧环境下大鼠海马组织BDNF蛋白的表达,同时影响Aβ、tau蛋白的表达,其中高原鼠兔肠道菌群移植大鼠海马组织中的Aβ、tau蛋白水平被下调,高原鼢鼠肠道菌群移植大鼠海马组织中的tau蛋白水平被上调, Aβ蛋白水平被下调。

高原低氧暴露下海马中M1AChR表达对雄性大鼠学习和记忆的影响

目的 考察高原低氧暴露下海马中毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1(muscarinic acetylcholine receptor M1,M1 AChR)表达对雄性大鼠学习和记忆的影响。方法 将大鼠随机分为常氧对照组(NC组)、常氧组(N组)、低氧组(H组)和低氧+TAK-071组(HT组)。采用定位巡航实验和空间探索实验分别考察大鼠的学习和空间记忆能力;采用苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)技术观察大鼠额叶和海马的组织形态;采用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色和蛋白质印迹(Western Blot,WB)技术测定大鼠海马组织中M1 AchR的蛋白表达水平;采用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)技术测定大鼠海马组织中M1 AchR和叉头框蛋白P2(forkhead box protein P2,FOXP2)的基因表达水平。结果 经过Morris水迷宫(morris water maze,MWM)训练后,大鼠海马组织中M1 AChR的蛋白总体表达水平明显降低(P<0.05),但在海马CA1区、CA3区显著增加(P<0.05)。低氧环境会明显改变大鼠在定位巡航实验中的表现:逃避潜伏期时长增加;明显改变大鼠在空间探索实验中的表现:在目标象限的停留时间减少(P<0.05)。激活M1AChR后,大鼠海马组织中因低氧增加的M1 AChR明显降低(P<0.05)。结论 激活M1 AChR可以改善高原低氧对雄性大鼠的记忆损伤,减缓记忆衰退进程;对学习改善无影响。推测M1 AChR在雄性大鼠认知功能中的作用可能是保持已有记忆。

宫颈液基细胞块制备法的对比研究

目的探讨不同的宫颈细胞蜡块制作方法对制片质量的影响,以探索宫颈细胞蜡块制作较为理想的方法为宫颈细胞病理诊断提供帮助。方法收集广西医科大学第四附属医院病理科2017年10月至2018年6月宫颈液基细胞学检测的剩余标本45例,以直接取细胞沉渣法、琼脂包裹法、试剂盒制备法各收集15例细胞沉渣。采用常规石蜡切片HE染色,对三种细胞蜡块制作方法及效果进行对比分析。结果直接取细胞沉渣法取得的细胞量相对较少,制备时间长,切片内细胞片状聚集或堆叠;琼脂包裹法和试剂盒制备法取得的细胞沉渣较多,前者制备时间较长,切片内细胞平铺,较分散,可见淡蓝色琼脂背景;后者用时短,细胞平铺且集中,背景干净。结论直接取细胞沉渣法操作简单,成本低,但制备时间长,标本利用率不高;琼脂包裹法成本较低,制片效果良好,标本利用率较高,但操作时间较长且操作步骤较繁琐;试剂盒制备法操作简单,用时短,标本利用率高,制片效果好,但其成本较高。对于基层医院,可推荐采用琼脂包裹法,成本低,效果较好;对于经济条件较好的地区以及细胞量少的标本,试剂盒制备法可提高标本利用率,节约工作时间,是一种较为理想的细胞蜡块制备法。

宫颈细胞蜡块制作方法在宫颈病变筛查中的比较研究

目的比较三种不同的细胞蜡块制作方法在宫颈病变筛查中的作用,探索更好的宫颈细胞蜡块制作方法,提高诊断准确率,使患者在早期筛查中得到合理分流。方法收集柳州市工人医院2018年1月~12月妇科宫颈液基细胞学检测(TCT)剩余样本270例,其中炎症、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL),鳞状细胞癌(SCC)的病例,分别为148例、35例、72例、15例。将同一样本分为3份,分别用传统琼脂包埋法、琼脂温箱凝固包埋法、琼脂冷冻凝固包埋法进行细胞蜡块制备。比较三种方法制片效果、诊断阳性率及诊断的符合率。结果三种细胞蜡块制备方法对高级别以上病变筛查阳性率与TCT诊断结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);传统琼脂包埋法的符合率较低,与另外两种琼脂包埋法比较,差异有统计学意义(P<0.05);琼脂温箱包埋法与琼脂冷冻包埋法诊断符合率较高,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);琼脂冷冻包埋法细胞更集中、平铺,制作简便。结论宫颈细胞蜡块制备可以辅助宫颈病变早期分流,琼脂冷冻包埋法是一种较好的宫颈细胞制备方法。