间充质干细胞与脐血联合移植的Ⅰ期临床观察

为促进无关供体脐血移植( UD- UCBT)患儿的造血干细胞( HSC)植入和造血恢复,我们在 2001年 9月至 2003年 3月,以自体或异基因双亲(母亲或父亲)骨髓源性间充质干细胞( MSC)联合脐血移植的Ⅰ期临床观察,探讨 MSC是否可促进 HSC植入及造血恢复、对 GVHD的影响及安全性.

同种异基因脐血移植小鼠模型的建立

探讨胎鼠及新生鼠外周血 (FNPB)移植特性 ,建立同种异基因脐血移植小鼠模型。采用体外集落培养和流式细胞术的方法 ,检测FNPB与骨髓 (BM )造血干 /祖细胞含量与特性。给致死量环磷酰胺预处理的BALB/c(H 2 d)小鼠经尾静脉输注C57BL/ 6(H 2 b)小鼠FNPB ,移植后动态观察受鼠存活状况、植入水平、造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病 (GVHD)发生情况。结果显示 :FNPB中早期红系祖细胞 (BFU E)和CD34+ 细胞含量与BM相近 ,粒单系祖细胞 (CFU GM) (1 4天 ) ,多向祖细胞 (CFU GEMM )及Sca 1 + CD34+ 细胞亚群明显高于BM。FNPB移植能明显提高受鼠存活率 ,重建部分造血与免疫功能 ,未见明显GVHD表现 ,并在受体术后 2 1天骨髓检出供体源造血干细胞占 2 7.94%。结论 :FNPB富含造血干 /祖细胞 。

38例脐血粒系祖细胞体外培养的观察

本文报告用体外单层半固体琼脂培养法检测38例新生儿脐血粒—巨噬系祖细咆集落(CFU-GM),以观察人脐血造血功能。结果:38例中17例脐血7天CFU-GM产率56.11±74.37/2×10~5((?)±SD),范围10～292/2×10~5,丛38.87土2.27/2×10~5((?)±SD),范围3～145/2×10~5,其中6例14天CFU-GM产率58.67±7.55((?)±SD),范围11～118/2×10~5,以巨大集落为主,≥1000个细胞,该组CFU-GM产率在对照组成人骨髓范围内;21例脐血7天CFU-GM产率20.85±0.55/10~5((?)±SD),范围0～45/10~5,比成人外周血多。可见人脐血富含粒—巨乐造血干/祖细胞。

胎盘血移植特性的研究——Ⅰ.人胎盘血粒单系祖细胞体外长期培养观察

本文采用体外甲基纤维素长期培养观察脐血(又称胎盘血)粒单系集落形成单位(CFU—GM)生长情况。结果:脐血(n=20)7、14、21、28天CFU—GM产率分别为28.78±37.82、143.30±168.64、286.40±497.00、107.93±131.98/2×10~5,35天(n=13)为93.27±111.20,42天(n=6)为68.67±103.30/2×10~5;14、21、28天脐血与7天骨髓的产率(180.91±134.07)无明显差异(P>0.05)。正常骨髓CFU-GM产率:14天(n=11)、21天(n=9)、28天(n=6)分别为115.14±87.85、59.81±68.05、25.00±20.45/2×10~5,14天集落产率开始下降,21天后明显减少;14天后集落脐血明显大于骨髓,细胞>1000个细胞,有些特大集落,>5000个细胞;脐血集落细胞于35天开始部分溶解(骨髓为14天,21天时多已完全溶解)。可见脐血造血细胞体外培养维持时间明显长于骨髓造血细胞(4～6^+周/3周~±),表明脐血造血细胞的生物学特性不同于骨髓造血细胞——富含扩增潜能更强、可维持长期造血重建的早期造血干细胞群。

非血缘异基因脐血造血干细胞移植现状、问题与对策

非血缘异基因脐血移植(UCBT)自1988年第一例发展至今已经经历了20年。全世界报道脐血移植的病例已经累积10 000例以上。大量的临床研究报告和统计学处理结果已有力地证实非血缘异基因脐血移植是有显效的,HLA0-1位点不合的UCBT的临床TRM、复发率和无复发生存率等数据和HLA全相合骨髓移植的相仿,但UCBT的重度GVHD发生率明显减少。已经公认:异基因脐血无疑是一个造血干细胞随时可取到的新来源,尤其当病人不能及时找到合适的HLA全相合非血缘骨髓供者,也没有单倍体相合的外周血供者时。近年来,异基因脐血移植的两大新发展,一是脐血双份移植,一是脐血移植用于非恶性的难治性疾病治疗(如重症免疫缺损、地中海贫血、骨髓衰竭综合症和代谢障碍病等等)。脐血双份移植用于大体重儿童或成人病例并获得成功报告越来越多,其发展势头超过了儿童单份UCBT病例。双份异基因脐血移植的临床成功实践给有关基础研究提出许多令人困惑而又饶有兴趣的问题,例如HLA互不相合的双份脐血在体内的'斗争'究竟是什么,为什么不破坏整个移植,反而提高了植入率?双份脐血有核细胞剂量之和并不高于单份脐血移植成功的剂量,而每单份的细胞剂量都低于单份脐血移植成功需要的剂量,这样反而提高了植入率,为什么?双份脐血之间,受者之间的HLA都互不相合,为什么受者可以在第一阶段容纳双份脐血同时植入,以后双份脐血中只有一份可长期植入,又为什么?那一份脐血细胞能优胜而长期植入的因素是什么?本文参考国际UCBT文献,就如何评价非血缘性异基因UCBT存在的问题,采取对策及其发展前景,加以讨论。

造血干细胞移植治疗儿童白血病若干问题

该文涉及各类儿童造血干细胞移植(HSCT),如骨髓移植(BMT)、外周血造血干细胞移植(PBSCT)和脐血移植(UCBT)治疗白血病的优缺点及HSCT在儿童白血病治疗中的地位。绝大多数儿童白血病可通过正规联合化疗根治,仅少数(约20%)高危、难治及复发的白血病是异基因HSCT的适应证,无适合的同胞供体时,可选择HLA全相合非血缘相关BMT或PBSCT,UD-UCBT更适合于儿童患者。

HGFs联合对体外人脐血造血干细胞及SCID小鼠体内扩增作用的研究

本实验应用外源性重组人多种造血生长因子(rhHGFs)处理人HSC/SCID小鼠模型,以体外半固体培养法及FCAS检测CFU-GM、CFU-GEMM及CD34^+细胞。从而评价HGFs对受鼠体内人造血干细胞的扩增作用。结果:人脐血及骨髓MNC经孵育24小时后CD34^+细胞含量,CFU-GM、CFU-GEMM产率皆得到明显扩增(P<0.01),且脐血组优于骨髓组(P<0.01)。输脐血MNC+HGFs组小鼠骨髓MNC中人CD34^+细胞含量、CFU-GM及CFU-GEMM产率皆明显高于单输脐血MNc组(P<0.01)及输骨髓MNC+HGFs组(P<0.01),表明脐血造血干细胞对HGFs作用更敏感,扩增潜能更强。

地中海贫血的临床用药

HLA相合同胞供体的造血干细胞移植是根治重症β地中海贫血(简称“地贫”)的有效方法。基因治疗仍在实验研究阶段,有些开启γ或β链合成的药物如羟基脲、丁酸盐等对某些β地贫基因突变型(如-28,-654-2)等重型或中间型地中海贫血有效,可提高血红蛋白水平20～40 g/L,改善贫血症状。正规高量输血与去铁联合治疗是重症β地贫的基本辅助治疗,目前用于临床有效的去铁螯合剂有静脉/皮下输注的去铁胺,口服的去铁酮(L1)及ILC670(正进入Ⅲ期临床试验)。

血癌不再是绝症——浅谈小儿急性淋巴细胞性白血病的化疗

急性淋巴细胞性白血病(ALL)是儿童最常见的恶性肿瘤,俗称为血癌.10年前我国小儿ALL的缓解率及5年无病生存率都很低,那时患儿一旦被确诊为ALL就等于被判了死刑.该病不但死亡率高,且在漫长的3～4年的治疗过程中各种化疗药物的毒副作用及多次骨髓穿刺术、腰椎穿刺术给患儿身体带来难以用语言表达的痛苦.此外,患儿的痛苦及担心复发的心理往往将患儿及其亲人推入绝望的深渊.

人AGM区基质细胞系的建立及其生物学特性

【目的】建立人主动脉鄄性腺鄄中肾(AGM)区基质细胞系,研究其生长特性及表面标志的表达。【方法】取孕30～35d的人胚胎分离培养AGM区基质细胞,传代培养成系并检测其增殖能力,应用流式细胞术、免疫荧光方法检测其造血相关表面标志和细胞外基质蛋白成分。【结果】人AGM区基质细胞呈成纤维样形态,指数生长期倍增时间约为16h。流式细胞仪检测结果显示CD31、CD34、CD45在人AGM区基质细胞表面为阴性表达,而CD29、CD44、CD105、CD166均为阳性表达。免疫荧光检测结果显示AGM区基质细胞表达细胞外基质蛋白Tenascin、Fibronectin、Laminin及α鄄SMA。【结论】人AGM区基质细胞系呈现造血组织特异的相关分子表达特征,可以作为研究造血发生机理的模式细胞。

联合使用干细胞因子、FLT3配基与白介素2,7,15体外扩增人脐血来源CIK/NK细胞

通过干细胞因子 (SCF)、FLT3配基 (FL)联合白介素 (IL) 2 ,7,15等的不同组合体系体外扩增人脐血来源的CIK NK细胞 (CB CIK NK) ,探讨不同培养方式对CB CIK NK细胞诱导、扩增产率的影响。按诱导扩增体系的不同分 3组 :A组 (SCF +IL2 +IL7+IL15 ) ,B组 (SCF +FL +IL2 +IL7+IL15 )和C组 (IL2 +IL7+IL15 ,对照组 ) ,培养 2 1天 ,检测CD3+ CD5 6 + CIK细胞、CD3- CD5 6 + NK细胞比例和扩增倍数。结果表明 :经 2 1天培养 ,A ,B及C组CIK细胞比例分别为 (19.84± 2 .93) %、(2 6 .2 0± 4 .0 5 ) %及 (2 4 .0 3± 4 .99) % ;而NK细胞的比例A、B及C组比例分别为 (4 9.6 0± 1.4 0 ) %、(5 1.16± 6 .4 5 ) %及 (30 .85± 8.12 ) %。含SCF +FL的B组扩增效率最高 ,其中CIK细胞的扩增倍数由对照组 (C组 )的 (5 75 81± 2 2 1.72 )倍增加至 (796 .0 9± 2 78.4 7)倍 (最高为 1313倍 ) ;NK细胞由对照组 (C组 )的 (30 .39± 14 .4 7)倍增加至 (6 5 .85± 30 .83)倍 (最高为 12 1.0 6倍 )。结论 :通过合适的细胞因子组合可以同时扩增CB来源的CIK NK细胞 ;联合诱导、扩增CB CIK NK细胞以采用含SCF +FL +IL2 +IL7+IL15的培养体系为佳。

哮喘患儿IL-4、IL-12与IgE水平的初步研究

采用双抗夹心EIASA法测定30例哮喘发作期、12例哮喘缓解期患儿血浆及外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素12(IL-12)与血清IgE的水平,结果表明:哮喘患儿发作期、缓解期血清IgE水平、血浆及PBMC经PHA和LPS刺激后的IL-4水平较正常对照组明显升高(P<0.01),IL-12水平较正常对照组明显降低(P<0.01)。且缓解期IgE、IL-4及IL-12水平较发作期均有明显差异(P<0.05)。提示哮喘患儿发作期及缓解期均存在IgE、IL-4及IL-12水平失衡。

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组(P<0.05);转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组(P<0.05);Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关(r=0.731),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.685);GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关(r=-0.692),与Th2细胞比率呈正相关(r=0.717);T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关(r=0.793),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.639),与Th1/Th2比值呈正相关(r=0.801)。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。