显微镜观察药敏检测技术检测结核分枝杆菌耐药性研究

目的建立快速测定耐药结核分枝杆菌(MTB)的显微镜观察药敏检测(MODS)技术,并评价其临床应用价值。方法采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对最佳检测条件进行探讨。应用该技术对192株MTB临床分离株进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的药敏检测,并与传统绝对浓度法药敏结果进行比较,对两法检测结果不一致的菌株进行BACTEC-960测定。结果 MODS药敏检测时间中位数为6d。以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS技术进行利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星药敏检测的敏感度分别为97.8%、98.7%、88.4%、93.2%、96.4%;特异度分别为98.0%、94.8%、94.3%、99.0%、95.6%;符合率分别为97.9%、96.4%、92.1%、96.4%、95.8%。结结论 MODS技术可作为MTB耐药性的快速检测方法。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1对巨噬细胞极化影响的研究

目的研究长链非编码RNA(lnc RNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对巨噬细胞极化的影响。方法采用佛波酯诱导人THP-1细胞分化为成熟的巨噬细胞,IFN-γ/LPS刺激诱导M1型极化,IL-4刺激诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测各组细胞中MALAT1的表达。si RNA干扰巨噬细胞MALAT1表达,加入IL-4继续诱导M2型极化,RT-q PCR检测极化相关基因表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-12、CCL22、IL-10的水平。si RNA干扰M2型巨噬细胞MALAT1表达,研究其对M2极化表型的影响。结果 MALAT1在M2型巨噬细胞中表达显著升高,M1向M2极化改变MALAT1表达升高,而M2向M1极化改变MALAT1表达降低。MALAT1干扰后,IL-4诱导的M2型巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低;CXCL10、CXCL11、HLA-DR表达升高,CCL17、CCL18、CD163表达降低。M2型巨噬细胞MALAT1干扰后,TNF-α、IL-12分泌升高,CCL22、IL-10分泌降低。结论 MALAT1参与调控巨噬细胞极化,干扰MALAT1表达有效抑制M2型巨噬细胞极化,促进M1型巨噬细胞极化。

类风湿关节炎外周血单核细胞亚群CD64表达及意义

目的:探讨CD64在类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞亚群上的表达及临床意义,以阐明其在RA发生和发展中的作用。方法:应用流式细胞仪检测44例RA患者和22例正常对照者外周血单核细胞亚群的比例及其CD64的表达,比较RA组和正常对照组之间各单核细胞亚群的比例及其表面CD64表达水平,并分析各单核细胞亚群表面CD64表达与实验室检查数据的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson或Spearman相关分析。结果:(1)RA组中间型单核细胞比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);RA组经典型单核细胞比例和非经典型单核细胞比例低于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(2)RA组各单核细胞亚群CD64表达(MFI)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)RA患者外周血经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达(MFI)与DAS28呈正相关(rs=0.308,P=0.044;rs=0.302,P=0.049)。(4)RA患者各单核细胞亚群CD64表达(MFI)与ESR,CRP呈正相关(rs=0.410,P=0.008;rs=0.475,P=0.003;rs=0.448,P=0.003;rs=0.473,P=0.004;rs=0.348,P=0.026;rs=0.340,P=0.042)。(5)RA患者RF阳性组、ACPA阳性组外周血经典型单核细胞、中间型单核细胞上CD64表达(MFI)明显高于对应的阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(6)中间型单核细胞CD64高表达组血清细胞因子IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RA患者外周血单核细胞亚群CD64表达异常,经典型单核细胞和中间型单核细胞CD64表达与炎症水平、自身抗体产生和疾病活动性有明确的相关性。以外,中间型单核细胞CD64的表达与细胞因子相关。

系统性红斑狼疮患者外周血CD4^+T细胞TIGIT的表达和意义

目的探讨TIGIT在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4^+T细胞上的表达及临床意义,以阐明其在SLE发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测50例SLE患者和27例健康对照者外周血CD4^+T细胞表面TIGIT表达水平,比较SLE组和健康对照组以及SLE稳定组和SLE活动组之间CD4^+T细胞表面TIGIT表达水平,并分析其与实验室检查数据及治疗的相关性。2组间比较采用t检验或者非参数检验,2个变量之间相关性采用Pearson相关分析。结果 SLE组CD4^+T细胞TIGIT表达水平显著高于健康对照组(P<0.000 1),SLE活动组CD4^+T细胞TIGIT表达水平显著高于SLE稳定组(P<0.05)。SLE患者中抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体阳性组外周血CD4^+T细胞TIGIT表达水平均高于对应阴性组(P<0.05)。SLE患者CD4^+T细胞TIGIT表达水平与SLE疾病活动度指数(SLEDAI)、尿微量白蛋白、尿Ig G、尿转铁蛋白呈正相关(P<0.05)。结论 SLE患者外周血CD4^+T细胞TIGIT表达异常,与SLEDAI、自身抗体产生、肾损伤有明确的相关性。

CD64在RA患者单核细胞中的表达及与TNF-α的相关性研究

目的探讨CD64在类风湿关节炎(RA)患者单核细胞中的表达及与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的相关性,以阐明其在RA中的作用。方法应用流式细胞仪检测46例RA患者和22例正常对照者外周血单核细胞表面CD64表达水平以及RA患者外周血单核细胞分泌TNF-α水平,比较RA组和正常对照组以及RA稳定组与RA活动组之间单核细胞表面CD64表达水平,并分析CD64与实验室检查数据以及TNF-α的相关性。正态分布数据采用采用t检验、配对t检验和Pearson相关性,非正态分布数据采用非参数检验和Spearman相关分析。结果 RA组单核细胞CD64表达的平均荧光强度(MFI)显著高于正常对照组(P=0. 010),RA活动组单核细胞CD64表达的MFI显著高于RA稳定组(P=0. 040)。RA患者单核细胞CD64表达的MFI与RA疾病活动性评分(DAS28)、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)呈正相关性(P <0. 05)。RA患者中抗环瓜氨酸多肽抗体(ACPA)阳性组和类风湿因子(RF)阳性组外周血单核细胞CD64表达的MFI均高于对应阴性组(P=0. 048,P=0. 004)。此外,RA患者中CD64阳性外周血单核细胞TNF-α表达水平高于阴性单核细胞(P=0. 014)。结论 RA患者外周血单核细胞CD64表达的MFI强度升高,且与疾病活动性相关。

类风湿关节炎单核巨噬细胞极化表型分析及临床意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者和骨关节炎(OA)患者的单核巨噬细胞极化表型以及临床意义,以阐明其在RA和OA发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测28例RA患者和20例OA外周血单核细胞表面以及28例RA患者和6例OA患者关节腔积液巨噬细胞表面极化指标表达水平,比较RA组和OA组之间单核细胞表面以及RA组和OA组之间巨噬细胞表面极化指标表达水平,并分析RA患者关节腔积液巨噬细胞表面极化指标与实验室检查数据的相关性。两组间比较采用t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson或Spearman相关分析。结果 (1)RA组外周血单核细胞CD163、CD206、CD40、CD64和HLA-DR表达的平均荧光强度(MFI)显著高于OA组(P<0.05)。(2)RA组关节腔积液巨噬细胞CD206、CD40、CD86和HLA-DR表达的MFI显著高于RA组外周血单核细胞(P<0.05);RA组关节腔积液巨噬细胞CD206、CD40和CD64表达百分率显著高于外周血(P<0.05);RA患者组关节腔积液巨噬细胞CD163表达百分率低于外周血单核细胞(P<0.05)。(3)RA组关节腔积液巨噬细胞HLA-DR表达百分率显著高于OA组(P<0.05);RA组关节腔积液巨噬细胞CD163表达百分率低于OA组(P<0.05)。(4)RA患者关节腔积液巨噬细胞上CD163表达百分率与ACPA的含量呈正相关性(rs=0.428,P=0.042)。结论 RA患者外周血单核细胞极化指标表达异常,呈现M1和M2混合型;RA患者关节腔积液巨噬细胞极化指标表达异常,呈现为M1型,并且与自身抗体抗环瓜氨酸多肽抗体相关。

肺结核患者外周血低密度粒细胞检测的临床意义

目的探讨肺结核(TB)患者外周血低密度粒细胞(LDGs)的比例变化及其意义。方法采用流式细胞术分析80例TB患者及25例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)层中CD14^(low)CD15^+LDGs的比例及变化情况,检测LDGs表面CD15、CD16、CD33、CD66b、CD62L的表达水平、凋亡坏死率及ROS水平。分析LDGs与TB发生发展以及转归的相关性。结果 TB患者外周血PBMCs层中LDGs的比例显著高于健康对照组(P<0.01);痰涂片抗酸阳性的TB患者LDGs的比例显著高于抗酸阴性者(P<0.01)。与TB患者正常密度粒细胞(NDGs)比较,TB患者LDGs表面CD15、CD33、CD66b表达量显著升高,CD62L的表达量显著下降,凋亡率上调,ROS水平上调。LDGs的比例在肺部有无空洞及空洞数量分组之间差异有统计学意义(P<0.05),即LDGs的比例随空洞累及范围的增加而升高。TB患者经抗痨治疗后,外周血LDGs的比例随治疗时间延长而下降,治疗3个月后,LDGs的比例显著降低,治疗6个月后与健康对照组无明显差异。结论 LDGs水平在TB患者外周血中显著上调,TB患者外周血中的LDGs为一群发生脱颗粒的活化中性粒细胞,且与TB的严重程度相关。

类风湿关节炎患者外周血TFH细胞TIGIT和PD1表达及意义

目的探讨含T细胞免疫球蛋白和酪氨酸免疫抑制受体结构域蛋白(TIGIT)和程序性死亡分子(PD1)在类风湿关节炎(RA)患者外周血滤泡辅助性T(TFH)细胞上的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪检测79例RA患者(RA组)和45例对照者(HC组)外周血TFH细胞TIGIT和PD1阳性的百分率和平均荧光强度(MFI),并进行比较,分析其与RA实验室检查指标的相关性。结果①与HC组相比,RA组仅PD1^(+)TFH细胞百分率和PD1表达MFI增高,差异有统计学意义(P<0.01)。②RA组TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率低于HC组(P<0.01);RA组TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率、PD1表达MFI和TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率、PD1表达MFI高于HC组(P<0.05)。③RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与类风湿因子(RF)呈正相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率、TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞和TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI均与阳性的RF呈正相关(P<0.05)。④RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率与血沉(ESR)呈负相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率与ESR呈正相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率与淋巴细胞数量(Lym)呈负相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与淋巴细胞百分比(Lym%)呈负相关、与中性粒细胞数量(Net)、中性粒细胞百分比(Net%)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、系统性免疫炎症指数(SII)、衍生中性粒细胞与淋巴细胞比值(dNLR)、ESR、C-反应蛋白(CRP)呈正相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与Net、ESR、CRP呈正相关(P<0.05)。⑤RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率与疾病活动性评分(DAS28)-ESR呈负相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI和TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI均与DAS28-ESR、DAS28-CRP、关节压痛数(PJC)、关节肿痛数(SJC)、视觉模拟评分(VAS)呈正相关(P<0.05)。⑥TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率降低和TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率升高为RA发病的危险因素。结论RA患者外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率降低、TIGIT^(+)PD1^(+)TFH和TIGIT^(-)TPD1^(+)TFH细胞百分率升高,且与该疾病的抗体产生、炎症程度及活动性有关。

显微镜观察药物敏感度检测技术在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性检测中的应用

目的建立显微镜观察药物敏感度检测(MODS)技术快速测定吡嗪酰胺(PZA)耐药性,并探讨其在结核分枝杆菌(MTB)PZA耐药性测定中的应用价值。方法用24孔细胞培养板建立MODS技术,进行PZA耐药性检测,并对最佳检测条件进行探讨。将该技术用于112株MTB临床分离株的PZA耐药性检测,将检测结果与罗氏绝对浓度法的药敏结果进行比较分析,对不符合的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定和MTB pncA基因序列测定分析。结果 MODS检测PZA耐药性的最佳测定条件为pH=5.7,药物浓度为100μg/mL。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS检测PZA耐药性的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为95.7%、88.4%、92.9%、93.0%和92.7%。MODS与绝对浓度法检测结果不符的8株菌株中,MIC和pncA基因测序结果表明,有6株的MODS结果与MIC和pncA基因测序结果相符,2株的结果不符。结论 MODS检测MTBPZA耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,与绝对浓度法药敏结果有较高的符合率,可作为PZA耐药性的快速筛选方法之一。

系统性红斑狼疮患者外周血NK细胞TIM-3表达和意义

目的探讨TIM-3在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血NK细胞上的表达及临床意义,以阐明其在SLE发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测44例SLE患者和34例健康对照者外周血NK细胞表面TIM-3表达水平,比较SLE组和健康对照组之间NK细胞表面TIM-3表达水平,并分析其与实验室检查数据及治疗的相关性。2组间比较采用t检验、配对t检验或者非参数检验,两变量之间相关性采用Pearson相关分析。结果1)SLE患者NK细胞TIM-3表达的平均荧光强度(MFI)显著高于健康对照组(P=0.033);SLE患者NK细胞TIM-3表达百分率显著高于健康对照组(P<0.001)。2)SLE患者外周血NK细胞上TIM-3表达的MFI与C3、C4呈负相关(r=0.32,P=0.037;r=0.30,P=0.049);SLE患者外周血TIM-3+NK细胞百分率与单核细胞数量呈负相关(r=0.32,P=0.033)。3)抗ds-DNA抗体阳性的SLE患者NK细胞TIM-3表达的MFI显著高于抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者(P=0.050);SLE患者外周血TIM-3+NK细胞百分率与抗ds-DNA抗体浓度呈正相关(r=0.30,P=0.049)。4)低血小板血症组SLE患者外周血NK细胞上TIM-3表达的MFI显著高于阴性者(P=0.045)。5)治疗后SLE患者NK细胞TIM-3表达的MFI和TIM-3+NK细胞百分率都明显降低(均P=0.009)。结论SLE患者外周血NK细胞TIM-3表达异常,与及疾病的严重程度有明确的相关性。

类风湿关节炎患者外周血T细胞PD1表达的分析和意义

目的探讨程序性死亡分子1(PD1)在类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4^+T和CD8^+T细胞上的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测66例RA患者和30例健康对照者外周血CD4^+T和CD8^+T细胞上PD1表达(平均荧光强度和百分率),比较RA组和健康对照组之间CD4^+T和CD8^+T细胞上PD1表达水平,分析其与RA实验室检查指标的相关性。结果 (1)RA患者CD4^+T、CD8^+T细胞PD1表达的平均荧光强度(MFI)显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);RA患者CD4^+PD1^+T细胞百分率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)RA患者外周血CD4^+T、CD8^+T细胞PD1表达的MFI与DAS28评分呈正相关性(r=0.49,P<0.000 1;r_s=0.40,P=0.0008)。(3)RA患者外周血CD4^+T细胞PD1表达的MFI与血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)呈正相关性(r=0.45,P<0.000 1;r=0.39,P=0.001);RA患者外周血CD8^+T细胞PD1表达的MFI与CRP呈正相关性(r_s=0.40,P=0.0009);RA患者外周血CD4^+PD1^+T细胞百分率与CRP呈正相关性(r=0.24,P=0.048)。(4)RA患者外周血CD8^+T细胞PD1表达的MFI与类风湿因子(RF)呈正相关性(r_s=0.32,P=0.009);RA患者外周血CD4^+PD1^+T细胞百分率与RF呈正相关性(r=0.27,P=0.030)。结论 RA患者外周血CD4^+T和CD8^+T细胞PD1表达异常,与疾病的活动性及抗体产生有关。

类风湿性关节炎外周血中性粒细胞PD-L1表达及意义

目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)在类风湿性关节炎(RA)患者外周血中性粒细胞上的表达及临床意义。方法应用流式细胞仪检测54例RA患者和52例健康对照者外周血中性粒细胞PD-L1表达水平,比较RA组和健康对照组之间以及RA活动组和RA稳定组PD-L1^+中性粒细胞百分率差异,分析其与RA实验室检查指标的相关性。结果 RA组外周血PD-L1^+中性粒细胞百分率高于健康对照组,差异有统计学意义(P=0.000 1);RA活动组PD-L1^+中性粒细胞百分率高于RA稳定组,差异有统计学意义(P=0.045 8)。RA患者PD-L1^+中性粒细胞百分率与DAS28呈正相关(r^2=0.081,P=0.037 2)。RA患者PD-L1^+中性粒细胞百分率与炎症性指标CRP和ESR呈正相关(r^2=0.12,P=0.014 9;r^2=0.14,P=0.007 2)。RA患者RF阳性组外周血PD-L1^+中性粒细胞百分率高于对应的阴性组(P=0.006 9)。RA患者PD-L1^+中性粒细胞表达的ROS水平明显高于PD-L1^-中性粒细胞(P<0.000 1)。结论 RA患者外周血中性粒细胞表面PD-L1表达异常,与疾病的活动性以及抗体产生有关。

血浆环状RNA hsa_circ_0034398在系统性红斑狼疮中的表达和意义

目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆环状RNA hsa_circ_0034398的表达水平,探讨其在SLE诊断中的应用价值。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测42例SLE患者、36例正常对照者(HC)和42例类风湿关节炎(RA)患者血浆环状RNA hsa_circ_0034398的表达水平。分析SLE患者血浆环状RNA hsa_circ_0034398的表达水平与实验室指标、治疗的关系。应用受试者工作曲线(ROC)分析血浆环状RNA hsa_circ_0034398,以及联合血浆环状RNA hsa_circ_0034398与常规指标对SLE诊断及鉴别诊断的敏感度及特异度。结果:(1)血浆环状RNA hsa_circ_0034398在SLE疾病组的表达水平明显高于HC和RA疾病对照组,差异具有统计学意义(U=476.5,P=0.0052;U=591.0,P=0.0094);(2)SLE疾病组血浆环状RNA hsa_circ_0034398表达水平与N%(rs=0.3098,P=0.0459)呈正相关,与M%(rs=-0.3068,P=0.0481)呈负相关;(3)SLE疾病组血浆环状RNA hsa_circ_0034398表达水平与治疗相关(P=0.0391);(4)ROC曲线分析显示,SLE疾病组血浆环状RNA hsa_circ_0034398与HC、RA疾病对照组、HC+RA对照组的曲线下面积(AUC)分别为0.685、0.665、0.674;敏感度分别为57.14%、47.62%、57.14%;特异度分别为77.78%、95.24%、82.05%;(5)联合血浆环状RNA hsa_circ_0034398+抗双链DNA抗体(Anti-dsDNA)、联合血浆环状RNA hsa_circ_0034398+抗Sm抗体(Anti-Sm)、联合血浆环状RNA hsa_circ_0034398+Anti-dsD‐NA+Anti-Sm在SLE疾病组与HC组的敏感度分别为80.95%、69.05%、83.33%,均高于血浆环状RNA hsa_circ_0034398(57.14%)、Anti-dsDNA(57.14%)、Anti-Sm(26.19%),特异度均为100%。SLE疾病组联合血浆环状RNA hsa_circ_0034398+白细胞计数+红细胞计数+血小板计数HC、RA疾病对照组、HC+RA对照组的AUC分别为0.864、0.906、0.878,敏感度分别为71.43%、88.10%、73.81%,特异度分别为91.67%、88.10%、92.31%。结论:SLE疾病组血浆环状RNA hsa_circ_0034398明显升高,且与疾病炎症程度以及治疗相关,可能作为SLE的潜在诊断及鉴别诊断标志物,尤其是血浆环状RNA hsa_circ_0034398联合SLE常规指标的诊断效能明显升高。

系统性红斑狼疮外周血NK细胞PD-1的表达及意义

目的探讨程序性死亡蛋白-1(PD-1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)上的表达及临床意义,阐明其在SLE发生和发展中的作用。方法应用流式细胞仪检测44例SLE患者和34例健康对照者外周血NK细胞表面PD-1表达水平,比较SLE组和健康对照组之间NK细胞表面PD-1表达水平;应用t检验或者非参数检验分析两组各指标的差异,采用Pearson相关分析NK细胞表面PD-1表达与实验室检查数据及临床表现的相关性。结果 (1) SLE组患者NK细胞PD-1表达的平均荧光强度(MFI)显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P <0. 001); SLE组患者PD-1+NK细胞百分率显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P=0. 021)。(2) SLE患者外周血NK细胞上PD-1表达的MFI与血沉(ESR)呈正相关(r=0. 40,P=0. 009),与红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)呈负相关(r=-0. 36,P=0. 016; r=-0. 40,P=0. 008; r=-0. 46,P=0. 002);且C反应蛋白(CRP)升高的SLE患者NK细胞PD-1表达的MFI显著高于CRP正常的SLE患者(P=0. 006)。SLE患者外周血PD-1+NK细胞百分率与RBC呈负相关(r=-0. 41,P=0. 005)。(3)发热组、低红细胞血症组、贫血组SLE患者外周血NK细胞上PD-1表达的MFI显著高于对应的阴性组,差异有统计学意义(P <0. 001,P=0. 010,P=0. 039)。低白细胞血症组SLE患者外周血PD-1+NK细胞百分率显著高于阴性者,差异有统计学意义(P=0. 024)。结论SLE患者外周血NK细胞PD-1表达异常,与疾病的病情有明确的相关性。

MODS技术的研究和应用进展

早期发现和诊断结核病（Tuberculosis,TB）病人、及时选用敏感药物给予有效治疗,是减少TB传播机会、控制TB疫情的关键环节。目前,病原学诊断仍是TB诊断的金标准,也是判断疾病活动性、传染性和疗效考核的主要指标。传统的TB病原学检查主要是涂片抗酸染色检查和罗氏培养基培养法（L-J法）。抗酸染色的优点是操作简单,快速,

显微镜观察药物敏感性试验在结核性淋巴结炎中的应用评价

目的探讨显微镜观察药物敏感性试验(MODS)用于结核性淋巴结炎的诊断价值及直接进行结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测的可能性。方法对94例细针针吸细胞学(FNAC)诊断为结核性淋巴结炎患者,用MODS法、抗酸染色和改良罗氏培养基培养(以下简称罗氏法)对穿刺吸出物进行MTB检测;抗酸染色阳性标本同时用MODS法和绝对浓度法检测药敏,对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定。结果 MODS法、罗氏法和抗酸染色法检测结核性淋巴结炎的阳性率分别为51.1%、39.4%和22.3%,MODS法阳性率均显著高于罗氏法和抗酸染色法(χ2=7.69与25.04,P均<0.01)。MODS法和罗氏法检测结果的符合率为86.2%。MODS检测时间中位数为13 d,明显短于罗氏培养法的29 d。MODS检测21株MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为95.0%、85.7%、85.7%、100%。7个MODS药敏结果与罗氏药敏检测结果不符,经MIC检测5个药敏结果支持MODS法结果。结论 MODS技术对结核性淋巴结炎诊断和MTB药敏试验检测有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值。

环状RNA hsacirc104871在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达和意义

目的探讨环状RNA hsa_ciw_104871在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及临床意义,以阐明其在SLE诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法应用RT-PCR检测70例SLE患者(SLE组)、70例健康对照者(健康对照组)和76例RA疾病对照者(RA疾病对照组)PBMC中环状RNA hsv_/w_104871表达水平,比较各组之间环状RNA hsv_cPc_104871表达水平,分析SLE患者PBMC中环状RNA hsv_/w_104871表达与临床指标的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价环状RNA hsa_/w_104871诊断指标的灵敏度和特异度。结果①SLE组患者PBMC中环状RNA hsv_/w_104871表达水平低于健康对照组(t=3.57,P=0.0005)o②患者SLE环状RNA hsa_/w_104871表达水平低于RA疾病对照组(U=1472,P<0.0001)。③SLE组患者PBMC中环状RNA hsa_circ_104871表达水平低于对照组(健康对照者+RA疾病对照者)(U=2654,P<0.0001)&④SLE组患者环状RNA hsa_ciw_104871表达水平与PLT呈正相关(t=0.2900,P=0.0157)。⑤SLE组患者和健康对照组ROC曲线曲线下面积(AUC)为0.759(95%CI0.677~0.841;P<0.0001),敏感性为64.29%,特异性为81.43%。⑥SLE组患者和RA对ROC曲线AUC 0.727(95%CI:0.645-0.809;P<0.0001),敏感性为70.00%,特异性为66.23%;SLE组患者和对照组AUC为0.742(95%CI:0.666~0.818;P<0.0001),敏感性为65.71%,特异性为74.80%。结论SLE患者PBMC中环状RNA hsa_circ_104871的表达明显下调,且与SLE血液系统PLT受累的严重程度呈负相关,可作为SLE的潜在的诊断及鉴别诊断标志物。

程序性死亡分子1及其配体在口腔鳞状细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的检测口腔鳞状细胞癌患者外周血中程序性死亡分子1(PD-1)及其配体(PD-L1)的表达水平,探讨其生物学及临床意义。方法选取82例口腔鳞状细胞癌患者(口腔鳞癌组)和25例健康对照者(对照组)为研究对象,收集研究对象的外周血,采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的表达及T淋巴细胞亚群计数,采用酶联免疫吸附方法检测血清中可溶性PD-1(s PD-1)和可溶性PD-L1(s PD-L1)的表达水平。采用SPSS 17.0软件对数据进行检验和相关性分析。结果口腔鳞癌组外周血CD8+T淋巴细胞百分数明显高于对照组(P<0.05),而CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数及CD4+/CD8+T亚群百分数比值均低于对照组(P<0.05)。口腔鳞癌组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的阳性表达率均高于对照组(P<0.01)。口腔鳞癌组血清s PD-L1水平高于对照组(P<0.05),而s PD-1水平二者差异无统计学意义(P>0.05)。s PD-L1的表达与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移状态相关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位及大小无关。结论口腔鳞状细胞癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在不同程度的免疫功能抑制,CD4+和CD8+T淋巴细胞表面PD-1及PD-L1表达显著升高。异常升高的s PD-L1可能与口腔鳞状细胞癌的发生发展有关。

不同毒力的分枝杆菌感染促进小鼠RAW264.7巨噬细胞自噬及mTOR和AKT磷酸化

目的探讨不同毒力分枝杆菌感染对巨噬细胞自噬水平的影响。方法分别用表达绿色荧光蛋白(GFP)的结核分枝杆菌标准株H37Rv、卡介苗(BCG)和耻垢分枝杆菌Ms1-2c株(Ms)感染小鼠RAW264.7巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞的自噬水平,激光共聚焦显微镜观察细胞内吞噬体与溶酶体的共定位,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果与对照组相比,RAW264.7巨噬细胞感染H37Rv、BCG和Ms 24 h后,感染组的自噬水平均显著增加,Ms感染组的自噬水平最高;各感染组的LC3-Ⅱ蛋白表达均上调,H37Rv、BCG和Ms感染的细胞内吞噬体与溶酶体的共定位率分别为(11.33±0.88)%、(18.33±0.88)%和(48.67±0.66)%,Ms感染组的分枝杆菌与溶酶体共定位最明显。分枝杆菌感染巨噬细胞后,mTOR和AKT表达无明显改变,但其磷酸化水平均显著升高。结论分枝杆菌感染诱导巨噬细胞发生自噬,同时促进mTOR和AKT的磷酸化。

腺苷脱氨酶对结核性脑膜炎诊断价值的Meta分析

目的探讨脑脊液腺苷脱氨酶(ADA)检测在结核性脑膜炎(TBM)中的诊断价值。方法检索1990年1月—2010年10月Cochrane图书馆、PubMed和万方数据库等数据库,按照Cochrane协作网推荐的诊断试验纳入标准筛选文献,采用QUADAS工具评价纳入文献质量,应用Meta-D isc 1.4软件对纳入研究进行综合定量评价并绘制综合受试者工作曲线(SROC)。结果共检索到相关文献149篇,排除134篇,符合纳入标准的15篇进入Meta分析,涉及研究对象1 642例。异质性检验提示存在异质性,按随机效应模型进行Meta分析,ADA诊断TBM的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断优势比的汇总值分别为0.73〔95%CI(0.70,0.76)〕、0.90〔95%CI(0.88,0.91)〕、7.79〔95%CI(4.80,12.63)〕、0.25〔95%CI(0.17,0.35)〕和36.01〔95%CI(16.08,80.66)〕SROC下面积AUC为0.8856(Se=0.0412),Q值为0.8162。结论脑脊液ADA对TBM的临床诊断价值有较低的敏感度和较高的特异度,测定脑脊液ADA可作为诊断TBM的辅助诊断指标。