流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究

为构建流行性乙型脑炎病毒（JEV） E蛋白多表位疫苗，本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽（MP）序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中，构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中，重组酵母菌组子经甲醇诱导表达重组蛋白（rMP）。将其免疫小鼠后，通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL，以评价该多表位疫苗在小鼠模型的免疫原性。结果显示正确构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 （pPICZ -MP），并分泌表达多表位肽rMP ；纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应，其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组无显著差异（p〉0.05），而且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。上述结果表明本研究以酵母菌表达的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的的免疫原性，能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应，为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供了新的思路。

流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究

为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33(pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽r MP。纯化后的r MP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p>0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。

不同胆汁酸对花鲈生长、血清生化及肝脏脂代谢的影响

为研究不同胆汁酸对花鲈生长性能、血清生化及脂肪代谢的影响,选取240尾体格健壮、规格一致的花鲈((16.00±0.50)g),随机分到12个养殖桶中,分别饲喂基础饲料(不添加胆汁酸)、添加载体胆汁酸的饲料、添加脂壮素NE的饲料和添加液体胆能L的饲料,投喂8周后,采集样品并分析。结果表明:1)与基础饲料组相比,脂壮素NE组显著提高了花鲈的增重率、摄食量和血清溶菌酶活性(P<0.05);液体胆能L组显著降低增重率和摄食量(P<0.05),对血清非特异性免疫无显著影响(P>0.05);而载体胆汁酸组对花鲈增重率和血清非特异性免疫均无显著影响(P>0.05)。2)3种不同剂型胆汁酸的添加均可显著降低血清谷草转氨酶、肝脏乙酰辅酶A羧化酶的活性(P<0.05),且脂壮素NE组的肝脏脂蛋白脂酶活性增加显著(P<0.05)。综上所述,饲料中添加脂壮素NE后会显著提高花鲈的增重率和血清中溶菌酶、肝脏中脂蛋白脂酶的活性。

丁壮素酸乳对PEDV和PRRSV体外增殖的影响

为探究丁壮素酸乳对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)体外增殖影响,本研究使用CCK-8法分别检测丁壮素酸乳对Vero细胞和Marc-145细胞的毒性,采用实时荧光定量PCR分别检测PEDV、PRRSV在不同质量浓度丁壮素酸乳作用下的基因组拷贝数。实验结果显示:100~500μg/mL丁壮素酸乳对Vero细胞和Marc-145细胞活性没有显著影响;200~300μg/mL丁壮素酸乳显著抑制PEDV增殖,100~300μg/mL丁壮素酸乳显著抑制PRRSV增殖。实验结果表明,200~300μg/mL丁壮素酸乳对PEDV和PRRSV的体外增殖具有显著的抑制作用,且无细胞毒性。

饲粮中添加复合油脂等量替代大豆油对保育猪生长性能和肠道健康的影响

本研究采用了2个能值体系(代谢能、净能)×2种油脂来源(大豆油、复合油脂)的析因试验,探讨了在保育猪饲粮中添加复合油脂等量替代大豆油的可行性。试验选用了192头初始体重为(8.40±1.04)kg的健康杜×长×大三元断奶仔猪,根据初始体重按照随机区组的原则分为4个处理,每个处理6个重复(栏),每个重复8头猪(公母各占1/2)。根据NRC(2012)推荐,分别采用净能和代谢能2套能值体系,配制7~11 kg和12~25 kg 2个阶段饲粮。对照组为玉米-豆粕型基础饲粮,试验组用2%的复合油脂等量替代2%的大豆油,饲喂35 d。饲养结束后,从饲喂净能体系饲粮的2个组中分别选择6头体重接近重复平均体重的猪屠宰,采集空肠组织做形态学观测,收集空肠黏膜、结肠内容物和新鲜粪便,分别用于检测紧密连接蛋白表达、抗氧化指标、挥发性脂肪酸含量以及微生物组成。结果表明:饲粮中添加2%的复合油脂替代等量的大豆油对保育猪的生长性能和腹泻率没有显著影响(P>0.05);复合油脂代替大豆油有提高血清免疫球蛋白G(IgG)(P=0.09)和免疫球蛋白M(IgM)含量(P=0.06)的趋势,但对血清中炎症因子含量没有显著影响(P>0.05),血清中脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),而且血清总抗氧化能力(T-AOC)(P=0.06)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P=0.06)也有升高的趋势。代谢能体系饲粮饲喂的猪的血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和GSH-Px活性以及T-AOC显著高于净能体系饲粮饲喂的猪(P<0.05)。净能体系下,复合油脂等量替代大豆油显著升高了猪肠道黏膜中GSH-Px活性(P<0.05),有升高T-AOC(P=0.09)和CAT活性(P=0.08)的趋势;复合油脂组紧密连接蛋白-1(Claudin-1)和闭锁小带蛋白-2(ZO-2)的蛋白表达显著提高(P<0.05),闭合蛋白(Occludin)的蛋白表达也有升高的趋势(P=0.09);复合油脂等量代替大豆油显著提高了猪结肠内容物中乙酸的含量(P<0.05),而且粪便微生物门水平的Beta多样性显著变化(P<0.05),表现为采食复合油脂显著提高了厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度(P<0.05),显著降低了拟杆菌门(Bacteroidota)的相对丰度(P<0.05)。综上所述,保育猪饲粮中添加2%的复合油脂等量替代大豆油,不影响保育猪的生长性能和健康,而且有助于提高机体免疫力、抗氧化能力和维护肠道屏障功能。

短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗CH-1R株的免疫增强作用研究

为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV(H P-PRRSV)TJ-F5攻毒,并采用流式细胞术对攻毒前后淋巴细胞亚类T、Th、Tc及N K进行绝对和相对计数。结果显示攻毒后共同免疫组仅在第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,28 dTc/T显著高于单独免疫组,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组在攻毒后第3 d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,之后于第14和15 d再次显著下降后又回升,临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻。单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40%、80%、0。研究结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗具有缓解H P-PRRSV TJ-F5的免疫抑制、增强细胞免疫及提高免疫保护力的作用;在抵抗H P-PRRSV TJ-F5攻击时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组。

中短链脂肪酸的联合使用

面对无抗时代的到来,无论是专家学者的研究,还是欧洲的“替抗”经验,中、短链脂肪酸已是替抗方案中不可或缺的主流选项。文章综述了短链脂肪酸(丁酸)的抑菌机理和作用效果,及中链脂肪酸(月桂酸单甘酯)抑菌和抗囊膜病毒的机理和作用效果;论述了中、短链脂肪酸联合使用的优势:扩大抑制病原微生物的谱系,并在酸性体系下极大增强抑制病原微生物的能力。以期为中、短链脂肪酸在畜牧业中的应用提供更科学的思路,并为业内人士提供更优的替抗方案选项。

丁酸钠和胆汁酸混合缓释制剂对大黄鱼生长性能和体色的影响

为了探讨丁酸钠和胆汁酸混合缓释制剂对大黄鱼生长性能和体色的影响,选择初始体重约120g的大黄鱼40000尾,随机分成2组,每组设20000尾。对照组只加冰鲜料,试验组在冰鲜料中额外添加0.1%丁酸钠和胆汁酸混合缓释制剂,进行为期28d的投喂试验。结果表明:添加丁酸钠和胆汁酸混合缓释制剂的试验组体重、体长和体全长均显著高于对照组(P<0.05),分别比对照组提高了12.9%、3.66%和4.9%。从肥满度、肝体比、脏体比上来看,试验组和对照组差异不明显(P>0.05)。试验组和对照组大黄鱼的背部和腹部的亮度轴(L)差异不显著(P>0.05),试验组大黄鱼背部的绿色值(a-)和黄色值(b+)、腹部的红色值(a+)和黑色值(b-)显著高于对照组(P<0.05)。从解剖结果来看,试验组大黄鱼肝脏颜色比较正常,呈黄色;对照组大黄鱼肝脏颜色比较浅,呈土黄色,部分鱼还出现花肝。研究表明:添加丁酸钠和胆汁酸混合缓释制剂可以提高大黄鱼的生长性能、改善体色,促进肝脏健康。

低蛋白日粮添加不同链长脂肪酸对仔猪肝脏抗氧化功能、脂代谢与脂肪沉积的影响

试验旨在探究低蛋白日粮中添加不同链长脂肪酸对仔猪肝脏抗氧化功能、脂代谢和脂肪沉积的影响。选用28日龄、体重(7.93±0.7)kg的杜×长×大断奶仔猪120头,随机分成5组。对照组(Cont组)饲喂正常蛋白日粮(粗蛋白质19.06%),试验组饲喂低蛋白日粮(粗蛋白质水平较Cont组降低2.49%),并分别添加0.2%短链脂肪酸、中链脂肪酸和n-3长链多不饱和脂肪酸。饲喂28 d后,采集肝脏、肩背脂肪与腹部脂肪。结果表明:仔猪肝脏抗氧化功能因饲喂低蛋白饲粮而改善,同时短链脂肪酸有较好的肝脏抗氧化作用(P<0.05);相较于Cont组,低蛋白日粮对仔猪肝脏脂代谢无影响(P>0.05);当低蛋白日粮添加脂肪酸后,肝脏脂代谢水平提高,而短链和长链脂肪酸减轻了腹脂或肩背脂肪的沉积(P<0.05)。由此可见,低蛋白日粮联合添加短链脂肪酸对增强仔猪肝脏抗氧化功能和减缓脂肪沉积的效果最好。

日粮添加丁酸钠对低断乳重仔猪生产性能和肠绒毛的影响

为了探究丁酸钠对低断乳重仔猪生产性能和肠绒毛的影响,本试验选择24头低断乳重仔猪(体重4.24 kg)随机分成2个处理组,每个处理组设6个重复,每个重复2头猪,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮+0.2%丁酸钠,饲养期6周。结果表明,试验组仔猪的平均日增重和料重比分别比对照组改善了10.38%和9.64%,但统计学上差异不显著(P>0.05)。试验组仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度均大于对照组,且以空肠的改善幅度最明显,比对照组提高了27.25%,差异显著(P<0.05)。因此,在低断乳重仔猪日粮中添加丁酸钠可以提高仔猪的生产性能,并增加肠绒毛的高度。

丁酸钠+单宁酸包被制剂对断奶仔猪生长性能、腹泻和血清生化指标的影响

为研究日粮中添加丁酸钠+单宁酸包被制剂对断奶仔猪生长性能、腹泻及血清生化指标的影响,选取120头健康的(24±1)日龄(杜洛克×长白×大约克)断奶仔猪,随机分为4组,即A、B、C、D组,每组设3个重复,每个重复10头。A组为对照组,饲喂基础日粮;B、C、D组分别在基础日粮中添加氧化锌(0.2%)、丁酸钠(0.082%)+单宁酸(0.05%)、丁酸钠+单宁酸包被制剂(0.25%),实验期为30 d。观测仔猪平均日增重、平均日采食量、料重比以及仔猪腹泻情况以及血清生化指标等。结果表明:日粮中添加丁酸钠+单宁酸包被制剂(D组)断奶仔猪平均日采食量和平均日增重显著高于对照A组(P<0.05);C组、D组仔猪腹泻率和腹泻指数均显著低于对照组(P<0.05);C组、D组仔猪血清总蛋白质量浓度显著高于对照组(P<0.05);各组间血清总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和丙二醛浓度均无显著差异(P>0.05)。综上所述,在日粮中添加丁酸钠+单宁酸包被制剂可促进断奶仔猪生长和改善机体健康状况,说明丁酸钠与单宁酸联合使用,可以发挥协同作用,替代日粮中的氧化锌添加剂。

丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响

本试验主要研究丁酸对大肠杆菌生长曲线的影响,并用醋酸进行对比试验,为丁酸代替饲用抗生素的研究提供一定的依据。采用牛津杯法检测丁酸、醋酸(0.125%~4%)对大肠杆菌的抑菌效果;并使用酶标仪测定细菌在LB肉汤(0.025%~0.1%)中0~24 h的OD600值,根据相应数值绘制大肠杆菌的生长曲线。在牛津杯法中,4%丁酸、醋酸抑菌效果最好,抑菌圈直径分别达22 mm、28 mm;浓度为0.5%时,抑菌圈直径仅为9 mm、10 mm;浓度为0.25%、0.125%时,没有出现明显的抑菌圈。酶标仪测OD值法中,丁酸、醋酸浓度为0.1%时,大肠杆菌经过24 h检测其OD_(600)值基本不变;浓度为0.075%的OD值在19 h才有轻微增长。丁酸和醋酸对大肠杆菌生长均有抑制作用,浓度越高对大肠杆菌的生长抑制作用越大。

不同胆汁酸对花鲈生长性能、血清生化指标及脂肪代谢的影响

实验研究了不同胆汁酸对花鲈生长性能、血清生化指标与脂肪代谢的影响,分别用基础、添加胆汁酸或乳化胆汁酸的饲料投喂花鲈8周,然后采集样品并分析。结果表明:①乳化胆汁酸显著提高了花鲈的增重率与摄食量(P<0.05),而胆汁酸则无显著影响(P>0.05);②胆汁酸或乳化胆汁酸均降低了血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性,提高了血清总胆固醇的含量,乳化胆汁酸提高了血清碱性磷酸酶的活性;③胆汁酸与乳化胆汁酸均提高了肝脏脂蛋白脂酶和肝脂酶的活性,降低了肝脏三酰甘油的含量。综上所述,胆汁酸或乳化胆汁酸均能提高脂肪分解能力而降低脂肪沉积,维持肝脏健康;乳化胆汁酸可提高花鲈的摄食量并促进其生长。

鱼油微胶囊粉对美洲鳗鲡幼鱼生长、体成分及肌肉脂肪酸组成的影响

试验研究鱼油微胶囊粉对美洲鳗鲡幼鱼生长、体成分及肌肉脂肪酸组成的影响。将6口循环水养殖美洲鳗鲡幼鱼的水泥池,随机分为3个组,每组2个重复。每个水泥池容纳体重(40.3±0.3) kg/池和规格(68.1±3.9) P的美洲鳗鲡幼鱼,分别投喂添加0、5%、10%鱼油微胶囊粉的基础饵料。试验期10 w。结果显示,添加鱼油微胶囊粉可以提高美洲鳗鲡幼鱼的试验末重和增重率,降低饲料系数和全鱼中的水分含量,提高粗蛋白和粗脂肪含量,对粗灰分含量无影响。添加鱼油微胶囊粉会影响肌肉中多种脂肪酸的比例,尤其提高多不饱和脂肪酸的比例。研究表明,美洲鳗鲡幼鱼饵料中添加鱼油微胶囊粉具有促生长及改善鱼体及肌肉品质的效果。

不同丁酸钠制剂在肠道的释放和作用

不同的丁酸钠制剂在肠道中释放的时间不同,根据其释放时间和位置可产生不同的反应。较早释放的丁酸钠制剂可促进小肠绒毛的生长及营养物质的消化和吸收;较晚释放的丁酸钠制剂可能对抑制盲肠病原菌的繁殖更有效。不完全包被的丁酸钠从前肠至后肠均可释放出丁酸钠,对不同生长阶段的动物均是较好的选择。

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的免疫学研究进展

对于猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫学方面的研究尽管还有许多令人期待的未知,但近年来的研究报道也有很多值得关注的内容。文中针对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的特异性免疫应答在保护性免疫中的作用、免疫调节及免疫逃避等内容做一综述,为临床免疫的研究应用提供借鉴。

印度商品肉鸡剖析

印度畜牧业不断快速发展,印度家禽业在迎来机遇的同时也存在部分问题。该文主要论述印度家禽业的总体概况和存在的主要问题,结合实地考察的一个印度商品肉鸡场的情况,剖析目前印度家禽养殖的一些基本情况,为养殖户了解印度家禽业现状提供依据。

短肽佐剂增强PRRSV弱毒疫苗免疫保护力的研究

分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R株单独(单独免疫组)、CH-1R株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)接种仔猪,接种后4周以高致病性PRRSV(HP-PRRSV)TJ-F5攻毒,利用ELISA方法测定攻毒前后外周血IL-4、IL-18、IFN-γ、IL-12/IL-23P40浓度。免疫后共同免疫组更多猪(80%)产生更高浓度的IFN-γ、更早(第3天)产生更高浓度的IL-18,于第7天都显著高于其他组(P<0.01),同时IL-4含量升高至6.2ng/L;单独免疫组、对照组仅有40%、0%的猪产生了IFN-γ,但IL-4始终为0ng/L。攻毒后共同免疫组IFN-γ、IL-18更早(于21d)降为0ng/L,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组于28dIL-18降为0ng/L而IFN-γ仍很高(63.8ng/L),临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻;单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40%、80%、0%。结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗免疫可增强IFN-γ、IL-18介导的细胞免疫及IL-4介导的体液免疫、减轻攻毒后IFN-γ、IL-18介导的炎症反应和组织损伤,提高免疫保护力;在抵抗HP-PRRSV TJ-F5攻毒时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组。

猪伪狂犬病毒SD株的分离鉴定及TK基因序列分析

从山东某猪场送检的肺、脾脏、肾等病料中分离出1株病毒,经鸡胚成纤维细胞接种、病毒中和试验、PCR扩增试验证实分离的病毒为伪狂犬病毒(PRV),并命名为SD株。根据GenBank已公布的PRV胸苷激酶(TK)基因序列设计了1对引物,对SD株的TK基因进行PCR扩增及序列测定,并比较了该序列与国内外8个PRV毒株的同源性。结果表明,扩增的SD株TK基因片段全长1 139 bp,包含一个963 bp的开放阅读框,编码320个氨基酸组成的多肽;SD株TK基因与国内外8个PRV毒株序列相比,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.1%～99.7%和97.6%～99.7%;另外SD株TK也具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列;通过猪伪狂犬病毒TK基因与鸡、牛、猫科、马科、人类疱疹病毒的TK基因进化分析可知,猪伪狂犬病毒TK基因与哺乳动物疱疹病毒亲缘关系较近,而与禽类的亲缘关系相对较远。

PRRSV免疫学特性研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的病毒性疾病,可引起猪体产生免疫抑制,给世界养猪业造成了极大的威胁。本文综述了近年来国内外PRRS免疫学方面的最近研究进展,特别对体液免疫、细胞免疫、免疫调节及免疫逃避机制作了深入的论述,希望为PRRSV免疫学的研究理清思路。