何首乌蒽醌类单体成分致HK-2细胞毒性研究

目的采用人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK-2细胞明确何首乌中主要蒽醌类成分大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和大黄酚与肾毒性的相关性。方法HK-2细胞经2.5、10、20、40、80、120、160μmol·L^(-1)的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和3.125、12.5、25、50、100、150、200μmol·L^(-1)的大黄素甲醚和大黄酚作用24、48 h后,采用细胞计数试剂盒法(CCK-8)测定这些单体对HK-2细胞存活率的影响。HK-2细胞经6.25、12.5、25、50、100μmol·L^(-1)的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和大黄酚作用24、48 h后,收集细胞培养液检测乳酸脱氢酶(LDH)释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肾损伤分子-1(Kim-1)蛋白表达水平;以JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)的变化;并以流式检测法测定5种蒽醌类化合物对细胞凋亡率的影响。结果大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚致HK-2细胞存活率随给药时间和给药浓度的增加而降低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而大黄素甲醚和大黄酚200μmol·L^(-1)给药48 h后细胞存活率仍大于75%。大黄素、芦荟大黄素和大黄素甲醚100μmol·L^(-1)给药48 h后,LDH释放水平相较于对照组显著升高(P<0.01)。5种何首乌蒽醌类单体成分对HK-2细胞给药后细胞上清中Kim-1水平未呈现出随浓度增加而升高的趋势,仅在100μmol·L^(-1)给药后,Kim-1水平较对照组显著上升(P<0.05)。5种何首乌蒽醌类单体成分给药后,HK-2细胞的线粒体膜电位均随处理浓度的增大和给药时间的延长而下降,但仅25、50、100μmol·L^(-1)的大黄素、芦荟大黄素和50、100μmol·L^(-1)的大黄酸给药48 h后检测到显著的细胞凋亡(P<0.05)。结论大黄素、芦荟大黄素和大黄酸是导致何首乌肾毒性的潜在蒽醌类成分。何首乌中其他成分的肾毒性风险有待进一步研究,提高安全合理用药水平。

中药新药一般毒理试验的常见问题

笔者根据多年来从事中药新药一般毒理试验的研究实践,结合参加新药答辩及审评的经验,对一些常见的问题谈谈体会。

中药新药临床前安全性评价研究与GLP

笔者根据多年来对世界各国GLP的研究及承担国家“九五”攻关项目—“建设国家广州新药安全性评价研究重点实验室”的实践,对GLP的概念及内容作简要的论述,谈谈一些体会,供从事中药新药研究和开发工作者及相关工作的人员参考。

中药新药一般毒理试验及评价

根据多年研究实践,针对新药一般毒理试验及临床前安全性评价进行探讨,提出新药一般毒理试验需在12个环节中予以重视和加强管理。

综合性大学实验动物使用与管理体系的建设

进入21世纪的中国高校经历了一系列改革,包括加大财政投入力度、扩大招生、院校合并、后勤服务社会化等。

治疗型双质粒HBV-DNA疫苗长期毒性试验——小鼠肌肉注射给药联合电转染

目的：治疗型双质粒HBV-DNA疫苗是中国人民解放军第458医院肝病研究所研制的生物技术新药。为了观察连续给予治疗型双质粒HBV-DNA疫苗后对小鼠产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性资料，确定无毒反应剂量，给拟定人用安全剂量提供参考，进行长期毒性试验。

吐温80质量与致敏性关系的研究

参照欧洲药典(EP5.4)中的质量标准,对国内外4种不同来源吐温80的质量控制指标进行检查,将结果进行拟合得到综合质量指数。通过豚鼠过敏试验比较了4种吐温80的最低致敏剂量和过敏反应的严重程度。结果显示4种吐温80的综合质量指数与其最低致敏剂量呈正相关,与过敏反应的严重程度呈负相关。说明吐温80的致敏性与产品质量密切相关。

重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的长期毒性研究

目的 :研究重组人酸性成纤维细胞生长因子 (rhaFGF)皮肤用药的长期毒性。方法 :对新西兰兔破损皮肤连续给药 2 8d ,剂量分别为 3 60 0 ,180 0 ,90 0U/cm2 ,观察rhaFGF用药期间和停药后对动物血液学、血液生化学、组织学等方面的影响。结果 :rhaFGF的无毒剂量为 90 0U/cm2 ;rhaFGF180 0U/cm2 用药可见个别动物出现淋巴结、脾白髓、圆小囊固有层及胸腺滤泡增生 ;3 60 0U/cm2 用药可见半数以上动物淋巴结出现淋巴等器官滤泡增生 ,偶见大脑血管周围出现少量淋巴细胞浸润 ,个别动物睾丸生精小管精子细胞数量增加。停药 2周 ,上述病理改变减轻。未观察到rhaFGF的延迟性毒性反应。结论 :rhaFGF在有效剂量及大于有效

当归破壁粉粒补血作用及急性毒性实验研究

目的探讨当归破壁粉的补血作用及急性毒性作用。方法建立失血性贫血小鼠模型,以白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)等血常规指标衡量当归破壁粉粒对贫血的治疗作用,并以当归破壁粉粒及其饮片80 g/kg给小鼠灌胃后7 d,观察其对小鼠的急性毒性。结果当归破壁粉粒能明显改善小鼠贫血指标,且未观察到当归破壁粉粒及其饮片的急性毒性发生。结论当归破壁粉粒具有补血作用且无急性毒性作用。

药物研究中药理毒理申报资料的真实性和完整性核查体会

近来国家食品药品监管局加强了药品注册申报资料的真实性和完整性核查工作。本文作者总结多年从事药理毒理研究的现场核查工作的经验,介绍了现场核查工作的实施程序、药理毒理研究现场核查的关键环节,并举例作了说明。

三种注射用新辅料对Beagle犬类过敏及过敏反应研究

目的研究3种注射用新辅料乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)、乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物(mPEG-PDLLA)和羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)能否引起Beagle犬产生类过敏或过敏反应,为临床研究和应用提供依据。方法使用Beagle犬于1、3、5d致敏共3次,末次致敏后第14d激发。观察给药后反应症状,检测常规血液学指标、血浆中组胺、IgE、IgG和IgM含量。结果上述各项指标在首次给药后和激发日激发后均未见明显异常改变。结论 PLGA、mPEG-PDLLA和HP-β-CD在本实验剂量下不能引起Beagle犬产生类过敏或过敏反应。

Beagle犬一天内血液学和血液生化指标的波动

目的观察Beagle犬一天内血液学和血液生化指标的波动。方法取Beagle犬32只,雌雄各16只,分别在早上(空腹)、中午(第一次喂食后)和下午(第二次喂食后)采集静脉血,取血浆测定血液生化指标,用全血测定血液学指标,并用配对t检验对三次测定结果进行统计分析。结果喂食后HGB、PLT和WBC有升高的趋势;个别动物喂食后出现乳糜血,ALT、TP、ALB、AST、 CK、LDH、BUN、CREA、TCHO、TG、IP、HDL-C有轻微的上升。Na+在第二次喂食后比前两次均低,而K+则升高。结论Beagle犬在一天内不同时间或在喂食前后,血液和血液生化某些指标均发生明显的波动,应引起实验工作者的注意。

Pig-a基因突变试验研究进展

Pig-a基因突变试验是利用流式细胞术或有限稀释克隆法检测细胞表面糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚链蛋白的缺失情况,并以Pig-a基因突变率的变化来评价受试物的遗传毒性。该试验能够跨物种跨组织检测体内多种类型的突变作用,并能有效整合至其他体内重复给药毒性试验实现多终点联合检测,在药物临床前安全性评价中具有非常广阔的应用前景,有望成为体内遗传毒性试验的新选择,从而弥补现有遗传毒性试验组合的不足。本文对Pig-a基因突变试验的研究进展等进行综述。

六种肝功能指标检测能力验证研究

目的评价食品药品检测机构对丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate animotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总蛋白(total protein,TP)以及白蛋白(albumin,ALB)等6种肝功指标的检测能力。方法分别采用单因素方差分析和t检验法对能力验证样品的均匀性和稳定性进行研究。对能力验证数据进行正态性检验,按照能力验证评价标准,对各实验室的结果进行评价。结果 ALT满意率为97.5%,AST满意率97.6%,ALP满意率为100%,TBIL满意率为74.2%,TP满意率为90%,ALB满意率为97.5%。结论通过此次能力验证研究,发现部分实验室的肝功能生化指标检测能力缺陷,促进了实验室的质量改进。

多元化教学方法在药物毒理学教学中的实践

针对药物毒理学教学现状,在教学中充分应用多媒体技术,引入PBL教学法、双语教学、案例教学法等多元化教学方法。多元化教学法在药物毒理学课程教学过程中激发学生学习兴趣,促进学生的素质和能力的培养和提高,教学相长,获得良好的教学效果。

非人灵长类动物主要免疫器官及免疫细胞的研究进展

免疫毒性是生物技术药物临床前安全性评价中最常见的毒副作用。免疫系统是由多个器官、多种细胞和多种分子组成的一个复杂的系统,其结构和功能与遗传背景、年龄、性别和环境等因素有关,其正常的生理变异范围较大,这对于评估药物所致的免疫毒性是一个巨大的挑战。非人灵长类动物是药物临床前安全性评价中较常用的实验动物。了解和熟悉非人灵长类动物免疫系统的特点,有助于正确、客观地评价药物所致的免疫毒性。本文从非人灵长类动物主要的免疫器官(胸腺、脾和淋巴结)及免疫细胞(T和B淋巴细胞)的发育、形态特征和功能特征等方面进行了详细的论述。

上下法在急性毒性试验中的应用进展

随着全球对动物福利的关注,各种传统急性毒性试验的替代方法得到了人们越来越广泛的关注。上下法作为OECD修订发布的急性毒性试验方法之一,是传统急性毒性试验的一个替代方法,有着巨大的应用价值和发展前景。本文简要介绍了该方法的发展历程和在实际应用中的注意事项,评价了上下法与传统方法及其他替代方法相比的优缺点,并综述了近年来该方法在国内外的应用进展。

转Bt基因水稻的食用安全性评价研究进展

水稻(Oryza sativa)是我国重要的经济作物,其优化育种一直是研究的重点。苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)抗虫基因的出现,开辟了利用外源基因培育转基因抗虫作物的新领域。目前,转基因抗虫水稻的培育技术已日趋成熟,而其对人体的潜在安全性问题却备受争议。转Bt基因水稻能否实现商业化是人们关注的焦点。本文就转Bt基因水稻的食用安全性评价的研究进展进行综述,以期为我国转Bt基因水稻的风险评估和推广提供一些参考。

恒河猴血清抗体和补体成分测定

采用全自动血液生化分析仪测定了恒河猴血清抗体和补体成分。不同性别比较 ,除成年组雄性 Ig M和 C3较高、青年组雌性 C4 较高外 (P<0 .0 5 ) ,其余各组雌雄间抗体和补体值差异均不显著。不同年龄组间比较 ,Ig G和 Ig A与年龄关系不密切 ;Ig M幼年组高于青年组和成年组 (P<0 .0 1) ,也高于老年组 (P<0 .0 5 ) ;老年组 C3和 C4 较低。