蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

刺激响应型MSNs负载蒽醌修饰物4S对三阴性乳腺癌的体外研究

目的:探讨刺激响应型介孔二氧化硅纳米粒(MSNs-SS-HA)作为药物递送系统是否能提高蒽醌修饰物4S对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的靶向性、生物利用度,并降低对正常细胞的毒性。方法:后修饰法制备功能化的纳米粒MSNs-SS-HA,利用透射电镜、马尔文粒径仪、傅里叶红外光谱和元素分析等对纳米粒进行表征。体外透析实验检测MSNs@4S和MSNs-SSHA@4S在不同浓度的谷胱甘肽缓冲溶液中的释放行为。MTT试验测定游离4S和载药纳米粒对TNBC细胞MDA-MB231、乳腺癌细胞MCF-7和乳腺正常细胞MCF-10A的抑制活性。激光共聚焦显微镜观察蒽醌修饰物4S和载药纳米粒在不同细胞中的摄取情况。结果:成功制备功能化的载药纳米粒MSNs-SS-HA@4S,其载药量和包封率分别为(17.43±1.2)%和(90.56±1.1)%。载药纳米粒MSNs-SS-HA@4S具有还原响应特性,同时具有缓控释药作用。在相同浓度下,MSNs-SS-HA@4S对MDA-MB231细胞的毒性高于MCF-10A细胞,而对MCF-7细胞的抗肿瘤活性较弱(P<0.05)。体外细胞摄取实验表明,MSNs-SS-HA@4S能够靶向CD44受体高表达的TNBC细胞MDA-MB231,可能通过CD44受体介导的内吞作用进入细胞,揭示了MSNs-SS-HA@4S具有肿瘤靶向治疗潜能。结论:MSNs-SS-HA@4S提高了蒽醌修饰物4S增效减毒的功效,为TNBC的靶向治疗提供新思路。

蒽醌修饰物KA-4c触发内质网应激靶向ATF6抗乳腺癌细胞作用机制

目的探讨蒽醌修饰物KA-4c抗乳腺癌细胞的作用机制,并采用药物亲和力反应靶标稳定性技术(drug affinity responsive target stability,DARTS)确定其作用靶点。方法MTT法检测细胞活力;HE染色、ER-Tracker Red、电镜研究KA-4c对乳腺癌细胞形态学等的影响;流式细胞术检测KA-4c是否诱导细胞凋亡,Western blot实验检测凋亡蛋白表达;DARTS、细胞热移位分析(cellular thermal shift assay,CETSA)技术确定KA-4c的作用靶点。结果KA-4c对三阴性乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖抑制效果最为明显,并可导致内质网和线粒体空泡化而损伤细胞,凋亡率随KA-4c浓度增加而升高,凋亡相关蛋白CHOP、caspase-7随KA-4c浓度增加表达增强。DARTS结果显示,KA-4c可激活内质网蛋白加工信号通路,其中KA-4c与ATF6蛋白结合而耐受蛋白酶水解;CETSA实验结果表明,KA-4c可呈浓度依赖性增强ATF6蛋白的表达。结论KA-4c触发内质网应激诱导乳腺癌细胞凋亡,ATF6可能是KA-4c的作用靶点之一。

蒽醌修饰物4X触发内质网应激诱导卵巢癌细胞死亡模式研究

目的:探究蒽醌修饰物4X诱导卵巢癌细胞SKOV3和顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的死亡模式和作用机制。方法:分别将SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)蒽醌修饰物4X组。采用MTT法检测细胞增殖率,苏木精-伊红(HE)染色观察细胞形态,线粒体绿色荧光探针观察线粒体形态,透射电镜观察细胞超微结构,western blotting法检测内质网应激相关蛋白(GRP78、PERK)、凋亡蛋白(CHOP)和铁死亡关键蛋白(GPX4)的表达。加入凋亡抑制剂Z-VAD-FMK,与蒽醌修饰物4X共处理,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:蒽醌修饰物4X作用48 h后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制(P<0.05)。经蒽醌修饰物4X处理后SKOV3和SKOV3/DDP细胞质出现明显空泡,且部分空泡累及细胞核,SKOV3和SKOV3/DDP均有明显的线粒体损伤;经蒽醌修饰物4X处理后细胞线粒体固缩,膜密度增高,嵴消失。与对照组相比,蒽醌修饰物4X组SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡率升高(P<0.05),联用ZVAD-FMK可抑制蒽醌修饰物4X对细胞凋亡的促进作用(P<0.05)。蒽醌修饰物4X可不同程度地下调SKOV3和SKOV3/DDP细胞GRP78、PERK、ATF4和CHOP的表达,上调GPX4表达(均P<0.05)。结论:蒽醌修饰物4X可能在诱导内质网应激的同时诱导SKOV3和SKOV3/DDP细胞发生凋亡和铁死亡,从而发挥抗卵巢癌作用。

汉黄芩素对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤生长及端粒酶活性的抑制作用

目的端粒酶在多种肿瘤细胞中高表达,可能是肿瘤分子靶向治疗的一个理想靶点。已有的研究表明,汉黄芩素体外具有抑制肿瘤细胞端粒酶活性和肿瘤细胞增殖的作用。该研究旨在评价汉黄芩素对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长及端粒酶活性是否具有抑制作用。方法将移植人卵巢癌SKOV3细胞的裸鼠随机分为5组:汉黄芩素高剂量组(600mg·kg-1)、汉黄芩素低剂量组(300mg·kg-1)、空白对照组、顺铂治疗组(3mg·kg-1)和联合用药(顺铂+汉黄芩素)组,定期检测裸鼠的体重及肿瘤体积,裸鼠移植瘤组织分别提取DNA、RNA和蛋白质,用Southern印迹杂交法测定端粒长度、RT-PCR扩增观察端粒酶基因hTERT的表达、TRAP-PCR-银染法测定端粒酶活性。结果动物实验表明,汉黄芩素对SKOV3移植瘤有明显的抑瘤作用,高剂量组抑瘤率达56.67%(与对照组比较,P=0.002);低剂量组抑瘤率达38.10%(P=0.019),化疗组抑瘤率达50.83%(P=0.004),联合用药(顺铂+汉黄芩素)组的抑瘤率为66.9%,优于单独使用组(P=0.002);不同浓度汉黄芩素组肿瘤组织的端粒长度与空白对照组比较差异无显著性,汉黄芩素对瘤体端粒酶基因hTERT表达、端粒酶活性均有抑制作用,而且作用强度与剂量有关。结论汉黄芩素在体内具有抗肿瘤和抑制端粒酶活性的作用,抑制强度与剂量成正比,抑瘤率与顺铂合用有相加的作用。

黄芩素对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的 探讨黄芩素对卵巢癌耐药细胞株A2 780 /ADM耐药逆转作用及机制。方法 MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P Gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法 (HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 卵巢癌耐药细胞株A2 780 /ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P Gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;黄芩素在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转A2 780 /ADM对ADM的耐药性 ;ADM与黄芩素合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 卵巢癌耐药细胞株A2 780 /ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P Gp和MRP过量表达有关 ;黄芩素在非细胞毒剂量时能逆转A2 780 /ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P Gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。

茶多酚对肝癌细胞生长及端粒酶活性抑制的研究

目的 探讨茶多酚在体外对肝癌细胞 BEL- 740 2生长的抑制作用及抗癌机制。方法 MTT法测定茶多酚的对人肝癌细胞生长抑制作用 ,集落形成实验观察药物的诱导分化作用 ,PCR-ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 茶多酚能抑制肝癌 BEL- 740 2细胞的增殖 ,其 IC50 为1 5 0μg/ml,且具有诱导分化作用 ,可降低端粒酶活性的表达 ,对 p5 3具有下调作用。结论 茶多酚具有体外抗肿瘤活性 ,其抗癌机制可能是通过抑制端粒酶的活性而实现的。

肿瘤细胞中长春新碱的高效液相色谱法测定

长春新碱（ＶＣＲ）为重要和常用抗肿瘤药物之一。肿瘤细胞耐药性是导致化疗失败的主要原因。为了筛选耐药细胞的逆转剂，建立了测定肿瘤细胞内ＶＣＲ浓度的高效液相色谱法，色谱条件为：Ｚｏｒｂａｘ－ＯＤＳ反相柱２５ｃｍ×４．６ｍｍｉ．ｄ．，流动相：０．０２ｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４（ｐＨ６．６）∶ＣＨ３ＯＨ（２０∶８０，Ｖ／Ｖ），流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２６７ｎｍ。方法简单、快速、选择性好，在１０～２００ｍｇ／Ｌ范围内ＶＣＲ浓度－峰高呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９８），仪器灵敏度为４ｎｇ。所建立的方法适合于ＶＣＲ的血药浓度测定及ＶＣＲ在肿瘤细胞、组织中的代谢、分布、排泄、蓄积等研究。

茶多酚对人肝癌BEL- 7404细胞端粒酶的抑制作用及诱导细胞凋亡的能力(英文)

目的 探讨茶多酚诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡作用和在体外对端粒酶活性的影响。方法 MTT法和活细胞计数法测定茶多酚对人肝癌细胞的生长抑制作用 ,PCR ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。细胞形态学变化和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡现象。结果 茶多酚体外对肝癌BEL 740 4细胞有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度和时间依赖性。采用浓度为 0 2和 0 1g·L- 1 的茶多酚作用 48h后的细胞出现DNA梯度条带和典型的凋亡形态学变化如核固缩、胞膜皱缩、胞核碎裂 ,凋亡小体形成等。茶多酚作用后 ,肝癌BEL 740 4细胞中端粒酶活性明显下降。结论 茶多酚在一定浓度下能诱导肝癌BEL 740 4细胞凋亡 ,其抗癌机制与抑制端粒酶活性有关。

金蒲抑瘤片诱导体外培养的人肝癌BEL-7404细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨金蒲抑瘤片体外对肝癌细胞的诱导凋亡作用。方法 :应用MTT法、生长曲线、荧光染色、血清药理学、DNA凝胶电泳等实验技术研究金蒲抑瘤片体外对BEL 74 0 4细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果 :金蒲抑瘤片体外对BEL 74 0 4细胞有明显的抑制作用 ,且这种抑制作用呈浓度依赖性。经体内代谢的含药血清也具有抑制细胞生长的能力。药物作用后的细胞出现荧光染色增强、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论 :金蒲抑瘤片及其含药血清 ,在一定浓度下能诱导BEL 74 0

羧乙基锗倍半氧化物(Ge-132)对黄曲霉毒素B1诱导肝癌的化学预防作用

目的 :应用大鼠短期实验模型进行Ge- 132对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱癌的化学预防研究。方法 :实验大鼠按不同处理方法分为 5组 :A组高剂量Ge - 132 ;B组 :低剂量Ge - 132 ;C组 :给AFB1前高剂量Ge -132 ;D组 :给AFB1后高剂量Ge- 132 ;E组 :正常对照。在第九周动物处死后肝组织作低温石蜡连续切片 ,分别染γ -谷氨酰转移酶 (γ -GT) ,血清和肝组织测定其超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :Ge - 132具有抵抗AFB1降低SOD活力的作用 ,Ge - 132的摄入时间、剂量可影响大鼠体内SOD活力和γ -GT灶的大小。结论 :实验结果提示Ge - 132的抗氧化作用与抑癌作用有关 ,是一种安全、有效的肝癌化学预防剂。

羧乙基锗倍半氧化物抗移植瘤实验

将移植了ＨｅｐＡ鼠肝癌的ＮＩＨ鼠随机分为四组，一组作对照组，另三组分别给予Ｇｅ－１３２、ＣＹ、Ｇｅ－１３２＋ＣＹ治疗。２周后处死，测定血清中ＳＯＤ活性，对瘤体进行病理切片检查。结果表明：治疗组肿瘤重量较轻，ＳＯＤ活性较高（Ｐ＜０．０５）。Ｇｅ－１３２组的癌组织中白细胞浸润程度较高，细胞免疫力较强。对鼠肝癌的抑制率，Ｇｅ－１３２与ＣＹ合用有相加作用。

乙型肝炎患者血清中超氧化物歧化酶的研究

采用黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶反应产生的超氧阴离子自由基与羟胺反应,测定超氧化物歧化酶(SOD)活力的新方法,对30例正常人和40例乙型肝炎病人血清中总-SOD、Mn-SOD 和 CuZn-SOD 活力进行测定。结果表明:血清中 T-SOD 和 Mn-SOD 正常组与乙肝病人组比较差异性有显著意义(P<0.05)而 CuZn-SOD 活力,急性乙型肝炎患者组著显高于正常对照组(P<0.01).血清 Mn-SOD 活力升高作为乙型肝炎的诊断具有参考价值.

广西肝癌高发区饮用水中腐殖酸含量的测定

在广西肝癌高发区扶绥县的２６个村屯，采集了７２份水样，用福林试剂比色法测定水样中的腐殖酸（－ＯＨ）含量。结果：腐殖酸含量堵水＞河水＞深井水；高发区＞低发区，腐殖酸含量与肝癌呈正相关，测定结果对肝癌病因的研究和改水防病提供了依据。

板蓝根二酮B体外抗癌活性研究

目的 :板蓝根二酮 B抗人肝癌 BEL- 740 2细胞、卵巢癌 A2 780细胞体外活性研究。方法 :MTT法测定板蓝根二酮 B对肝癌 BEL - 740 2细胞和卵巢癌 A2 780细胞的抑制作用 ,集落形成实验观察药物的诱导分化作用 ,PCR- EL ISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 :板蓝根二酮 B具有抑制肝癌 BEL - 740 2细胞、卵巢癌 A2 780细胞增殖的能力 ,其 IC5 0 分别为 8.2 μg/ m L 和 7.8μg/ m L;且具有诱导分化作用 ,可降低端粒酶活性的表达。结论 :研究结果提示板蓝根二酮 B具有体外抗肿瘤活性。

MMP-9,2,7及其抑制剂TIMP-1,2,3在卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义

背景与目的:基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)通过降解细胞外基质在肿瘤的侵袭与转移中起着重要作用,MMPs活性又受到其抑制剂(tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase,TIMPs)的调节。本研究通过检测MMP-9、MMP-2、MMP-7及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3mRNA在卵巢肿瘤组织中的表达,探讨其与卵巢癌临床病理特征和预后的关系。方法:应用RT-PCR方法检测48例卵巢癌、21例良性肿瘤及22例正常卵巢组织中MMP-9、MMP-2、MMP-7及TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3mRNA的表达。结果:MMP-9阳性率和MMP-9、MMP-2半定量值在卵巢癌组织中明显高于正常卵巢组织(P<0.05)。TIMP-2、MMP-7、TIMP-3在卵巢恶性及良性肿瘤组织中的阳性率及半定量值明显高于正常卵巢组织。MMP-9/TIMP-1在卵巢癌组织中的比值(0.91±0.67)明显高于正常卵巢组织(0.15±0.34)。MMP-9表达水平与卵巢癌的手术病理分期及预后有关,在Ⅲ～Ⅳ期患者中的表达(1.13±0.66)显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(0.60±0.54)(P<0.05);MMP-9其阳性患者平均生存时间为(43.00±17.12)个月,累积生存率为47.37%,明显低于MMP-9阴性者(100%)。结论:MMP-9、MMP-2、MMP-7、TIMP-2、TIMP-3基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达增加。