壳多糖酶3样蛋白1、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原在乙型肝炎病毒相关肝硬化中的诊断价值

目的探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)与透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢNP)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和纤维连接蛋白(FN)水平(以下简称“肝纤五项”)在乙型肝炎病毒相关肝硬化中的诊断价值。方法将湖南省人民医院2016年6月至2017年6月住院的慢性乙肝患者62例、肝硬化患者28例、原发性肝癌患者21例纳入研究(均为乙肝表面抗原阳性)。选取同期在该院进行体检且各项指标未见异常者30例作为对照组。用酶联免疫吸附测定检测血清CHI3L1水平,用化学发光法检测血清肝纤五项水平。结果不同组别间CHI3L1和肝纤五项水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肝硬化组的CHI3L1水平明显高于原发性肝癌组、慢性乙肝组和对照组(P<0.05)。肝硬化组的肝纤五项部分项目水平明显高于慢性乙肝组和对照组(P<0.05)。logistic回归模型显示,CHI3L1、LN和CⅣ纳入模型。ROC曲线分析显示,CHI3L1、LN和CⅣ用于区分非肝硬化和肝硬化患者的曲线下面积分别为0.799、0.794和0.888,以CHI3L1:215.34pg/mL、LN:124.01ng/mL和CⅣ:84.27ng/mL为诊断界值点时,敏感度分别为82.1%、71.4%和92.9%,特异度分别为69.0%、84.1%、76.1%。CHI3L1、LN和CⅣ联合检测时,敏感度和特异度分别提高至82.1%和85.8%。结论血清CHI3L1、LN和CⅣ水平对肝硬化的诊断有一定价值;血清CHI3L1、LN和CⅣ联合检测可提高对肝硬化的诊断效能。

幽门螺杆菌VacA N端在巨噬细胞中表达对其细胞因子分泌功能的影响

构建pDsRed-Monomer-C1/vacA N端真核表达载体,研究幽门螺杆菌空泡毒素单一毒力决定簇对THP-1巨噬细胞细胞因子分泌的影响。PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR及测序鉴定后,转染THP-1巨噬细胞中,Western blot和荧光显微镜鉴定VacA蛋白在细胞中的表达;电子显微镜和中性红摄入法观察巨噬细胞的空泡样变;ELISA法检测巨噬细胞培养上清TNF-α、IL-1β含量。重组质粒转染THP-1巨噬细胞24h,部分细胞胞浆中出现大小不等的空泡,且重组质粒组培养上清中TNF-α、IL-1β含量明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)下调细胞因子的分泌。结果显示,成功构建pDsRed-Monomer-C1/vacA真核表达载体;VacA蛋白瞬时高表达上调THP-1巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β;核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)可能参与调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞的分泌。

血清IgG4水平在鉴别诊断IgG4相关肝胆疾病与其他肝胆疾病中的价值

目的探讨血清IgG4水平在IgG4相关肝胆疾病和其他肝胆疾病鉴别诊断中的应用价值。方法选择2015年8月至2017年4月在湖南省人民医院住院治疗的肝胆疾病患者270例,分为以下8组:肝硬化组(17例)、急性胰腺炎组(52例)、慢性胰腺炎组(33例)、胆囊炎和胆结石组(27例)、胆管癌组(30例)、胆管炎和胆管结石组(41例)、胰腺癌组(47例)、IgG4相关肝胆疾病组(23例)。另外选取20例体检健康者作为对照组。采用速率散射比浊法检测血清中IgG4的水平,应用ROC曲线评价IgG4鉴别诊断IgG4相关肝胆疾病的敏感性和特异性。结果与健康人对照组相比,肝硬化组和IgG4相关肝胆疾病组的IgG4水平明显增高(P均<0.05)。与IgG4相关肝胆疾病组相比,肝硬化组、急性胰腺炎组、慢性胰腺炎组、胆囊炎和胆结石组、胆管癌组、胆管炎和胆管结石组、胰腺癌组的IgG4水平明显降低(Z值分别为-5.267,-6.802,-5.921,-6.005,-6.173,-6.513,-6.014;P值均<0.01)。IgG4在区分IgG4相关肝胆疾病和其他肝胆疾病的AUC为0.982,以4.13 g/L为诊断界值点时,敏感性为95.7%,特异性为96.0%。12例IgG4相关肝胆疾病患者激素治疗后2个月IgG4水平明显低于治疗前(Z=-2.021,P=0.043)。结论血清IgG4升高并不是IgG4相关肝胆疾病所特有。以4.13 g/L为诊断界值点时,IgG4在鉴别诊断IgG4相关性肝胆疾病时具有很高的价值,同时对激素治疗后的疗效判断有一定作用,但需扩大样本进一步验证。

血清生化指标对肝胆管上皮内瘤变及癌变的预测价值

目的探讨血清生化指标在肝胆管上皮内瘤变及癌变中判断价值。方法收集121例经肝组织病理学检查的肝胆管上皮内瘤变及癌变患者血清,实验分为3组:低级别肝胆管上皮内瘤变组92例,高级别肝胆管上皮内瘤变组10例,癌变组19例。采用西门子7600-20全自动生化分析仪测定血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)和胆碱酯酶(CHE)。生化指标与病理学分级的评价采用Bayes逐步判别分析。结果血清TB、DB、AST、TBA、GGT和ALP与肝胆管上皮内瘤变程度及癌变呈正相关(P<0.01),CHE与肝胆管上皮内瘤变程度及癌变呈负相关(P<0.05);血清TB、DB、GGT和ALP在3组间差异有统计学意义(P<0.001),且随着瘤变程度的严重而逐渐增高。结果符合模型纳入变量、进入判别模型的指标有TB、TBA和GGT,此Fisher判别函数预测低级别、高级别瘤变及癌变的正确率分别为82.6%、40.0%和52.6%,总正确率为74.4%。预测肝癌的正确率为86.0%。结论血清TB、TBA和GGT对预测肝胆管上皮内瘤变程度及癌变有一定的价值。

脂蛋白相关磷脂酶A2检测在急性冠脉综合征中的应用

目的 探讨脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）对急性冠脉综合征（ACS）的预测价值.方法 选择ACS患者48例为研究对象,ACS患者中稳定型心绞痛患者（SAP组）27例不稳定型心绞痛组（UAP组）22例,急性心肌梗死组（AMI组）26例,健康对照组选取同期该院体检未发现心血管疾病者21例.采用酶联免疫吸附法（ELISA）,检测血浆Lp-PLA2水平.采用西门子7600-20全自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌红蛋白（MYO）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）.结果 不同组别中的Lp-PLA2水平明显不同（F=10.801,P=0.000）.多重比较显示,SAP组、UPA组和AMI组的Lp-PLA2水平明显高于健康对照组（P〈0.05）,AMI组的Lp-PLA2水平明显高于SAP组或UAP组（P〈0.05）.AMI组TG、HDL、LDH、CK、CK-MB和MYO水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而LDL和TC水平差异无统计学意义（P〉0.05）,Lp-PLA2水平与LDL、LDH、CK-MB和MYO正相关,与HDL负相关.受试者工作特征（ROC）曲线分析,Lp-PLA2水平在诊断ACS过程中曲线下面积为0.834（P=0.000）,95%CI为0.740～0.928.结论 高水平血浆Lp-PLA2对ACS患者发生心血管事件有一定的预测价值.

幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础。方法用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),细胞核因子-κB(nuclear factorkappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡。结论VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡。NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡。

血清γ干扰素诱导蛋白10与C反应蛋白对儿童急性感染的诊断价值

目的探讨急性细菌和病毒感染患儿血清γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的水平变化及临床价值。方法选取2013年1月至2016年4月湖南省人民医院住院的急性病毒感染患儿51例、急性细菌感染患儿52例为研究对象,对照组选取同期该院体检未发现感染疾病者51例。采用酶联免疫吸附法检测血浆IP-10水平。采用西门子BNⅡ特定蛋白分析仪测定血清C反应蛋白(CRP)。结果病毒感染组的IP-10水平明显高于细菌感染组和对照组(P<0.05)。细菌感染组IP-10明显高于对照组(P<0.05)。病毒感染组的CRP水平明显低于细菌感染组(P<0.05),但高于对照组(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析,IP-10和CRP在区分急性病原体感染患者和对照组人群的曲线下面积分别为0.688和0.873,灵敏度分别为35.0%、79.6%,特异度分别为96.1%、98.0%。IP-10与CRP联合检测的灵敏度和特异度分别提高到82.5%和100.0%。结论高水平血浆IP-10可能对患儿发生急性感染有一定的预测价值。IP-10和CRP联合检测提高急性病原体感染诊断效能。

微柱凝胶法、盐水法和凝聚胺法在弱抗原抗体反应中的应用

目的比较微柱凝胶法、凝聚胺法以及盐水介质法检测弱抗原抗体反应的效果。方法随机收集老年人和婴儿血浆40份,分别用三种方法检测其与相应的标准RBC反应效果。另收集健康体检者血浆40份,做一系列的倍比稀释,分别用三种方法检测其与相应的标准RBC反应效果。结果在检出弱抗体反应中,微柱凝胶法检出率85%,与凝聚胺法相比,差异有统计学意义(P<0.05),与盐水介质法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。当正常人血浆1∶40稀释时,微柱凝胶法检出率与其他两种方法相比,差异有统计学意义(P<0.05);血浆1∶80稀释,三种方法两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论微柱凝胶法敏感性最高,结果观察更直观,可作为交叉和血常用的方法。盐水法敏感性也较高,操作简单,影响因素较少,可和微柱凝胶法联合应用于交叉配血试验,以保证输血安全。

幽门螺杆菌VacA N端片段通过线粒体途径诱导GES-1细胞凋亡

目的:本研究初步探讨幽门螺杆菌(H.pylori)空泡毒素单一毒力决定簇对GES-1胃黏膜上皮细胞凋亡的影响,为进一步研究H.pylori的致病机制奠定基础。方法:将本课题组已构建的pDsRed-Monomer-C1/VacA N端真核表达载体转染至GES-1细胞中,Western blot鉴定VacA蛋白在细胞中的表达;电子显微镜和中性红摄取试验检测GES-1细胞的空泡样变;Hoechst33342染色、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒以及电镜观察细胞凋亡情况,同时采用分光光度法检测细胞Caspase-9、Caspase-3的活化程度,Rho123检测细胞跨膜电位的变化,ELISA法检测细胞色素C的释放。结果:重组质粒pDsRed-Monomer-C1/VacA转染GES-1细胞24小时后,电镜下可明显观察到空泡样变及核固缩、染色质边聚等凋亡特征,重组质粒组部分细胞发生空泡样变;Hoechst 33342染色后镜下可见明显的核染色质浓缩,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测发现重组质粒组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);Caspase-9和Caspase-3活化程度呈时间依赖性增加,分别在12小时和24小时达到峰值;Rho123染色发现线粒体跨膜电位明显降低;重组质粒转染组释放细胞色素C的浓度呈时间依赖性正相关,与空质粒组及对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:VacA N端片段可诱导GES-1细胞凋亡及空泡样变,VacA蛋白可激活Caspase-9和Caspase-3,且可能主要通过线粒体途径诱导GES-1细胞凋亡。

基因型检测对诊断乙型肝炎病毒感染程度的价值

目的分析基因型检测对诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染程度的临床价值。方法选取某院2011年1月至2013年8月的HBV感染者433例,采用PCR-反向点杂交法检测感染者的HBV基因型,PCR法检测感染者DNA表达载量,ELISA方法检测HBV的E抗原。结果 HBV感染患者中B基因型患者比例(68.13%)明显高于BC混合基因型(5.77%)和C基因型(26.10%),差异有统计学意义(P<0.05);HBV患者DNA表达载量在不同基因型间差异无统计学意义(P>0.05);但HBV E抗原阴性率在不同基因型之间有所不同,B基因型23.82%,BC混合基因型14.78%,C基因型1.42%,差异有统计学意义(P<0.05);基因型与病情严重程度有关:轻中度乙型肝炎患者B基因型比例最高(87.20%),其次为C基因型(9.34%)和BC混合基因型(3.46%)、重度乙型肝炎分别为C基因型(77.08%)、BC混合基因型(14.58%)、B基因型(8.33%)。结论基因型与感染的严重程度及HBV E抗原阴性率有关,与DNA表达载量无关。

可溶性肿瘤发生抑制蛋白2和白细胞介素33联合检测在川崎病患儿心血管受损早期诊断中的应用

目的评估可溶性肿瘤发生抑制蛋白2(s ST2)及白细胞介素33(IL-33)在川崎病(KD)患儿心血管受损中的应用价值。方法选择湖南省人民医院儿科2013年12月至2017年1月入院的282例KD患儿,其中心血管受累组35例,心血管未受累组247例,另外随机选取50例健康儿童作为对照组。分别检测3组儿童的s ST2和IL-33血浆水平,分析KD患儿冠状动脉受损时s ST2、IL-33和常规炎性指标C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白细胞计数(WBC)的变化及相关性,对数据进行统计学分析。结果心血管受累组的s ST2和IL-33血浆水平明显高于心血管未受累组和对照组(P<0.05)。心血管受累组、心血管未受累组CRP、ESR和WBC显著高于对照组(P<0.05),但心血管受累组、心血管未受累组之间CRP、ESR和WBC差异无统计学意义(P>0.05)。静脉注射免疫球蛋白治疗后,心血管受累组s ST2、IL-33水平明显下降(P<0.05),而心血管未受累组s ST2、IL-33水平无明显变化(P>0.05)。Pearson相关分析显示,KD患儿的s ST2、IL-33水平均与超声心动图Z值呈正相关。Logistic回归分析显示,s ST2、IL-33均为KD患儿心血管损伤的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,s ST2、IL-33对KD心血管受损的预测具有较高的诊断价值。结论 KD患儿s ST2、IL-33血浆水平与心血管受损的程度相关,对s ST2和IL-33水平进行分析有助于评估KD患儿的心血管损伤程度及判断预后。

幽门螺杆菌Lpp20真核表达重组载体的构建及鉴定

目的以幽门螺杆菌外膜脂蛋白Lpp20为目的基因,构建H.pylori Lpp20基因的真核表达重组载体pcD-NA3.1(+)-Lpp20,为H.pylori核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法用Pri mer5.0软件分析GenBank中H.pylori外膜脂蛋白Lpp20基因序列,设计合成相应特异性引物,引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,以H.pylori26695株基因组为模板,PCR扩增Lpp20目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-Lpp20;通过酶切分析,PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果以H.pylori26695株基因组DNA为模板扩增出特异的Lpp20基因片段,大小约为528bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori真核表达重组载体pcD-NA3.1(+)-Lpp20。结论PCR扩增得到了大小约为528bp的H.pylori Lpp20目的基因片段;并成功构建了pcD-NA3.1(+)-Lpp20真核表达重组载体。

抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的诊断价值和疗效评估

目的 探讨抗磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体在膜性肾病中的诊断价值和疗效。方法 选取湖南省人民医院2020-2021年膜性肾病患者50例为研究对象[其中特发性膜性肾病(IMN)患者40例为A组,继发性膜性肾病患者10例为B组],其他肾病患者20例为C组及体检健康者20例为D组。比较各组抗PLA2R抗体水平及清蛋白(ALB)、肌酐(CREA)、24 h尿蛋白定量(24 h UP)水平。并分析抗PLA2R抗体水平诊断IMN的效能及与ALB、CREA、24 h UP的关系。结果 A组抗PLA2R抗体水平高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);D组ALB水平高于其他3组,CREA水平低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h UP、抗PLA2R抗体联合检测IMN患者的曲线下面积为0.930,大于抗PLA2R抗体单独检测的曲线下面积(0.882)。抗PLA2R抗体与ALB、CREA、24 h UP水平不存在线性相关关系。从IMN患者中收集到8例使用免疫抑制剂治疗2~3个月后病情缓解的患者,治疗后抗PLA2R抗体水平为128.61(35.66,351.09)RU/mL,与治疗前抗PLA2R抗体水平[267.68(190.22,450.87)RU/mL]比较明显降低(Z=-2.197,P<0.05)。结论 抗PLA2R抗体在IMN诊断中有较高诊断效能,且和24 h UP联合检测诊断效能更高。

小分子酪氨酸激酶抑制剂安罗替尼对鼻咽癌细胞的抗肿瘤活性及其机制

目的探索小分子酪氨酸激酶抑制剂安罗替尼对鼻咽癌细胞的抗肿瘤作用及其潜在机制,为临床应用安罗替尼治疗鼻咽癌提供可靠的实验证据。方法通过CCK-8实验和克隆形成实验检测不同剂量梯度安罗替尼对鼻咽癌细胞6-10B和SUNE-1的细胞活性、增殖能力的影响;通过Transwell和划痕实验分析安罗替尼对鼻咽癌细胞侵袭及迁移能力的影响;利用流式细胞术检测安罗替尼对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响;采用Western blotting验证安罗替尼处理后鼻咽癌细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果在鼻咽癌细胞中加入安罗替尼处理后,6-10B实验组和SUNE-1实验组细胞存活分数降低,细胞集落形成数量明显减少,且呈显著的剂量依赖性,在药物浓度为2.0μmol·L^(-1)时可达到约50%的增殖及克隆抑制率(P<0.01)。Western blotting分析发现,安罗替尼可能是由Erk通路介导线粒体通路激活,促进鼻咽癌细胞凋亡,且以药物浓度达到2.0μmol·L^(-1)时作用最为明显。凋亡检测结果证实,2.0μmol·L^(-1)安罗替尼处理后的实验组较对照组具有更高的细胞凋亡率,且以早期凋亡为主(P<0.001)。此外,2.0μmol·L^(-1)安罗替尼处理后的鼻咽癌细胞发生明显的周期分布改变,6-10B实验组和SUNE-1实验组均发生G_(2)/M期阻滞,且6-10B实验组作用较为显著(P=0.0004),而SUNE-1实验组的变化无统计学意义(P=0.0723)。Transwell和划痕实验结果表明,实验组侵袭和迁移能力较对照组相比显著下降(P<0.05)。结论安罗替尼可能通过Erk通路介导鼻咽癌细胞6-10B和SUNE-1的凋亡,并抑制其增殖,有望成为治疗鼻咽癌的新型靶向药物。

血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与C-反应蛋白对儿童急性病毒感染的诊断价值

目的探讨急性细菌和病毒感染患儿血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的水平变化及临床价值。方法选取2013年1月-2016年4月医院住院的急性病毒感染患儿51例、急性细菌感染患儿52例为研究对象,对照组选取同期医院体检未发现感染疾病者51例,采用酶联免疫吸附法检测血浆TRAIL水平,西门子BNⅡ特定蛋白分析仪测定血清C-反应蛋白(CRP)。结果不同组别中TRAIL和CRP水平明显不同(P<0.05),病毒感染组TRAIL水平明显高于细菌感染组和正常对照组(P<0.05),病毒感染组CRP水平明显低于细菌感染组,但高于正常对照组(P<0.05);受试者工作特征曲线分析,TRAIL和CRP在区分急性病毒感染患者和正常对照者的曲线下面积分别为0.759和0.744,以147.35pg/mL和5.415g/L为诊断界值点时,灵敏度分别为76.0%、70.0%,特异度分别为76.5%、88.2%;TRAIL与CRP联合检测,灵敏度和特异度分别提高到78.0%和92.2%。结论高水平血清TRAIL可能对患儿发生急性病毒感染有一定的预测价值,TRAIL和CRP联合检测提高急性病毒感染诊断效能。

1296株革兰阳性球菌的分布和耐药性分析

目的了解革兰阳性球菌在医院的临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法常规方法培养细菌,HZS新阳光全自动细菌鉴定分析系统对病原菌分型,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果 2010年5月～2012年3月医院共分离出革兰阳性球菌1 296株,菌株数较多的球菌为金黄葡萄球菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌,分别占19.06%、18.67%和13.81%。各种临床标本中以尿液标本分离菌株数最多(占30.02%)。金黄葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对复方新诺明和青霉素耐药率均高于80.00%,对利奈唑胺、替考拉宁和呋喃妥因耐药率均低于10.00%,未检出万古霉素耐药株。肠球菌对利奈唑胺、替考拉宁和万古霉素耐药率分别为4.58%、3.77%和3.14%,对其他抗菌药物耐药率较高。MRSA的分离率为40.48%,MRS的分离率为72.72%;MRSA的耐药率显著高于MSSA。结论金黄葡萄球菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌为医院感染的主要革兰阳性球菌,对抗菌药物的耐药性广泛;临床医疗过程中应重视病原菌检测及药敏试验,以减少耐药菌株产生。

幽门螺杆菌VacA通过激活NF-κB诱导巨噬细胞分泌及凋亡

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）空泡毒素（VacA）单一毒力决定簇对THP-1巨噬细胞分泌和凋亡的影响，以及核因子κB（nuclear factor κB，NF—κB）在调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞功能中的作用。方法将pDsRed—Monomer—C1／vacA转染THP-1巨噬细胞，ELISA法检测巨噬细胞培养上清IL-1β、TNF-α含量；Griess试剂分析培养上清的一氧化氮（NO）水平；荧光探针DCFH-DA检测培养上清的活性氧（ROS）；流式细胞仪检测细胞的凋亡率；凝胶阻滞试验（electrophoretic mobility gel shift assay，EMSA）检测NF—κB的核转位。结果重组质粒转染后6h，重组质粒组培养上清中TNF-α、IL-1β含量明显高于阴性对照组（P〈0．05）；且分别于转染后6h或24h到达峰值；转染后6h或12b，重组质粒组培养上清中NO、ROS含量明显高于阴性对照组（P〈0．05），且于转染后24h达到高峰。转染后16h，重组质粒组的凋亡率明显升高，与阴性对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。重组质粒组加NF—κB的特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）后，IL-1β、TNF-α、NO、ROS的分泌量和细胞的凋亡率明显降低，与重组质粒组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。EMSA试验显示，转染后3h细胞核内有活化的NF—κB，且于转染后12h活性最强。结论VacA蛋白瞬时高表达上调THP-1巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO和ROS；VacA蛋白瞬时高表达诱导THP-1巨噬细胞凋亡；NF—κB可能参与调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞的分泌和凋亡。

羟考酮联合舒芬太尼术后静脉自控镇痛对脊柱外科患者免疫功能的影响

目的研究羟考酮联合舒芬太尼术后静脉自控镇痛对脊柱外科患者免疫功能的影响。方法选取骨科及脊柱外科行手术治疗的患者60例,ASAⅠ级、Ⅱ级,随机分为舒芬太尼组(S组)、羟考酮组(Q组)、舒芬太尼和羟考酮联合组(SQ组),每组20例。检测3组患者麻醉前、手术毕、手术后1 d和手术后2 d血清IL-4和IFN-γ的水平。结果手术后2 d,S组与Q组患者IL-4水平显著高于麻醉前水平,差异具有统计学意义(P<0.05),SQ组患者IL-4水平明显低于S组,差异具有统计学意义(P<0.05);术后1 d和术后2 d时,SQ组IFN-γ水平明显低于S组,差异具有统计学意义(P<0.05);术毕Q组IFN/IL-4比例较S组显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);术后1 d Q组和SQ组IFN/IL-4比例均较S组显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与单用舒芬太尼比较,羟考酮联合舒芬太尼术后静脉自控镇痛可减轻脊柱外科手术患者IFN-γ与IL-4水平的上升,降低炎症反应。

玻璃载体微阵列芯片法在ENA抗体检测中的应用

为评价以玻璃为载体的微阵列芯片法对ENA抗体检测的灵敏度和特异度,及其在常见自身免疫性疾病中的临床应用价值,我们以免疫印迹法(Western blotting,WB)和以玻璃为载体的微阵列芯片法(Microarray)分别对508例自身免疫性疾病患者和155例健康体检者的血清样本进行了检测,并与WB比较。结果显示:与WB方法相比,玻璃载体微阵列芯片法检测的结果如下:Sm/nRNP灵敏度为98.95%,特异度为99.82%;Sm灵敏度为97.18%,特异度为99.49%;SSA灵敏度为95.29%,特异度为98.73%;SSB灵敏度为96.10%,特异度为99.83%;Scl-70灵敏度为98.48%,特异度为99.66%;PM-Scl灵敏度为100%,特异度为99.49%;Jo-1灵敏度为100%,特异度为99.67%;CENP-B灵敏度为98.39%,特异度为99.67%;PCNA灵敏度为98.33%,特异度为99.83%;dsDNA灵敏度为95.28%,特异度为99.64%;核小体灵敏度为96.70%,特异度为99.30%;组蛋白灵敏度为100%,特异度为98.16%;核糖体P蛋白灵敏度为92.50%,特异度为99.83%;AMA-M2灵敏度为92.31%,特异度为99.67%。从检测结果来看,阳性一致率为97.11%,阴性一致率为99.49%。微阵列芯片法与WB结果具有高度的一致性。用微阵列芯片法可同时检测14项ENA抗体谱,操作简单、速度快、灵敏度高、特异性强,具有完成多种项目同时检测的作用,结果可用仪器和软件来自动判读,值得临床推广应用。

1535株非发酵革兰阴性杆菌的分布和耐药性分析

目的了解非发酵革兰阴性杆菌在湖南省人民医院的临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用常规方法进行细菌培养,使用ATB Expression全自动细菌鉴定分析仪和配套的鉴定和药敏板鉴定菌种盒进行药敏试验,部分抗生素采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果2011年5月至2012年3月共分离出非发酵菌1 535株,依次为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌,分别占42.8%、32.5%、8.6%。各种临床标本中以痰液标本的检出率最高(72.4%)。药敏结果显示,分离的非发酵菌对所监测的抗菌药物均有不同程度耐药。ICU病房分离的非发酵菌的耐药率高于普通病房(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌为医院感染的主要非发酵革兰阴性杆菌,对抗菌药物的耐药性广泛,各种细菌之间耐药性差异较大,应加强病原学检测及药敏试验,以减少细菌耐药性产生。