miR-141-3p靶向调控HMGB1对LPS诱导的A549细胞损伤的影响

目的探讨miR-141-3p通过靶向调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞损伤的影响。方法以Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,将miR-141-3p mimics、mimics NC、HMGB1基因过表达质粒(pcDNA3.1-HMGB1)和空载质粒(Vector)分别或共转染至A549细胞中,再采用10μg/ml LPS处理24 h。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性;比色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与HMGB1之间的靶向调控关系。结果LPS干预后,A549细胞增殖活性及细胞中miR-141-3p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及上清液中LDH活性升高(P<0.05)。过表达miR-141-3p可增强LPS处理后的A549细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率及细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和上清液中LDH活性(P<0.05)。然而,HMGB1基因过表达可逆转miR-141-3p对LPS诱导A549细胞损伤的改善作用。双荧光素酶报告基因实验证实,HMGB1是miR-141-3p下游靶基因。结论miR-141-3p可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,降低炎症因子表达水平,改善A549细胞损伤,其作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2/ARE信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响

目的 探讨miR-141-3p对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响及作用机制。方法 将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、agomir-NC组、miR-141-3p agomir组,每组10只;除对照组外,其余大鼠采用脂多糖(LPS)滴注法构建ARDS模型;将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN细胞分为NC组、LPS组、miR-NC组、miR-141-3p mimics组、miR-141-3p mimics+pcDNA组、miR-141-3p mimics+NRF2与Kelch样环相关蛋白1(Keap1)组,除NC组外,其余各组建立LPS细胞模型;qPCR检测肺组织和细胞中miR-141-3p、Keap1 mRNA表达;Western blot检测肺组织和细胞上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、自噬相关基因Beclin-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Keap1、核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)表达;HE和Masson染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分和肺纤维化面积评分;试剂盒检测肺组织羟脯氨酸(Hyp);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;双萤光素酶报告实验验证miR-141-3p与Keap1靶向关系。结果ARDS大鼠肺组织和细胞中miR-141-3p表达下调,Keap1表达上调(P<0.05);过表达miR-141-3p可降低大鼠肺组织病理损伤和纤维化程度、Hyp含量,上调肺组织和细胞中SOD、E-cadherin、LC3B、Beclin-1、NRF2、HO-1表达,下调IL-1β、TNF-α、MDA、N-cadherin、α-SMA、Col-Ⅰ、Keap1表达(P<0.05);过表达Keap1可逆转过表达miR-141-3p对ARDS大鼠肺泡上皮细胞损伤的改善作用(P<0.05);双萤光素酶报告基因实验证实miR-141-3p与Keap1可能存在靶向调控关系。结论 过表达miR-141-3p可能激活Keap1-NRF2/ARE信号通路,激活自噬,抑制炎症反应、氧化应激和上皮-间充质转化进展,改善ARDS大鼠肺纤维化。

miR-146b对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺组织中ICAM-1表达的调控作用

目的:探讨miR-146b对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺组织中细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,阐明miR-146b治疗ARDS的分子机制。方法:采用尾静脉注射油酸法建立ARDS大鼠模型,并将建模成功的大鼠分为模型组(只给予油酸)、agomir阴性对照组和miR-146b agomir组,每组15只,另选15只大鼠作为假手术组(只给予生理盐水,不建模)。术前1 h,miR-146b agomir组大鼠给予miR-146b agomir进行干预,agomir阴性对照组大鼠给予miR-146b agomir阴性对照试剂进行干预。造模成功24 h后,采用血气分析仪检测各组大鼠血氧分压(PaO2)和氧合指数(OI),检测各组大鼠肺组织湿/干重(W/D)比值,ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察各组大鼠肺组织病理形态表现,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中miR-146b和ICAM-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中ICAM-1蛋白表达水平,双荧光素酶报告系统检测miR-146b和ICAM-1的靶向关系。结果:与模型组和agomir阴性对照组比较,miR-146b agomir组大鼠动脉血PaO2和OI及肺组织W/D比值升高(P<0.01),BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.01)。HE染色,假手术组大鼠肺组织结构正常,无明显炎症病理改变;模型组和agomir阴性对照组大鼠肺组织呈现肺泡腔出血、肺泡壁增厚和红细胞渗出等病理变化;miR-146b agomir组大鼠肺组织上述病理形态变化减轻。与模型组和agomir阴性对照组比较,miR-146b agomir组大鼠肺组织中ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而miR-146b表达水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告系统实验证实miR-146b靶向调控ICAM-1基因。结论:miR-146b通过靶向抑制ICAM-1表达水平,降低ARDS大鼠肺组织炎症水平,缓解肺组织功能损伤,对ARDS肺组织起到保护作用。

抑制miR-33表达对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响及机制研究

目的探讨抑制miR-33表达对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响及其机制。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分成假手术组(Sham组)、ARDS模型组(Model组)、antagomir阴性对照组(antagomir-NC组)和miR-33 antagomir组(antagomir组),每组15只。除Sham组外,其他各组大鼠均通过颈部气管滴注脂多糖(LPS)建立ARDS模型。造模成功后给予miR-33 antagomir或antagomir-NC尾静脉注射。测定动脉血氧分压[p(O_(2))]及氧合指数(OI);HE和Masson染色观察肺组织病理学变化;碱性水解法检测肺组织中羟脯氨酸(Hyp)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液中炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;实时荧光定量PCR检测肺组织中miR-33表达水平及转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原蛋白(Collagen)Ⅰ和CollagenⅢmRNA表达水平;Western blot检测肺组织中TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠中p(O_(2))和OI均降低(P<0.05),肺组织损伤严重,且有明显的胶原纤维沉积,肺组织中Hyp含量及肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均升高(P<0.05),肺组织中miR-33和TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和α-SMA蛋白表达水平均增加(P<0.05)。与Model组和antagomir-NC组比较,antagomir组大鼠中p(O_(2))和OI均升高(P<0.05),肺组织损伤明显改善,胶原纤维沉积减少,肺组织中Hyp含量及肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低(P<0.05),miR-33和TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3、α-SMA蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论抑制miR-33表达可能通过抑制TGF-β1/Smad信号通路从而改善ARDS大鼠肺纤维化。

过表达miR-126对急性呼吸窘迫综合征模型大鼠右心功能的影响

目的:探讨过表达miR-126对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠右心功能的影响及可能机制。方法:将60只SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、agomir阴性对照组(agomir-NC组)和miR-126 agomir组(agomir组),每组15只。采用颈部气管滴注LPS(10 mg/kg)法建立ARDS模型,术前24 h经尾静脉注射agomir-NC或miR-126 agomir。造模成功24 h后,行超声心动图检查评估大鼠右心功能,同时测定动脉血氧分压(PaO_(2))和氧合指数(OI);HE染色观察肺组织和右心组织病理学变化;ELISA法检测血清中心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(Mb)水平以及心肌组织中IL-1β和IL-18水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-126及NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,Model组大鼠肺组织和心肌组织病理损伤严重,三尖瓣环收缩期位移(TAPSE)、右心面积变化分数(FAC)和肺动脉加速时间(PAAT)显著减少,肺动脉收缩压(PASP)显著增加(P<0.01);动脉PaO_(2)和OI值以及心肌组织中miRNA-126表达水平显著降低(P<0.01),而血清中cTnⅠ、CK-MB和Mb含量、心肌组织中IL-1β、IL-18含量以及NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01)。与Model组比较,agomir组大鼠肺组织和心肌组织病理损伤程度减轻,TAPSE、FAC和PAAT显著增加,PASP显著减小(P<0.01);动脉PaO_(2)和OI值以及心肌组织中miRNA-126表达水平显著升高(P<0.01),而血清中cTnⅠ、CK-MB和Mb含量,心肌组织中IL-1β、IL-18含量以及NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),而agomir-NC组大鼠以上各指标均无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达miR-126可通过抑制NLRP3炎症小体活化,减轻炎症反应保护ARDS大鼠右心功能。

抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用研究

目的探讨抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用及可能机制。方法随机将100只SD大鼠分成5组:假手术组(sham组)、模型组(Model组)、antagomir NC组(NC组)、miR-128-3p antagomir组(antagomir组)和miR-128-3p antagomir+Nrf2抑制剂ML385组(antagomir+ML385组),每组20只。采用尾静脉注射油酸(0.15 ml/kg)的方法建立肺损伤大鼠模型,术前1 h给予miR-128-3p antagomir或ML385进行干预。造模成功24 h后,测定动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(OI)及肺组织湿/干重比(W/D);苏木精-伊红染色法(HE)观察肺组织病理学改变并评分;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)水平;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测肺组织中miR-128-3p表达水平以及E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA水平;蛋白质印迹免疫(Western blot)检测肺组织中Nrf2和HO-1的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因实验验证miR-128-3p与Nrf2的靶向作用关系。结果与sham组比较,Model组大鼠肺组织损伤严重,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平增加(P<0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.01);与Model组比较,antagomir组大鼠肺组织损伤程度得到明显改善,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平下降(P<0.01),而PaO 2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均上升(P<0.01),而NC组大鼠以上各指标差异无统计学意义(P>0.05);与antagomir组比较,antagomir+ML385组大鼠以上各指标变化趋势又发生逆转(均P<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实,miR-128-3p能靶向调控Nrf2的表达。结论抑制miR-128-3p表达可显著减轻模型大鼠的肺损伤,其作用机制可能与通过靶向调控Nrf2表达,抑制肺组织炎症反应有关。

过表达miR-122-5p通过靶向调控NOD2对帕金森病模型细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨微小RNA-122-5p(miR-122-5p)对帕金森病(PD)模型细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+诱导SH-SY5Y细胞PD模型。分为Con组、MPP+组、MPP++miR-NC组、MPP++miR-122-5p组、MPP++si-NC组、MPP++si-NOD2组、MPP++miR-122-5p+pcDNA组、MPP++miR-122-5p+pcDNA-NOD2组。qRT-PCR与Western印迹检测miR-122-5p、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)2的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。双荧光素酶基因报告法验证NOD2是否为miR-122-5p的靶基因。Western印迹法检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2的表达;采用化学比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量。结果MPP+组SH-SY5Y细胞中miR-122-5p的表达水平明显降低,NOD2 mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P<0.001);转染miR-122-5p mimics或si-NOD2后,细胞凋亡率显著降低,MDA含量与Bax表达水平显著降低,GSH含量与Bcl-2表达水平显著升高(均P<0.001);miR-122-5p可负性调控NOD2的表达;NOD2过表达可逆转miR-122-5p过表达对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结论过表达miR-122-5p通过靶向调控NOD2对PD模型细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制细胞凋亡及增强抗氧化能力而发挥作用。

脓毒症诱导ARDS患者心功能变化的临床分析

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）时由于严重缺氧、细胞因子的激活等因素,可导致心肌细胞能量代谢障碍,进一步加重导致心肌损伤和功能障碍,发展成为多器官功能障碍综合征或多器官功能衰竭（MODS/MOF）,而脓毒症为其常见诱因。

布地奈德联合沙丁胺醇对哮喘急性发作期患者的临床疗效及细胞因子的影响

目的:观察布地奈德联合沙丁胺醇治疗哮喘急性发作期的临床疗效及对IL-13、VEGF的影响。方法:将60例哮喘患者按就诊顺序编号分为观察组和对照组两组,每组各30例;对照组在常规治疗基础上给予布地奈德治疗,观察组在对照组基础上联合沙丁胺醇治疗;治疗4周后观察两组患者的临床疗效和IL-13、VEGF的含量变化。结果:观察组患者临床总有效率为93.33%,明显高于对照组的76.67%,差异有统计学意义(P<0.05);两组血清中IL-13、VEGF含量均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组明显优于对照组(P<0.05)。结论:布地奈德联合沙丁胺醇治疗哮喘急性发作期疗效显著,通过调节IL-13、VEGF水平而改善气道炎症和重塑可能是其发挥治疗作用的机制之一。

迈向科技为先导的外向型企业──汕头特区岭海实业发展总公司

迈向科技为先导的外向型企业──汕头特区岭海实业发展总公司在气侯宜人、金凤花遍开的特区土地上，正崛起一颗闪耀的新星──汕头特区岭海实业发展总公司，自１９８８年１２月成立以来，它白手起家，艰苦创业，历经几年的风风雨雨，凭着“坦诚、谅解、协作、努力”的岭海...

退火工艺对Fe_(73.5)Cu_1Nb_3Si_(13.5)B_9纳米晶带材耐腐蚀性能的影响

采用电化学方法研究了退火工艺对Fe73.5Cu1Nb3Si13.5B9纳米晶带材耐腐蚀性能的影响。用差热分析仪分析了该纳米晶带材的晶化过程,利用X射线衍射仪对经不同温度退火后的非晶带材的晶态结构进行了分析,并用恒电位法测试了样品在3.5%NaCl溶液中的耐腐蚀性能。结果表明,在3.5%NaCl溶液中,经过不同温度退火后的Fe73.5Cu1Nb3Si13.5B9纳米晶带材的耐腐蚀性能随退火温度的升高呈先增加后降低的趋势,其中530℃退火后的样品具有最好的耐蚀性。

抑制miR-193a-5p表达对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的改善作用及其机制

目的:探讨抑制微小RNA(miR)-193a-5p表达对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响,并阐明相关作用机制。方法:60只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、miR-193a-5p拮抗剂组(Antagomir组)和阴性对照组(Antagomir-NC组),每组15只。采用暴露气管法滴注10 mg·kg^(-1)脂多糖(LPS)诱导构建ARDS大鼠模型,假手术组大鼠滴注等体积生理盐水,造模成功后Antagomir组和Antagomir-NC组大鼠给予miR-193a-5p Antagomir或Antagomir-NC尾静脉注射。测定各组大鼠动脉血氧分压(PaO_(2))和氧合指数(OI),HE和Masson染色观察各组大鼠肺组织病理形态表现及肺组织中胶原纤维沉积情况,试剂盒检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸(Hyp)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中miR-193a-5p表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中β连环蛋白(β-catenin)、蜗牛家族转录抑制因子1(Snail1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠PaO_(2)和OI均明显降低(P<0.05);与模型组比较,Antagomir组大鼠PaO_(2)和OI均明显升高(P<0.05)。HE染色观察,假手术组大鼠肺组织结构正常,未见明显的炎性改变;与假手术组比较,模型组和Antagomir-NC组大鼠肺组织结构轻度异常,肺泡萎缩塌陷,肺泡腔内发现有大量的淋巴细胞和少量的中性粒细胞浸润,肺泡间隙增宽;与模型组比较,Antagomir组大鼠肺组织的肺泡腔内淋巴细胞明显减少,中性粒细胞浸润较少,未见明显增生。Masson染色观察,假手术组大鼠肺组织无明显蓝色胶原纤维沉积;与假手术组比较,模型组和Antagomir-NC组大鼠肺组织中出现大量蓝色胶原纤维沉积,肺泡结构损坏严重,呈现明显的肺纤维化情况;与模型组比较,Antagomir组大鼠肺组织黏液中蓝色染色的胶原纤维沉积明显减少。与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中Hyp水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Antagomir组大鼠肺组织中Hyp水平明显降低(P<0.05)。ELISA法检测,与假手术组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,Antagomir组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平均明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中miR-193a-5p表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Antagomir组大鼠肺组织中miR-193a-5p表达水平明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中β-catenin、Snail1和α-SMA蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,Antagomir组大鼠肺组织中β-catenin、Snail1和α-SMA蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:抑制miR-193a-5p表达可通过降低肺组织炎症反应和下调β-catenin、Snail1及α-SMA等蛋白表达,改善ARDS大鼠肺功能和肺纤维化。