建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法

目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的ABCG2核苷酸序列号NM_001032919.1及内参GAPDH核苷酸序列号NM_001195426.1,借助Primer premier 5.0软件设计PCR引物。提取猕猴新鲜肾组织的总RNA,并反转录合成cDNA。接着,利用PCR引物进行实时荧光定量PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析ABCG2的mRNA相对表达水平。结果PCR产物测序结果显示,扩增的ABCG2和GAPDH核苷酸序列与NCBI上猕猴的序列同源性分别为90.91%和91.14%。ABCG2和GAPDH的扩增效率均达到80%~120%,实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2接近1。结论本研究建立的检测猕猴ABCG2 mRNA实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。

准确确定昆明犬排卵时间的研究

为了准确确定昆明犬的排卵时间,适时配种以提高昆明犬的配种效率,试验采用外部观察法,阴道细胞涂片法,试情法,排卵检测试剂盒,测定母犬外周血中雌激素(E2)、促黄体生成素(LH)和孕酮(P)水平,超声波诊断等方法综合判断母犬排卵的最佳时间,通过外科手术观察卵巢输卵管发育排卵情况并进行活体取卵试验验证。结果表明:昆明犬母犬的排卵时间是在LH峰值出现后的48~72 h,即阴道出血后的9~10 d,阴道涂片角质化细胞达到90%,此时P浓度达到(12.79±1.25)ng/m L,超声波诊断可见卵泡。取卵准确率达80%,卵母细胞成熟率为55.0%,平均每只昆明犬取卵4枚。说明根据发情外部表现、阴道黏液涂片、超声波诊断、LH及P水平检测共同运用可以准确确定昆明犬的排卵时间,并通过外科手术进行活体取卵试验,在输卵管内可以收集到发育成熟的卵母细胞。

饮水中添加几丁聚糖对北京肉鸭生长性能及屠宰性能的影响

试验旨在通过饮水中添加不同水平的几丁聚糖,研究其对北京肉鸭生长性能及屠宰性能的影响,以便为饮水中添加几丁聚糖替代抗生素提供参考依据。选用10日龄的北京小鸭800只,随机分成4个组,每组设4个重复,每个重复50只(公、母各半),且每个重复北京鸭的体重不存在显著差异(P>0.05)。试验组在饮水中分别添加0.5%(0.5%组)、1.0%(1.0%组)、2.0%(2.0%组)的几丁聚糖、采食基础日粮,对照组饲喂在基础日粮中添加抗生素的饲料。全程自由采食和饮水,自然光照,单笼饲养。通过测定北京肉鸭的增重、采食量、料肉比、成活率以及屠宰性能等指标,比较分析添加几丁聚糖与添加抗生素的效果,进一步筛选出几丁聚糖的适宜添加替代比例。结果表明,试验组和对照组在增重、饲料报酬上并没有显著的差异(P>0.05),但在22日龄时,1.0%组的体重显著高于对照组(P<0.05),0.5%组的采食量显著高于对照组(P<0.05)。0.5%组的成活率为最高。试验组与对照组在屠宰性能以及肉色上也没有显著的差异(P>0.05)。综合来看,在饮水中添加0.5%、1.0%、2.0%的几丁聚糖与在饲料中添加抗生素对北京肉鸭的增重、饲料报酬、屠宰性能以及肉色上都没有明显的影响(P>0.05),而以0.5%组的采食量和成活率较高。因此,在今后的肉鸭养殖生产中,可以考虑在饮水中添加几丁聚糖替代在饲料中添加抗生素使用,且以添加0.5%的几丁聚糖效果相对较好。

建立检测树鼩葡萄糖转运蛋白GLUT9 mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR方法

建立检测树鼩葡萄糖转运蛋白GLUT9mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR方法。设计检测GLUT9(SLC2A9)及内参GAPDHmRNA的引物,以树鼩新鲜肾脏组织提取的总RNA为模板,进行实时荧光定量扩增,获得SLC2A9及GAPDH的标准曲线及其相对表达变化。测序结果显示扩增的SLC2A9及GAPDH核苷酸序列与人类的同源性为81%和95.1%。实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R^(2)接近1。建立了检测树鼩GLUT9mRNA实时荧光定量方法,为研究高尿酸血症的发病机理、新药等奠定基础。