髓源树突状细胞对Ⅱ型胶原诱导关节炎小鼠CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞的影响

目的研究髓源树突状细胞(BMDCs)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的影响及作用机制。方法从40只雄性BALB/c小鼠中,随机选择10只颈椎脱臼法处死,收集来自骨髓的单核细胞,用白细胞介素(IL)-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及脂多糖(LPS)分别诱导使其成为未成熟树突状细胞(imDC)及成熟树突状细胞(mDC),同时应用流式细胞术对细胞表型进行分析,采用免疫印迹法(Western blotting)检测共刺激分子CD80、CD86和主要组织相容性复合体(MHCⅡ)蛋白表达。另取上述小鼠30只,采用Ⅱ型胶原免疫,建立类风湿关节炎(RA)小鼠模型。在免疫之后第6天,按照随机数字表法把小鼠分为空白对照组(10只)、imDC组(10只)和mDC组(10只),分别沿小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、imDC和mDC;于免疫之后第7天对3组小鼠进行免疫强化操作,于免疫强化之后第21天检测3组小鼠的关节变形情况,并测定关节炎指数(AI)评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blotting测定小鼠血清转化生长因子(TGF)-β和IL-10的表达,流式细胞术检测小鼠脾脏组织Treg细胞比例。结果髓源单核细胞经IL-4+GM-CSF诱导后,其共刺激分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达率分别为36.80%±5.86%、32.80%±6.42%、56.80%±5.36%,即为imDC;经IL-4+GM-CSF+LPS诱导后,其共刺激分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达率分别为90.03%±7.38%、89.87%±7.10%、93.03%±7.76%,即为mDC;结果表明,树突状细胞(DC)成功诱导分化为imDC和mDC。强化免疫后第21天,imDC组AI评分[(7.28±1.45)分]显著高于mDC组[(13.78±2.14)分]和空白对照组AI评分[(12.31±1.83)分],差异有统计学意义(P<0.05);imDC组血清IL-10和TGF-β[(11.32±2.17)pg/mL和(27.15±4.71)pg/mL]显著高于mDC组[(5.47±1.83)pg/mL和(11.64±2.67)pg/mL]及空白对照组[(4.96±1.79)pg/mL和(12.06±2.25)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);imDC组脾脏Treg细胞比例(4.62%±1.03%)显著高于mDC组(3.05%±0.87%)和空白对照组(3.03%±0.91%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论髓源imDC可缓解CIA小鼠的病情,促进抗炎细胞因子IL-10和TGF-β表达,加快Treg细胞增殖,从而导致免疫耐受。

成人急性髓系白血病患者CD68、C反应蛋白、血小板计数与疗效的相关性研究

目的探讨成人急性髓系白血病(AML)患者CD68、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)与疗效的相关性。方法根据疗效是否为完全缓解(CR)将96例AML患者分为CR组(n=53)和非CR组(n=43)。分析疗效的影响因素及CD68、CRP、PLT与疗效的相关性。结果CR组患者CD68和CRP均明显低于非CR组,PLT明显高于非CR组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素分析显示,CD68、CRP及PLT均是AML患者疗效的独立影响因素(P﹤0.05)。Kendall分析显示,AML患者疗效与CD68、CRP均呈负相关,与PLT呈正相关(P﹤0.01)。结论CD68、CRP及PLT均是AML患者接受治疗后疗效的独立影响因素,并且CD68、CRP与疗效呈负相关,PLT与疗效呈正相关,因此在AML患者的治疗过程中,动态监测相关影响因素的变化情况可以为临床医师诊断病情提供依据。

输血相关急性肺损伤对大鼠血浆和肺组织血管生成素-2表达的影响

目的探讨输血相关急性肺损伤(TRALI)时血浆和肺组织中血管生成素-2(Ang-2)的表达及其意义。方法选择60只SD大鼠,按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、脂多糖(LPS)对照组、TRALI模型组、急性肺损伤(ALI)对照组,每组15只。采用"LPS-血浆二次打击"法复制TRALI大鼠模型。NS对照组腹腔注射NS 2 mL,移除大鼠血液1 mL后输注等体积NS。LPS对照组大鼠腹腔注射2 mg/kg LPS(1 min内注完)1 mL 2 h后静脉输注等体积NS。TRALI模型组腹腔注射2 mg/kg LPS 1 mL,2 h后静脉输注血浆1 mL。ALI对照组静脉输注5 mg/kg LPS 1 mL诱导ALI。制模完成后处死大鼠取肺组织观察病理学改变并进行肺损伤评分;取支气管肺泡灌洗液(BALF)检测细胞总数、中性粒细胞比例(NEUT);用蛋白质免疫印迹试验(Western Bolt)检测血浆中Ang-2蛋白表达;免疫组化法观察肺组织中Ang-2阳性表达;实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肺组织中Ang-2 mRNA表达水平。结果光镜下可见,NS对照组大鼠肺组织结构清楚,肺泡壁结构完整,肺泡内未见炎性细胞渗出及肺泡萎陷,肺泡间隔均一无增宽;LPS对照组肺泡间隔轻度增宽、有少量炎性细胞浸润;TRALI模型组肺泡间隔增宽、中等量出血并有较多炎性细胞浸润;ALI对照组肺内大量炎性细胞浸润,间质水肿加重,伴出血、微血栓及灶性肺不张。ALI对照组、TRALI模型组血浆Ang-2蛋白和肺组织Ang-2 mRNA表达均显著高于NS对照组、LPS对照组[Ang-2蛋白(灰度值):0.58±0.09、0.43±0.07比0.12±0.03、0.20±0.05,Ang-2 mRNA(2^(-ΔΔCt)):0.39±0.10、0.29±0.09比0.10±0.05、0.16±0.04,P均<0.01];ALI对照组、TRALI模型组BALF细胞总数(×10~6/L:361±78、310±76比101±63、165±65)、NEUT(0.396±0.125、0.335±0.115比0.098±0.035、0.114±0.041)均明显高于NS对照组和LPS对照组(P均<0.05);ALI对照组、TRALI模型组病理学评分、肺湿重/体重比值和动脉血氧分压(PaO_2)均显著高于NS对照组和LPS对照组(P均<0.05)。ALI对照组与TRALI模型组各项指标比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论TRALI大鼠肺组织和血浆中Ang-2的表达升高,提示Ang-2可能参与了TRALI病理生理过程。

自体血回输对心脏手术患者围手术期细胞免疫功能的影响

目的探讨自体血回输对心脏手术患者围手术期细胞免疫功能的影响。方法回顾性分析2008年8月～2012年10月择期心脏手术患者200例的临床资料,根据输血方式分为观察组（120例）和对照组（80例）。观察组术中采用血液回收机将自体血回输给患者,对照组术中全部输异体成分血,分别于入手术室（术前）,术后d 1、5检测2组患者静脉血T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞（NK细胞）,并对其进行统计学分析。结果观察组和对照组术后d 1 CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞分别为（0.701 2±0.085 6）、（0.374 8±0.0 58 9）、（1.64±0.23）、（0.152 4±0.059 8）和（0.6 32 9±0.0 81 6）、（0.302 3±0.067 5）、（1.23±0.28）、（0.134 2±0.045 2）,均较术前的（0.779 6±0.112 4）、（0.446 2±0.080 1）、（1.73±0.24）、（0.213 4±0.065 2）和（0.7 63 2±0.089 5）、（0.453 2±0.070 1）、（1.65±0.31）、（0.186 9±0.054 7）明显减少（P〈0.05）;但观察组明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。术后d 5观察组CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋,NK细胞与术前比较差异无统计学意义（P〉0.05）;而对照组术后d 7CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞分别为（0.589 7±0.070 2）、（0.276 8±0.051 2）、（1.01±0.32）、（0.121 4±0.056 9）,仍较术前明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论术后自体血回输患者细胞免疫功能的抑制较异体血输入者轻,术后细胞免疫功能恢复快。

输血相关性急性肺损伤患者免疫调节性T淋巴细胞表达与预后的关系

目的探讨输血相关性急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)患者外周血免疫调节性T细胞(Treg)免疫活性的变化规律,并探讨其在患者不良预后中的临床意义。方法 TRALI患者(TRALI组)26例,根据临床多器官功能障碍综合征(MODS)的诊断标准,分为并发MODS组(n=8)和非MODS组(n=18),根据患者的预后情况,将其分为死亡组(n=5)和生存组(n=21);输血未发生TRALI组(非TRALI)30例,正常对照组为同期健康体检者30例。分别采集各组的外周静脉血,采用免疫磁性分离系统对外周血CD4+CD25+Treg进行分离纯化;采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg表面分子T淋巴细胞毒性相关抗原-4(CTLA-4)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Treg孵育液上清中IL-10的水平。结果 TRALI组患者CD4+CD25+Treg表面分子CTLA-4表达率[(37.65±7.33)%]及分泌IL-10水平[(45.34±4.19)pg/mL]与正常对照组[(22.12±7.23)%和(12.12±3.23)pg/mL]比较,均明显升高(P<0.05,P<0.01);MODS组患者CTLA-4表达率[(42.23±7.43)%]及分泌IL-10水平[(61.35±10.09)pg/mL]显著高于非MODS组[(30.26±5.65)%和(37.87±6.55)pg/mL](P<0.05,P<0.01);死亡组CTLA-4表达率(44.45±12.34)%及分泌IL-10水平(65.76±22.32)pg/mL显著高于生存组[(31.43±10.12)%和(43.46±10.67)pg/mL](P<0.05,P<0.01)。结论 TRALI患者外周血CD4+CD25+Treg表面分子表达及细胞因子分泌在是否并发MODS及是否生存等不同组间存在显著差异,提示TRALI可促进CD4+CD25+Treg表面分子表达,并刺激其分泌大量抑制性细胞因子发挥自身免疫作用,从而导致机体免疫功能障碍甚至免疫紊乱的发生与发展。

乳腺癌CD4^+ CD25^(high) Foxp^(3+)调节性T细胞数量和分布及Foxp3mRNA表达与肿瘤分期的相关性研究

目的研究乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3mRNA的表达变化与国际抗癌联盟(UICC)乳腺癌的TNM分期的关系。方法用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析40名健康对照者及40例乳腺癌患者(临床TNM分期T1期9例、T2期10例、T3期12例、T4期9例)外周血、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量及分布情况。实时荧光定量PCR技术检测TregFoxp3mRNA表达水平。结果乳腺癌患者外周血CD4+CD25high Foxp3+Treg占CD4T细胞的百分比为(8.91±3.06)%,高于正常健康对照组(5.84±2.63)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者TIL、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(P均<0.01)。乳腺癌组织TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度(MFI)显著高于外周血(P<0.05)。T1、T2、T3、T4期乳腺癌患者Treg比例分别为(5.81±1.89)%、(6.52±2.15)%、(9.65±3.14)%、(11.86±2.43)%。乳腺癌患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01)。相关分析显示,Treg数量与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.7 576,P<0.01);Foxp3基因mRNA表达水平与乳腺癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.6 129,P<0.05)。结论乳腺癌患者CD4+CD25high Foxp3+Treg的数量升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关。乳腺癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3mRNA的表达强度均有所不同,提示这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25high Foxp3+Treg将来可作为乳腺癌患者病情进展的重要判断指标之一。

输血相关性急性肺损伤SD大鼠肺组织细胞间黏附分子-1基因的表达

目的研究输血相关性急性肺损伤（transfusion-relatedacutelunginjury，TRALI）SD大鼠肺组织细胞间黏附分子（intercellularcelladhesionmolecule，ICAM）一1基因表达和中性粒细胞（polymorphonuclearneutrophil，PMN）数量的变化，旨在探讨ICAM-1和PMN在TRALI发病中的作用。方法60只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、脂多糖组、TRALI组、阳性对照组各15只。①正常对照组采用假手术处理；②脂多糖组经大鼠腹腔注射脂多糖（2mg／kg，≤1min完毕），2h后静脉输注生理盐水（约1mL／只）；（3）TRALI组腹腔注射脂多糖（2mg／kg）2h后静脉输注血浆（约1mL／只）；④阳性对照组静脉输注脂多糖（5mg／kg）诱导急性肺损伤。采用Western印迹法检测血浆CAM-1蛋白表达；采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测大鼠肺组织中ICAM-1基因表达量；采用免疫组化法观察肺组织中ICAM一1蛋白表达。结果阳性对照组、TRALI组血浆ICAM-1蛋白表达均显著高于正常对照组、脂多糖组（0．58±0．09、0．41±0．07VS．0．12±0．03、0．21±0．04，均P〈0．01）；与正常对照组肺组织中ICAM-1蛋白含量和ICAM-1mRNA表达[（0．16±0．03）和（0．36±0．05）]比较，阳性对照组[（0．33±0．09）和（1．53±0．17）]和TRALI组[（0．27±0．07）和（1．24±0．11）]明显升高（P均〈0．05）；TRALI组BALF中细胞总数和PMN百分比[（310±76．6）×10^6／L和（33．5±11．5）％]明显高于正常对照组[（101±63．8）×10^6／L和（9．8±3．5）％，P均〈0．05）]；TRALI组组织含水量和MPO活性明显高于正常对照组（P均〈0．05）。结论TRALI大鼠肺组织中ICAM-1蛋白、ICAM-1mRNA的表达升高，肺组织PMN浸润增加，提示ICAM-1参与了PMN与内皮细胞的黏附和聚集，表明ICAM-1和PMN可能在TRALI的炎症反应过程中发挥重要作用。

肺癌患者外周血CEA mRNA、CK19 mRNA和CK20 mRNA的表达

在肿瘤的治疗中,目前困扰临床医生的主要问题仍是肿瘤的复发与转移。为此本研究采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对不同临床分期和类型的肺癌患者外周血CEA mRNA、CK19 mRNA和CK20 mRNA的表达水平进行检测,探讨其对肺癌微转移诊断和监测的临床意义。1对象与方法 1.1研究对象肺癌患者60例,男46例,女14例。平均年龄57.8岁,均经病理组织切片确诊。其中小细胞肺癌10例,

创伤后多器官功能障碍综合征患者外周血髓源抑制细胞细胞的表达

目的探讨创伤后多器官功能障碍综合征(MODS)患者外周血髓源抑制细胞(MDSCs)的表达在诊断MODS疾病严重程度和预后判断中的临床意义。方法分别采集66例MODS患者、78例非MODS患者和37例健康志愿者外周血,以CD14-CD11b+CD33+作为MDSCs的标志,采用流式细胞术检测MDSCs细胞的表达;以MODS评分评估疾病严重程度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并分析患者MDSCs的表达与疾病严重程度评分和IL-10和TNF-α水平的相关性。结果 MODS患者外周血CD14-CD11b+CD33+细胞表达为(11.84±2.18)%明显高于非MODS组的(6.52±0.37)%和健康对照组的(1.18±0.22)%(P<0.05);MODS患者死亡组(15.66±1.68)%较存活组(9.48±1.56)%明显升高(P<0.05)。MODS患者血清IL-10、TNF-α水平较非MODS组和健康对照组明显增高(P<0.05)。MODS患者中死亡组血清IL-10、TNF-α水平较存活组明显升高(P<0.05);相关分析显示,MODS患者外周血CD14-CD11b+CD33+细胞表达率与TNF-α水平和MODS评分成正相关(r分别为0.342 6、0.387 9,P<0.05)。结论外周血MDSCs水平变化可能与疾病的严重程度和预后相关。

输血前进行不规则抗体检验的临床意义和实际应用分析

探讨输血前进行不规则抗体检验的临床意义和实际应用价值。方法 抽选自医院常规开展输血前不规则抗体检测以来(2020年1月~2022年12月)入院行输血治疗者2506例为研究组,抽选医院只进行常规血型检测(2013年1月~2015年12月)后即行输血治疗者2507例为对照组,行对比性临床研究。统计分析:研究组中不规则抗体检出者特异性分布,不规则抗体免疫球蛋白类型分布;统计两组输血治疗后血常规、凝血指标,输血不良反应发生率差异。结果 (1)研究组中共检出不规则抗体25例,MNS系统占比52.00%,Lewis系统占比24.00%,Kidd系统占比8.00%,Duffy系统占比4.00%,P系统占比8.00%,Diego系统占比4.00%;女性不规则抗体检出率(68.00%)高于男性,妊娠史、输血史为不规则抗体高风险因素类型。(2)研究组25例不规则抗体检出者经免疫球蛋白类型检验后可知,IgM抗体占比为12.00%,IgG抗体占比为72.00%,IgG+IgM抗体占比为16.00%。(3)研究组输血后Hb、RBC、FIB数据高于对照组,且WBC、PT、APTT、TT及D-D数据低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)研究组输血后不良反应发生率为1.48%,对照组为研究组近2.5倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 输血治疗前应加强对合并妊娠史的女性患者及合并既往输血史患者的不规则抗体检查,以确保临床输血安全,并促进输血后患者凝血功能、红细胞指标的积极恢复。

应用多媒体优化初中数学教学浅析

在新课改出现的诸多教学模式中,多媒体教学显示出了强大的生命力.特别是在初中数学课堂上,多媒体的出现增大了课堂教学容量,促进了学生知识理解,培养了学生探究能力,成为了名副其实的＂课改利器＂.

miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4＋T细胞的调控研究

目的研究miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4’T淋巴细胞的调控，探讨miRNA-146a在寻常性银屑病发病中的作用。方法收集寻常性银屑病患者和健康对照各30例。采用实时定量PCR检测外周血CD4＋T淋巴细胞miRNA-146a表达水平，ELISA检测血浆干扰素（IFN）-y、白细胞介素（IL）-4表达水平。免疫磁珠法分选外周血CD4＋T淋巴细胞，将分离的细胞分为对照组、miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组，分别转染阴性对照miRNA、miRNA-146a模拟物和miRNA-146a抑制物后进行细胞培养，流式细胞仪检测Thl和Th2细胞数量，蛋白免疫印迹法和实时定量PCR分别检测IFN-1受体a（IFN-YRa）、T细胞表达T盒（T—bet）、GATA-3蛋白和mRNA的表达，ELISA检测细胞培养液上清液IFN-1、IL-4水平。结果寻常性银屑病患者外周血CD4＋T淋巴细胞miRNA-146a[（243．81±94．32）％]与血浆IFN-Y水平[（27．69±7．64）ng／L]较健康对照组[分别为（105．744-22．93）％和（9．75±2．81）ng／L]升高，差异均有统计学意义（t值分别为6．653和4．237，均P〈0．01），且miRNA-146a的表达与血清IFN-y呈正相关（r=0．837，P〈0．01）。体外CD4＋T淋巴细胞培养结果显示，与对照组比较，miRNA-146a组Th1数量、T—bet蛋白和mRNA表达、培养上清液IFN-1水平均显著增加，IFN-YRot蛋白表达降低，差异均有统计学意义（均P〈0．01）；但是，与对照组比较，miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组Th2细胞数量、GATA-3蛋白、GATA-3mRNA表达以及上清液中IL-4水平差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论miRNA-146a可能通过影响Th1细胞的分化和功能参与对寻常性银屑病患者外周血CD4-T淋巴细胞的调控，在银屑病发病过程中发挥一定的作用。

重症胰腺炎肺损伤大鼠磷脂酰肌醇-3激酶表达及其抑制剂对肿瘤坏死因子-α表达的影响

急性肺损伤（ALI）是重症急性胰腺炎（SAP）常见且严重的并发症之一，若不及时干预将进一步发展成急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。目前研究结果显示ALI是一种介质病，中性粒细胞的活化、浸润及大量炎症介质的释放，可造成肺组织及其毛细血管的损伤，从而使肺损伤加重。

输血相关急性肺损伤大鼠肺组织细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子的表达

目的研究输血相关急性肺损伤(TRALI)大鼠肺组织细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)mRNA表达水平的变化,探讨CINC-1在大鼠TRALI发病机制中的作用。方法将60只SD大鼠随机分为TRALI组、正常对照组、脂多糖(LPS)对照组和阳性对照组,每组15只大鼠。LPS对照组大鼠经腹腔注射LPS(2 mg/kg,1 min内完毕),2 h后静脉输注1 m L生理盐水;TRALI组大鼠经腹腔注射LPS(2 mg/kg)2 h后静脉输注1 m L储存28 d的同种异体血浆;正常对照组大鼠采用假手术处理;阳性对照组大鼠移除约等于大鼠10%血容量的血液(1 m L)后,经静脉输注LPS(5 mg/kg)诱导急性肺损伤。采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠肺组织中CINC-1 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验测定肺组织匀浆CINC-1蛋白含量;检测肺湿/干重比、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,观察肺组织病理学改变,比较支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞百分比。结果与正常对照组和LPS对照组比较,TRALI组肺组织中CINC-1蛋白和CINC-1 mRNA表达明显增高[(18.98±2.21)ng/g和[(26.42±3.37)ng/g比(38.95±4.32)ng/g,F=11.28,P<0.05;(0.24±0.09)和(0.15±0.08)比(0.38±0.09),F=15.31,P<0.05]。TRALI组BALF中细胞总数和中性粒细胞百分比[(310.63±76.67)×106/L和(33.57±11.51)%]明显高于正常对照组[(101.36±63.83)×106/L和(9.87±3.56)%](F=13.82、5.41,P<0.05)。TRALI组肺组织含水量和MPO活性明显高于正常对照组(F=5.78、13.46,P<0.05)。阳性对照组各指标均显著高于TRALI组(P<0.05)。结论 TRALI大鼠肺组织中CINC-1的表达升高,肺组织中性粒细胞浸润增多,提示CINC-1参与了中性粒细胞与内皮细胞的粘附和聚集,推测CINC-1可能在TRALI的发病过程中起着重要作用。

臭氧暴露对哮喘大鼠CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T淋巴细胞数量和Foxp3mRNA表达的影响

目的 探讨低浓度臭氧暴露对支气哮喘大鼠CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T细胞数量及转录因子Foxp3mRNA表达的影响.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、臭氧暴露组、哮喘组和臭氧暴露哮喘组,每组15只.哮喘组采用卵清白蛋白（OVA）致敏并吸入激发制备哮喘模型,正常对照组雾化生理盐水,臭氧暴露组予吸入低浓度臭氧,臭氧暴露哮喘组于每日雾化激发OVA前给予低浓度臭氧吸入.流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血和肺组织γ-干扰素（γ-INF）以及白细胞介素-4（IL-4）含量;聚合酶链反应（PCR）检测肺组织Foxp3mRNA表达水平.结果 哮喘组大鼠CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T细胞占CD4T细胞的比例为6.12％±1.03％,臭氧暴露组为5.87％±1.26％,均低于正常对照组（9.85％±1.34％）;臭氧暴露哮喘组CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T细胞占CD4T细胞的比例为（3.31％±0.85％）,低于正常对照组和哮喘组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.哮喘组大鼠血浆和肺组织中IL-4含量[血浆：（21.83±5.12） ng/L,肺组织：（0.89±0.13） ng/L]高于正常对照组[血浆：（10.58±2.73） ng/L）,肺组织：（0.32±0.11） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.01）;臭氧暴露哮喘组血浆和肺组织中IL-4含量[血浆：（35.47±7.24） ng/L,肺组织：（1.58±0.43） ng/L]高于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义（P＜0.01）.哮喘组血浆和肺组织中γ-INF含量[血浆：（61.78±23.45） ng/L,肺组织：（0.69±0.21） ng/L]低于正常对照组[血浆：（158.89±60.23） ng/L,肺组织：（1.86±0.29） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.01）,臭氧暴露哮喘组γ-INF含量[血浆：（10.28±2.63） ng/L,肺组织：（0.46±0.12） ng/L低于正常对照组和哮喘组,差异有统计学意义（P＜0.01）.臭氧暴露哮喘组和哮喘组Foxp3mRNA表达低于正常对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 低浓度臭氧暴露可能通过下调CD4＋CD25highFoxp3＋调节性T细胞数量并抑制Foxp3mRNA表达,加重哮喘大鼠体内Th1/Th2比例失衡,提示臭氧暴露可能是诱发哮喘发病的因素之一.

特应性皮炎患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号转导通路的表达

目的 探讨特应性皮炎（AD）患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶（PI3K）信号转导通路活化情况及其临床意义.方法 检测38例AD患者的T细胞PI3K通路活性,健康对照组38例.外周血T淋巴细胞分离采用Rosettsep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和酶联免疫吸附试验（ELISA）,Akt及其磷酸化蛋白采用免疫印迹法,T细胞增殖采用噻唑蓝（MTT）,白细胞介素（IL）6和IL-10水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的AD患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于健康对照组（P＜0.05）.AD患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与健康对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,健康对照组T细胞用AD患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高（P＜0.05）.PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制AD患者T细胞增殖[（123±25）％和（195±28）％,P＜0.05]及分泌IL-6和IL-10分别为[（431±64） ng/L和（823±128） ng/L,P＜ 0.05],[（120±21） ng/L和（213±35） ng/L,P＜0.05].新鲜分离的AD患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与疾病严重程度指数（EASI）无相关.结论 AD患者外周血T细胞存在磷酸肌醇3激酶信号转导通路活化异常,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,提示AD患者外周血中可能存在激活该通路的血清因子.

输血相关急性肺损伤对SD大鼠巨噬细胞活化和共刺激分子CD40表达的影响

目的观察输血相关急性肺损伤（transfusion—related acute lung injury，TRALI）SD大鼠肺泡巨噬细胞活化及共刺激分子CD40表达，探讨其在TRALI发病机制中的作用。方法SD大鼠60只，随机（随机数字法）分为正常对照组、脂多糖对照组、TRALI组和阳性对照组各15只。正常对照组采用假手术处理；脂多糖对照组大鼠经腹腔注射脂多糖（2ms／kg，≤1min完毕），2h后静脉输注生理盐水（约1mL／只）；TRALI组腹腔注射脂多糖（2mg／kg）2h后静脉输注血浆（约1mL／只）；阳性对照组静脉输注脂多糖（5ms／kg）诱导急性肺损伤。光镜观察肺组织病理变化；应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定活化巨噬细胞（activatedmacrophage，AMφ）中TLR4表达；电泳迁移率变动分析（EMSA）检测AMφ核提取物中NF—KB的活性；Northernblot检测CIM0mRNA表达，流式细胞术检测CD40蛋白表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF一α、MIP-2及IL-1β的含量。结果TRALI组和阳性对照组大鼠肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润；活化AM表面TLR4的表达升高、NF．KB活性增强、共刺激分子CD40mRNA和蛋白显著表达，与正常对照组和脂多糖对照组比较差异具有统计学意义（均P〈0．01）。TRALI组BALF中TNF-α、MIP-2、IL-1β的表达水平均显著高于正常对照组和脂多糖对照组（P均〈0．05）。结论AMφ能上调其表面共刺激分子的表达，促进炎细胞因子的释放，增强获得性免疫反应介导的急性肺损伤，提示AM活化可能在TRALI的发生过程中发挥一定作用。

特应性皮炎患者外周血T淋巴细胞Rho激酶活性变化及其意义

目的观察特应性皮炎（AD）患者外周血T淋巴细胞中Rho激酶活化情况，分析其临床意义。方法收集60例AD患者和60例健康儿童外周肝素抗凝血8ml，分离提取T细胞和血清。分别用AD血清和健康对照血清培养AD患者T细胞或健康对照T细胞，分为患者T细胞＋自身血清组、患者T细胞＋健康对照血清组、健康对照T细胞＋自身血清组、健康对照T细胞＋AD血清组。此外，分别用Rho激酶特异性抑制剂Y27632（Y27632组）、CD3／CD28单抗（CD3／CD28单抗组）、Y27632＋CD3／CD28单抗（Y27632＋CD3／CD28单抗组）处理AD患者T细胞，自身血清培养AD患者T细胞为患者T细胞组。采用Western印迹法检测各组Rho激酶活性，四甲基偶氮唑蓝比色法（Mrrr）检测T细胞增殖活性，ELISA检测白细胞介素（IL）6、IL-10水平。结果新鲜分离的AD患者外周血T细胞Rho激酶活性（2．47％±0．89％）显著高于健康对照组（0．65％±0．35％，t：2．729，P〈0．05）。AD患者T细胞在体外经10％胎牛血清培养24h后Rho激酶活性（0．70％±0．38％）较培养前显著降低（t=2．658，P〈0．05），但与培养24h后健康对照T细胞（0．63％±0．32％）相比，差异无统计学意义（t=1．010，P〉0．05）。与健康对照血清培养T细胞相比，AD血清培养T细胞会增加Rho激酶活性（F=8．22，P〈0．001），患者T细胞＋自身血清培养24h后Rho激酶活性（2．41％±0．87％）明显高于患者T细胞＋健康对照血清组（0．76％±0．41％），健康对照T细胞＋AD血清组（2．17％±0．85％）显著高于健康对照T细胞＋自身血清组（0．64％±0．33％），差异均有统计学意义（P〈0．05）。Y27632可显著抑制AD患者T细胞的增殖和IL-6的分泌（F=18．68、22．95，P〈0．001），Y27632组T细胞增殖率、IL-6的表达均显著低于患者T细胞组（均P〈0．05），且Y27632＋CD3／CD28单抗组也显著低于CD3／CD28单抗组（均P〈0．05），而Y27632对AD患者T细胞IL-10分泌无显著影响。结论AD患者T淋巴细胞存在Rho激酶信号活化异常，提示Rho激酶信号异常在AD发病过程中可能发挥着一定的作用。

输血相关急性肺损伤大鼠肺组织血管生成素-2mRNA及蛋白表达

输血相关性急性肺损伤（TRALI）是指输入血液制品后6h内以急性非心源性肺水肿和低氧血症为主要表现的临床综合征[1].血管生成素（Ang）被认为可能具有前炎性介质的作用[2].我们通过“二次打击法”[3]建立TRALI大鼠模型,观察Ang-2在TRALI肺组织中表达.一、材料与方法1.实验动物：6 ～7周龄的雄性SD大鼠55只,体质量（235 ±25）g.

微小核糖核酸-146a对寻常型银屑病患者CD4^＋T细胞调控作用研究

目的研究微小核糖核酸-146a（miRNA-146a）对寻常型银屑病患者外周血CD4^＋T淋巴细胞的调控，并探讨miRNA-146a在寻常型银屑病发病中的作用。方法收集寻常型银屑病患者30例和正常对照20例。采用实时定量PCR检测外周血CD4^＋T淋巴细胞miRNA-146a表达水平；免疫磁珠法分选外周血CD4^＋T淋巴细胞，将分离的细胞分为对照组、miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组，进行细胞培养，流式细胞术检测Th1和Th2数量；蛋白免疫印迹法和实时定量PCR分别检测IFN-1受体α（IFN-γRα）、T细胞表达T盒（T—bet）、鸟嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列结合蛋白-3（GATA-3）蛋白和mRNA的表达；酶联免疫吸附试验检测血浆和体外细胞培养上清液IFN-γ、白细胞介素（IL）-4表达水平。结果寻常型银屑病患者外周血CD4^＋T淋巴细胞miRNA-146a与血浆IFN-1表达较正常对照组升高[（2．43±0．94）vs（1．05±0．23），（27．69±7．64）ng／L vs（9．75±2．81）ng／L]，差异均有统计学意义（t值分别为6．651和4．237，P均〈0．01），且miRNA-146a的表达与血清IFN-γ呈正相关（r=0．837，P〈0．01）。体外CD4^＋T淋巴细胞培养结果显示，与对照组比较，miRNA-146a组Th1数量、T-bet蛋白和mRNA表达、培养液上清IFN-γ水平显著增加，IFN-γRα蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；Th2数量、GATA-3蛋白、GATA-3和IFN-1Rd的mRNA表达及培养液上清IL4水平无明显改变（P均〉0．05）；miRNA-146a抑制物可有效地阻断miRNA-146a对Th1细胞的调控作用。结论miRNA-146a通过影响Th1细胞的分化和功能参与对寻常型银屑病患者外周血CD4^＋T淋巴细胞的调控，在寻常型银屑病发病过程中可能发挥着一定的作用。