中国湖北汉族重症肌无力与HLA-Ⅱ类等位基因的关联

目的和方法：探讨中国湖北汉族重症肌无力（ＭＧ）患者与ＨＬＡ－Ⅱ类等位基因的关联。利用ＰＣＲ／ＳＳＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对湖北地区９１例ＭＧ患者进行ＨＬＡ－Ⅱ类（ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＢ１和ＤＰＢ１）基因型别分析，并与１６８例正常个体比较。结果：患者组（１）：ＨＬＡ－ＤＲＢ１０９０１、ＤＱＢ１０３０３和ＤＰＢ１０５０１等位基因频率明显高于对照组，ＲＲ值分别为４１２、３０４和３０１，Ｐ＜０．０１；（２）ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因频率明显低于对照组，ＲＲ值为０１３，Ｐ＜０．０５。结论：中国湖北汉族群体中ＭＧ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１０２０２、等位基因正关联，而与ＨＬＡ－ＤＰＢ１０２０２等位基因呈负关联，与白种人群相比，这种关联对中国湖北汉族ＭＧ病人来说是特有的。

髓细胞白血病患者单核细胞抗原提呈能力及HLA—Ⅱ类抗原表达的改变

以与患者HLA全相同的同胞为对照组,通过测定单核细胞提呈纯蛋白衍化物引起的T细胞增殖反应等,分析急、慢性髓细胞白血病患者单核细胞抗原提呈能力的改变,结果表明此能力明显增强。

湖北汉族人群对乙肝疫苗免疫应答能力与HLA-DRB1等位基因相关性的研究

目的分析HLA-DRB1等位基因型别与个体乙肝疫苗免疫应答水平的相关性。方法对37名湖北汉族健康自愿者进行HBV血源型疫苗标准全程接种,共3次(0,1,6月),末次接种后8周用酶免疫法(EIA)检测血清抗-HBs抗体水平(S/N≥2.1为应答者,S/N<2.1为无应答者);同时,对全部受试者进行HLA-DRB1基因分型。结果37名个体中无应答者7名(19%),应答者30名(81%),无应答与HLA-DRB*1001等位基因具有显著相关性,RR=21.75,X2=5.55,P<0.05。结论在湖北汉族人群中。

HLA-DRB1多态性对LCL TNF分泌能力的影响

通过对２７个已确定ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型别的ＬＣＬ进行ＴＮＦ生物活性的检测，结果发现：ＴＮＦ的表达水平与特定的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因型别关联，携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体，其ＬＣＬ经ＬＰＳ刺激后，ＴＮＦ生物活性水平比不携带ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ的个体低（Ｐ＜０．０１），且以ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０７０Ｘ纯合子细胞表达量最低，杂合子次之。提示：ＨＬＡ－ＤＲＢ１遗传多态性参与调控ＬＣＬ的ＴＮＦ表达水平，影响ＴＮＦ的产生可能是ＨＬＡ复合体发挥免疫调节的重要因素之一。

先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能测定

目的:测定先兆子痫患者母、脐血NK细胞增殖能力及杀伤功能,探讨先兆子痫的病因。方法:采用MTT法和51Cr释放法分别对先兆子痫患者(n=18)和正常晚孕妇女(n=18)的母血、脐血NK细胞进行细胞增殖能力和杀伤功能测定,同时测量NK细胞含量,并以NK-92细胞作为阳性对照。结果:先兆子痫患者和正常晚孕妇女脐血NK细胞数均高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞增殖能力高于正常晚孕组(P<0.05);2组中脐血NK细胞增殖能力高于母血(P<0.05);先兆子痫患者NK细胞杀伤能力高于正常晚孕组(P<0.05)。结论:先兆子痫患者体内NK细胞数量及功能均表现增强状态,且脐血明显高于母血,从而在妊娠过程中影响母胎免疫耐受。

家族性重症肌无力患者的临床及遗传学研究

目的研究家族性重症肌无力（ＭＧ）患者的临床和免疫学特征与非家族性患者的异同，并分析家系患者的遗传学特性，试图解释家族发病的机制。方法对诊治１１２例家族性重症肌无力的临床特征、免疫学特征及ＨＬＡ－Ⅱ、Ⅲ类抗原基因分型进行了研究及家系分析。结果本组患者的临床及免疫学特征与散发性病例基本相同，其遗传方式基本符合Ｍｅｎｄｅｌ常染色体遗传，可能为显型或隐性遗传，其中２个家系呈典型显型遗传。ＨＬＡ基因分型发现补体Ｃ４Ａ＊４、补体型Ｓ４２及ＤＲＢ１等位基因中的０９０１和１３０１两对等位基因与ＭＧ相关。结论遗传缺陷与环境因素相互作用导致了重症肌无力。

重症肌无力患者HLA－DRB_1等位基因分析

作者应用ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对３４例重症肌无力（ＭＧ）患者和８６名健康汉人ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因进行分析、研究，结果发现，ＭＧ病人组ＭＲＢ１区域内０９０１、１３０１两对等位基因的频率明显高于对照组（ＲＲ分别为１６．９４４和５．５１２，Ｐ均＜０．０１）。其中８例伴有胸腺瘤的ＭＧ患者除０９０１、１３０１两对等位基因频率增高外，０４０１基因频率亦明显高于正常对照组（ＲＲ分别为３９．５０３、４．９８０和４．０００．Ｐ均＜０．０１）。作者认为，ＭＧ发病可能与ＨＬＡ－ＤＲＢ１区域内０９０１、１３０１和０４０１三对等住基因相关联。

冷冻对人PBMC分泌细胞因子能力的影响

外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)具有分泌多种细胞因子的能力,其分泌量的高低受诸多因素影响。近年来,有关研究超低温冷冻对人 PBMC 细胞因子分泌活性影响的报道相继出现。研究表现,在离体条件下,冷冻使人 PBMC 中的低温敏感型抑制性免疫细胞失活,导致多种细胞因子分泌能力显著增强,本文就冷冻对人 PBMC 分泌 IL-1、IL-2、IL-6和 IFN-γ影响的研究进展作一综述。

u-PAR反义核酸载体对高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系侵袭能力的抑制效应

目的 :观察u PAR反义核酸载体对高侵袭力PC 3M亚系侵袭能力的抑制效应。方法 :利用单层细胞侵袭和软琼脂克隆形成实验 ,对比观察u PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力的影响 ;应用RT PCR和明胶酶谱法 ,分析u PAR反义核酸对高侵袭亚系MMP 9活性的影响 ,并且观察u PAR反义核酸载体转染前后的细胞亚系在裸鼠体内成瘤率及转移情况。结果 :转染u PAR反义核酸的高侵袭亚系体外侵袭能力和非贴壁依赖性生长能力均明显降低 ,抑制率分别为 79%和6 0 % ;u PAR反义核酸虽不影响高侵袭亚系MMP 9mRNA的转录 ,但对MMP 9酶原的激活有抑制作用 ;且转染u PAR反义核酸载体亚系的体内成瘤率和移植瘤的生长明显受到抑制 ,与对照组之间差异具有极显著性 (P <0 .0 1)。结论 :u PAR反义核酸对高侵袭亚系体外侵袭能力有较强抑制作用 ,并可显著抑制高侵袭亚系的体内生长能力。

转染肿瘤坏死因子α及其突变体基因对H22肿瘤细胞体内致瘤能力的影响

目的 :比较转染野生型TNF - (Wt-TNF)及多种突变体 ,包括分泌型TNF -α突变体 (S -TNFm)、跨膜型TNF -α突变体 (TM -TNFm)基因后 ,H2 2细胞体内致瘤能力 ,并探讨其可能的机制。方法 :将表达TNF -α及其突变体的H2 2细胞分别与未转染基因的H2 2细胞以不同比例混合 ,2 .5× 10 5(10 0 μL)接种于小鼠体内 ,观察肿瘤的生长情况 ;并用免疫组化检测肿瘤局部淋巴细胞浸润和肿瘤细胞表达Fas和CD44V。结果 :转染TNF -α及其突变体基因的肿瘤细胞的致瘤能力均明显减弱 (P <0 .0 1) ;除二型TNF对瘤细胞的胞毒效应外 ,TM -TNFm 可诱导肿瘤细胞表达死亡受体Fas,而S -TNFm 则可明显促进肿瘤灶局部淋巴细胞的浸润 (P <0 0 1)。此外 ,注射H2 2 /S -TNFm细胞 ,小鼠出现一过性体重下降。结论 :转染TM -TNFm 和S -TNFm 基因肿瘤细胞的致瘤能力明显降低 ,其原因除与二者胞毒效应有关外 ,前者可能通过Fas途径导致瘤细胞凋亡 。

分子免疫学研究进展概述

分子免疫学研究进展概述同济医科大学免疫学教研室（４３００３０）龚非力生物医学的三大支柱学科是神经生物学、分子生物学和免疫学。现代免疫学的特点是在分子水平研究免疫学现象，称为分子免疫学。本文仅提纲式地简介分子免疫学涉及的主要领域，以便有助于读者了解有关...

记忆中的杨贵贞教授

杨贵贞教授是我十分敬重的前辈和老师。与杨教授交往20余年，留下难以磨灭的记忆。 1989年末，中国免疫学会在成都成立并举行第一届学术大会，彼时我回国不久，得以结识杨贵贞教授。她在大会做学术报告的风采，会后的亲切交谈，以及对我本人的指教和鼓励，点点滴滴，记忆犹新。

湖北汉族人群对乙肝疫苗免疫应答的水平与HLA-I类分子多态性的相关研究

目的：探讨人群对乙肝疫苗免疫应答与ＨＬＡ遗传多态性的相关性。方法：对５２名湖北汉族健康自愿者进行ＨＢＶ血源疫苗标准全程接种，共３次（第０、１、６月），末次接种后８ｗ用酶免疫法（ＥＩＡ）检测血清抗ＨＢｓ抗体水平：Ｓ／Ｎ≥２１为应答者；Ｓ／Ｎ＜２１为无应答者。同时对受试者进行ＨＬＡＩ类抗原多态性检测。结果：应答者４２人（８１０％），无应答者１０人（１９０％）；无应答者与ＨＬＡＢ３９具有显著相关性，ＲＲ＝１７５，χ２＝５２２，Ｐ＜００５，而与ＨＬＡＢ６２呈负相关，χ２＝６４１，Ｐ＜００５。结论：在湖北汉族人群中，ＨＬＡＢ３９表型阳性个体对乙肝疫苗免疫应答水平明显低于其他个体，而ＨＬＡＢ６２表型阳性个体明显高于其他个体。

近交系海南五指山猪SLA经典I类和II类分子序列分析

为筛选适合我国异种移植研究的猪种提供参考依据 ,采集近交系海南五指山猪种全血标本 6例 ,利用RT PCR扩增得到cDNA产物 ,纯化、克隆、测序得到SLA经典I类P1、P14座位和II类DQA、DQB、DRA、DRB座位基因序列共 6个。与Genbank中相关序列进行比较分析发现 :所得序列是SLAI类和II类基因的新等位基因。在中国非协调性猪 人异种移植中 ,海南五指山猪种在与人类MHC遗传基因水平相似性方面有一定优势 。

一种新的HLA─Ⅱ类基因分型方法——PCR／SSP技术的建立

ＰＣＲ／ＳＳＰ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒ，序列特异性引物）是一种新的基因多态性分析技术，可用于ＨＬＡ复合体及其他具有多态性特点的基因分型。我室于１９９３年建立这种方法，并对正常人、重症肌无力患者、全身性红斑狼疮患者、骨髓移植供／受者进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１基因型别分析。与其它ＨＬＡ基因分型方法相比，ＰＣＲ／ＳＳＰ具有简便、快速、准确及重复性好等特点。本文介绍ＰＣＲ／ＳＳＰ技术的原理、方法、特点以及常见问题的处理。

采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型

目的 建立序列特异性引物 聚合酶链方法 (PCR SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B2 7(Humanleucocyteanti gen B2 7,HLA B2 7)阳性强直性脊柱炎患者的HLA B2 7亚型组成。方法 盐析法提取 10 0例HLA B2 7阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA ,采用PCR SSP技术分别进行HLA B位点基因型检测和HLA B2 7基因亚型分析。结果 10 0例标本PCR SSP扩增均获成功 ,历时 3h。共检出 4种亚型 :HLA B 2 70 4、HLA B 2 711、HLA B 2 715、HLA B 2 72 2。其中HLA B 2 70 4纯合子 2 5例、HLA B 2 70 4杂合子 63例 ;HLA B 2 711杂合子 5例 ;HLA B 2 715杂合子 6例 ;HLA B 2 72 2杂合子 1例。四种亚型所占构成比分别为 90 4%、4%、4 8%和 0 .8%。结论 PCR SSP方法进行HLA B2 7亚型分析 ,快速、经济、简单 ;HLA B 2 70 4是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA B2 7基因主要亚型。

PKA对跨膜型和分泌型TNF-α胞毒效应的影响

目的 :研究PKA对跨膜型TNF α(mTNF α)和分泌型TNF α(TNF α)杀瘤效应的影响。方法 :用TNF生物活性检测方法在体外观察PKA激活剂和抑制剂对二型TNF α杀伤不同肿瘤细胞的影响。结果 :PKA激活剂Forskolin(10 μmol L)和抑制剂H8(15 μmol L)可分别增强和抑制sTNF α对其敏感靶细胞的胞毒活性 ,对其余 4株耐受靶细胞却无逆转作用 ,而且对mTNF α的胞毒效应无任何影响。此外 ,PKA活性增强 ,可使sTNF α介导靶细胞的死亡方式发生改变 ,即坏死比例减少 ,凋亡比例增加。结论 :PKA仅参与sTNF α胞毒作用的信号传导 ,与mTNF α无关 ;且与sTNF

小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建

目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。

小鼠可溶性CD83对树突状细胞表达共刺激分子和共刺激活性的影响

目的:研究可溶性小鼠CD83(mCD83)对树突状细胞(DC)表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法:克隆mCD83基因,构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg,并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELISA、Western blot和RT-PCR技术检测mCD83-hIg融合基因在COS-7细胞中的表达。用mCD83-hIg处理小鼠DC细胞系(DC2.4)采用流式细胞术检测DC细胞周期、细胞凋亡和共刺激分子CD80、CD86的表达影响;采用混合白细胞培养试验,检测mCD83-hIg对DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的影响。结果:酶切和序列测定鉴定显示构建的真核表达载体完全正确;mCD83-hIg对DC2.4细胞周期和细胞凋亡无影响,但可下调DC2.4表面共刺激分子CD80和CD86的表达;mCD83-hIg处理过的DC2.4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的能力显著下降。结论:mCD83-hIg可抑制DC表达共刺激分子并下调DC共刺激活性,从而抑制同种异基因T细胞增殖和产生细胞因子。

可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化

目的 :可溶性HLA A2 抗原肽复合物的体外折叠复性与生物素化。方法 :原核高效表达的HLAH链及 β2m,在抗原肽 (EB病毒的膜潜伏蛋白LMP2A的NH2 CLGGLLTMV COOH残基 )的存在下 ,通过稀释复性折叠成HLA A2 抗原肽复合物 ,并在BirA酶的作用下进行生物素化 ,使生物素结合到HLA A2 抗原肽复合物中的H链C端。利用特异性抗体 (mAbW6 / 32和兔抗人 β2m抗体 )及链霉亲合素进行ELISA和Westernblot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 :折叠复合物中 ,主要含有HLAH链聚合体、HLA A2 肽复合物单体及 β2m3种成分 ,其中H链聚合体与HLA A2单体可生物素化。结论 :成功地获得生物素化的HLA A2 抗原肽复合物单体 ,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础 ,也为过程复杂的HLA