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表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒的构建与鉴定
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作者 史家宝 蒙靓 +4 位作者 肖培宇 范峻豪 安同庆 王海伟 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期140-146,共7页
为构建表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒(SVA),本研究在感染性cDNA克隆p SVA-I212V/S460L的基础上,采用重叠延伸PCR扩增Strep-tag II并采用无缝克隆法将其插入SVA VP1基因C端,构建感染性cDNA克隆,命名为p SVA-Strep,并采用双酶切和测... 为构建表达Strep-tag II的重组塞内卡病毒(SVA),本研究在感染性cDNA克隆p SVA-I212V/S460L的基础上,采用重叠延伸PCR扩增Strep-tag II并采用无缝克隆法将其插入SVA VP1基因C端,构建感染性cDNA克隆,命名为p SVA-Strep,并采用双酶切和测序鉴定正确后,将p SVA-Strep转染BHK-21细胞拯救重组病毒,收集病变细胞上清,并将含有病毒的细胞上清和野生型SVA(SVA-WT)分别感染BHK-21细胞,以未感染病毒的BHK-21细胞作为阴性对照,感染后24 h分别以鼠源SVA VP2蛋白单克隆抗体(MAb)5D10(1∶1000)、鼠源Strep-tag II MAb(1∶2000)作为一抗,以FITC标记的山羊抗小鼠Ig G(1∶2000)为二抗,采用间接免疫荧光试验(IFA)对重组病毒鉴定。IFA结果显示,以鼠源SVA VP2蛋白MAb 5D10为一抗,SVA-WT和重组病毒感染的细胞均出现绿色荧光,以Strep-tag II MAb作为一抗时,仅有重组病毒感染的细胞出现绿色荧光,经SVA-WT感染的BHK-21细胞及阴性对照细胞均无绿色荧光,表明拯救了Strep-tag II标记的重组病毒,并将其命名为r SVA-Strep。将r SVA-Strep在BHK-21细胞中连续传10代,每隔2代采用引物VP1-F/R经PCR鉴定并对第10代重组病毒的VP1基因测序以鉴定r SVA-Strep的遗传稳定性。结果显示,每隔两代的重组病毒经PCR扩增后均出现约780 bp的目的条带,第10代重组病毒扩增的VP1基因测序结果显示Strep-tag II基因仍在重组病毒中,且无基因突变,表明r SVA-Strep的遗传稳定性较强;将SVA-WT和r SVA-Strep分别以MOI 0.01感染BHK-21细胞,在感染后4 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h和72 h收获病毒测定病毒滴度并绘制生长曲线,结果显示在病毒感染36 h内r SVA-Strep和SVA-WT生长动力学基本一致,表明Strep-tag II的引入在病毒感染36 h内对SVA的复制基本无影响。采用0.2%甲醛充分灭活r SVA-Strep,并利用Strep-TactinRXT Purification纯化试剂盒纯化该灭活病毒,将r SVA-Strep灭活病毒上清加至Strep-Tactin亲和层析柱,分别用不同体积洗脱缓冲液依次洗脱病毒并通过western blot鉴定病毒的纯化效果。对纯化过程中不同洗脱液洗脱病毒的western blot结果显示,不同体积的洗脱液中E1、E2和E3均出现VP0和VP2两条带,且E1和E2的条带最明显,表明洗脱缓冲液的最佳洗脱体积约为2.2 CV;以上结果表明r SVA-Strep可通过Strep-Tactin亲和层析柱一步法纯化。本研究在SVA中插入Strep-tag II标签,为SVA灭活疫苗的快速纯化提供技术手段,也为其他病原的快速纯化方法的建立提供参考。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 Strep-tag II 感染性克隆 抗原纯化
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2014年~2019年PRRSV主要流行毒株在我国的变化 被引量:42
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作者 张洪亮 张文立 +14 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 相丽润 冷超粮 李真 刘春晓 汤艳东 陈家锃 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期512-516,共5页
为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株n... 为了研究2014年至2019年PRRSV在我国的流行变化情况,本研究分别检测了2014年6月~2019年8月全国17个省、市和自治区及某大型养猪集团2007份和338份疑似PRRSV感染的病料。结果显示,共检出PRRSV阳性病料650份,测定了486株ORF5基因、441株nsp2基因和122株全基因组序列。遗传演化分析显示,2014年~2019年共检测到6种基因亚型的PRRSV,分别是I型PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like PRRSV、NADC34-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV和RespPRRS MLV-like PRRSV。经统计分析显示,2016年以前除检测到1株NADC30-like PRRSV外,其余全部是HP-PRRSV;2016年后HP-PRRSV检出比率逐渐降低,NADC30-like PRRSV检出比率逐渐升高,且2016年后已超过HP-PRRSV,成为我国主要的流行株。QYYZ-like PRRSV的检出数量增多,其广泛流行于我国的华南地区。其它类型的PRRSV检出比率较低,呈现散发或局部流行。此外,近年来,PRRSV的细胞嗜性已经发生明显变化,绝大多数的病毒株无法在体外分离培养。因此,我国养殖企业针对PRRSV流行株的变化应及时调整防控策略,同时加大对PRRSV生物学特性变化机制的研究。本研究对了解我国PRRSV的流行状况及防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 PRRSV NADC30-like PRRSV 主要流行毒株 细胞嗜性
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2017年我国输入性北美1-7-4分支PRRSV的基因组序列分析 被引量:10
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作者 张洪亮 张文立 +10 位作者 相丽润 刘春晓 宋帅杰 汤艳东 冷超粮 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期875-879,共5页
为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分... 为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分群中属于一个新亚群,即第7亚群。对LNWK96株进行了全基因组序列分析显示,与我国分离的PRRSV株的核苷酸同源性为82.3%~84.9%,与美国分离的1-7-4分支IA/2014/NADC34株的同源性最高为96.1%。重组分析显示LNWK96株是以1-7-4分支的病毒为母本株,ISU30和NADC30病毒株提供重组片段的重组病毒。推测该两株PRRSV极有可能是来自北美的输入性1-7-4分支PRRSV。本研究首次报道1-7-4分支的PRRSV在我国出现,该类病毒株在我国的流行趋势值得关注,其致病性及当前疫苗的保护效果需要进一步研究。 展开更多
关键词 PRRSV 1-7-4 重组 输入 分子特征
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV免疫保护效果的评价 被引量:5
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作者 张洪亮 相丽润 +13 位作者 许浒 宋帅杰 赵静 张文立 李真 汤艳东 陈家锃 冷超粮 王倩 彭金美 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期296-301,共6页
类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与... 类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已成为我国PRRSV的主要流行株,为了评价当前商品化疫苗对类NADC30 PRRSV的免疫保护效果,本研究将12头6周龄仔猪随机分为3组,免疫组和攻毒对照组各5头、空白对照组2头,免疫组肌注高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)10^(5.0)TCID_(50)/头,免疫后21 d,免疫组和攻毒对照组每头各肌注2 mL和滴鼻2 mL类NADC30 PRRSV SD53-1603株(104.0TCID_(50)/mL)。攻毒后观察各组实验猪临床症状,可见攻毒对照组所有猪均发热,持续5 d9 d,免疫组仅2头猪发热1 d2 d。检测各组实验猪体重变化,结果显示,攻毒后免疫组和攻毒对照组体重增长均显著低于空白对照组(p<0.001),但攻毒14 d以后,免疫组体重增长显著高于攻毒对照组(p<0.05)。IDEXX ELISA测定各组猪血清中PRRSV的特异性抗体,结果显示免疫后14 d可以诱导免疫组仔猪产生良好的针对PRRSV的特异性抗体。利用荧光定量PCR测定血清和组织中的病毒载量,结果显示免疫组血清和组织中的病毒载量均极显著低于对照组(p<0.0001)。对PRRSV免疫后及攻毒后各组仔猪各脏器病理学观察,结果可见攻毒对照组与免疫组相比出现明显的剖检和组织病理学变化。以上结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)对类NADC30 PRRSV可以提供一定的交叉保护,该研究为评价我国现有疫苗是否对类NADC30 PRRSV具有保护效果提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4-F112 类NADC30 PRRSV 交叉保护
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非洲猪瘟暴发前后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行变化 被引量:22
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作者 赵静 李超 +15 位作者 许浒 相丽润 汤艳东 孟凡丹 付军 龚帮俊 陈家锃 冷超粮 彭金美 王倩 周国辉 安同庆 童光志 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期349-356,共8页
为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的... 为了研究非洲猪瘟(ASF)暴发后我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行变化,本研究经PCR检测了2017年1月~2020年12月全国18个省、市和自治区1374份疑似PRRSV感染的病料样品,并对其中阳性病料样品的ORF5、nsp2基因测序并统计阳性样品的检出率,分析不同地区在ASF暴发前后PRRSV阳性检出率的变化趋势;分别利用GraphPad Prism 8.0及ORF5基因的进化树分析ASF暴发前后我国各亚型PPRSV及各地区PPRSV的流行变化趋势;根据nsp2基因推导氨基酸序列分析其缺失特征。ORF5基因和nsp2基因测序及统计分析结果显示,共检出PRRSV阳性病料样品779份(779/1374),其中ASF暴发前397份,ASF暴发后382份。ASF暴发后(2019年~2020年)我国各地PRRSV阳性检出率均有上升,华北地区PRRSV阳性检出率由60.47%上升至66.33%;东北地区由52.76%上升至53.27%;华东地区由60.93%上升至62.59%;中南地区由53.43%上升至57.50%。ASF暴发前后我国各亚型及各地区PPRSV流行变化趋势统计分析结果显示,ASF暴发后,NADC30-like PRRSV作为主要流行株,其检出率显著增长,从47.36%上升至65.97%;NADC34-like PRRSV的检出率也明显增长,从1.76%上升至5.50%;但HP-PRRSV、VR2332-like PRRSV和QYYZ-like PRRSV的检出率明显降低,分别从34.01%降至20.68%、6.80%降至3.40%、7.30%降至0.52%。可见ASF暴发后,我国大部分地区(华北、东北、华东、中南)NADC30-like PRRSV的流行趋势有所上升,但HP-PRRSV的流行趋势明显下降,并且随着ASF的流行,除中南地区外,我国各地NADC34-like PRRSV检出率明显上升。ORF5基因的遗传演化分析结果显示,ASF暴发前(2017年~2018年)检测到6种基因亚型的PRRSV(NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV、NADC34-like PRRSV、VR2332-like PRRSV、QYYZ-like PRRSV、Type I PRRSV),而ASF暴发后还检测到CH-1a like PRRSV。Nsp2氨基酸缺失特征分析结果显示,ASF暴发前后我国各亚型PRRSV Nsp2氨基酸序列特征均未发生变化。以上结果表明,ASF疫情的暴发对我国PRRSV的流行造成了较大影响,国内大部分地区PRRSV的流行加重,病毒亚型也变得更加多元化,NADC30-like PRRSV作为主要流行株在国内大部分地区的流行趋势不断升高,HP-PRRSV检出率虽有降低但仍在流行,NADC34-like PRRSV作为潜在流行株,其检出率不断上升。本研究聚焦在ASF暴发前后国内PRRSV的流行变化,对了解我国PRRSV流行现状及对PRRS的防控具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非洲猪瘟 主要流行株
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中国与美国RFLP 1-4-4 lineage1C变异株同一分支PRRSV的全基因组序列分析 被引量:11
6
作者 许浒 李超 +13 位作者 相丽润 汤艳东 赵静 龚帮俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期202-207,共6页
2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变... 2020年美国报道了高致病性的RFLP 1-4-4 lineage 1C PRRSV变异株,其对猪的致死率达到17.5%。为了分析美国1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国当前流行的PRRSV的关系,本研究对中国不同基因亚型的PRRSV与美国新发1-4-4 lineage1C PRRSV变异株进行遗传演化分析,结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株关系密切;其Nsp2推导氨基酸序列比对结果显示,中国类NADC34 PRRSV与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株在Nsp2区域存在相同的分子特征,即100个氨基酸(aa328~aa427)的连续缺失。PRRSV基因重组分析结果显示,美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株是以类NADC34 IA14737-2016株为母本毒株,并由IA/2014/NADC34和NADC30病毒株提供重组基因片段的重组病毒,而中国早期的类NADC34 PRRSV是以IA/2014/NADC34株为母本毒株的重组病毒。美国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪的致病力差异较大,而中国早期的类NADC34 PRRSV对仔猪多为中、低致病力。此外,中国HLJZD22-1812株与美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株具有类似的重组模式、相同的Nsp2缺失特征、相同的1-4-4 ORF5限制性片段长度多态性(RFLP)模式,且均属于lineage1C分支。本研究结果首次表明美国RFLP 1-4-4 lineage1C PRRSV变异株与中国类NADC34(PRRSV)属于同一亚型分支,且具有一致的分子特征,提示类NADC34 PRRSV在我国的流行及演化情况需高度关注。 展开更多
关键词 1-4-4 PRRSV变异株 类NADC34 PRRSV 100个氨基酸缺失 重组病毒
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2016~2021年我国猪伪狂犬病病毒的分子流行病学调查与分析 被引量:9
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作者 郭镇洋 赵静 +17 位作者 付军 许浒 李超 李宛生 孙琪 裴艳艳 龚帮俊 王倩 周国辉 汤艳东 冷超粮 王永杰 陈长青 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 彭金美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期122-128,155,共8页
为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登... 为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登录的PRV参考株相应基因序列的同源性;利用MEGA 7.0分别构建上述3个基因的遗传进化树,并采用MegAlign分析gB、gE和gC蛋白氨基酸序列的差异,分析其遗传演化及分子特征的变化。结果显示,共扩增出24份PRV阳性样品,阳性率约1.04%,且不同年份及不同地区均有PRV的检出。PRV gB、gE和gC基因序列的同源性及遗传进化分析结果显示,3个基因及其编码氨基酸序列均与2011年以来的PRV变异株同源性最高,且均属于基因Ⅱ型PRV变异株;氨基酸序列比对结果显示,与基因Ⅰ型PRV相比,所测PRV gB、gE和gC中均存在特征性氨基酸突变位点:gB氨基酸序列aa75~aa77连续缺失3个氨基酸(SPG),aa93~aa94连续插入2个氨基酸(DG);gE氨基酸序列在aa48和aa496各插入1个氨基酸(D);gC氨基酸序列在aa63~aa69连续插入7个氨基酸AAASTPA。此外,本研究通过比对国内外经典株以及2011年以来国内PRV gE蛋白的氨基酸序列,确定了不同亚型PRV(即指基因Ⅱ型PRV变异株和经典株)的分子特征即基因Ⅱ型PRV变异株:gE aa496为“D+”或aa496为“D-”+aa448“I”;基因Ⅱ型PRV经典株:gE为aa496“D-”+aa448“V/A”。上述结果表明,我国现阶段仍以基因Ⅱ型PRV变异株的流行为主,进一步明确了不同基因型和亚型PRV的分子特征,对了解我国PRV的流行现状及当前流行株的分子特征具有重要意义,为PRV诊断试剂的研发及PR的防控提供了参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 变异株 遗传演化 分子特征
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欧洲型PRRSV竞争ELISA抗体检测方法的建立及应用 被引量:6
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作者 许浒 相丽润 +14 位作者 张文立 汤艳东 赵静 李超 龚邦俊 李宛生 付军 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期617-623,共7页
为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA... 为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法。反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAb EU-1的最佳稀释度为1:8。EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45%时判定为阳性,PI<45%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测。利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20%,样品总阳性率为15.0%,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中。本研究在我国首次建立了PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段。 展开更多
关键词 1型猪繁殖与呼吸综合征病毒 竞争ELISA 流行病学调查
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量:1
9
作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过与美国L1C变异株比较,发现二者流行特征有诸多相似性,鉴于L1C变异株对美国养猪业造成严重影响,加大对L1A变异株的监测力度至关重要。本研究聚焦新发类NADC34 PRRSV的流行及变化特征,对了解我国PRRSV流行现状以及对PRRS的防控均具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 L1A PRRSV变异株 类NADC30 PRRSV 类NADC34 PRRSV HP-PRRSV 重组 出现与流行
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猪繁殖与呼吸综合征病毒凝胶层析纯化方法的建立与初步应用
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作者 孙悦 王尚辉 +6 位作者 涂亚斌 杨勇博 王洪峰 夏大松 蔡雪辉 安同庆 孙明霞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期1-6,共6页
为了高效分离纯化并获得结构完整的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),用于PRRSV的形态学研究、动物免疫以及制备高质量疫苗,本试验在Marc-145细胞中增殖PRRSV HuN4株,经超滤浓缩后,分别采用氯化铯密度梯度离心方法和凝胶层析技术纯化PRRS... 为了高效分离纯化并获得结构完整的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),用于PRRSV的形态学研究、动物免疫以及制备高质量疫苗,本试验在Marc-145细胞中增殖PRRSV HuN4株,经超滤浓缩后,分别采用氯化铯密度梯度离心方法和凝胶层析技术纯化PRRSV。结果显示,与氯化铯密度梯度离心相比,凝胶层析纯化可以得到纯度更高、结构更完整的病毒粒子。将凝胶层析纯化得到的PRRSV免疫小鼠制备多抗,间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,多抗血清可与PRRSV发生特异性反应;酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,抗体效价可达到1∶25600以上,纯化的病毒具有良好的免疫原性。结果表明,应用凝胶层析技术可得到高纯度、结构完整的PRRSV粒子,且纯化后PRRSV能够诱导良好的免疫应答,本试验结果可为PRRSV的纯化提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 凝胶层析技术 纯化 形态学
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Evaluation of the Pathogenicity of a Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Variant in Piglets 被引量:4
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作者 WEI Tian-chao TIAN Zhi-jun +8 位作者 ZHOU Yan-jun an tong-qing JIANG Yi-feng XIAO Yan HU Shou-ping PENG Jin-mei HAO Xiao-fang ZHANG Shan-rui TONG Guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第8期1280-1291,共12页
Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic ... Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic losses to China's pig industry.To investigate the in vivo pathogenicity and immune responses of the newly emerging PRRSV,3 groups of 60-d-old conventional piglets were inoculated intranasally with a representative strain of the HP-PRRSV variant HuN4 with 3 different infection doses (3×103-3×105 TCID50).The results revealed that the virus variant caused severe disease in piglets and the significant clinical characteristics consisted of persistently high fever (41.0-41.9oC) and high morbidity and mortality (60-100%),the marked clinical signs of PRRS and severe histopathogenic damages in multiple organs.It induced rapid and intense humoral immune responses and seroconversion was detected in most infected pigs at 7 d post-infection (DPI).The virus vigorously replicated in vivo and the highest virus average titer was 9.7 log copies mL-1 serum at 7 DPI.Elevated levels of IFN-g and IL-10 cytokine production in serum in this study were also observed.Taken together,our results demonstrated that the HP-PRRSV variant HuN4 strain is highly pathogenic for piglets and suitable to be a reference strain of highly virulent PRRSV for evaluating the efficacy of the new vaccines. 展开更多
关键词 highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus PATHOGENICITY immune responses viral load
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