牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜干细胞骨向分化的影响

目的本研究目的是检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)2561超声提取物对人牙周膜干细胞(Human periodontal ligament stemcells,hPDLSCs)的增殖及其骨向分化相关蛋白表达的影响。方法标准厌氧培养环境下培养P.gingivalis。收集细菌菌落,离心,制备细菌的超声提取物,然后以不同的浓度加入hPDLSCs的培养液中。培养六天后观察hPDLSCs的增殖及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALPase)的表达。提取蛋白并用Western Blotting检测骨黏结蛋白(Osteonectin,ON)的表达。结果与对照组相比,P.gingivalis明显抑制hPDLSCs的生长(P<0.05),显著降低了hPDLSCs中ALPase的表达(P<0.05);1μg/mlP.gingivalis上调ON的表达,而100μg/mlP.gingivalis明显下调ON的表达。结论这些结果提示作为牙周炎病原菌,大量的P.gingivalis可能,至少部分通过抑制hPDLSCs的增殖及其骨向分化能力,抑制了牙周炎症所致牙周组织破坏后牙周组织的自我修复能力。

牙龈卟啉单胞菌超声提取物对hPDLSCs表达VEGF的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)超声提取物对人牙周膜干细胞(human per-iodontal ligament stem cells,hPDLSCs)表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响。方法:标准厌氧培养环境下培养Pg,收集细菌菌落,离心,制备细菌的超声提取物,然后以不同的浓度加入hPDLSCs的培养液中。培养6d,分别观察第2、4、6天时hPDLSCs的增殖情况。提取蛋白并用Western Blotting法检测VEGF和MMP-9的表达。结果:与对照组相比,第2天时,10μg/ml和100μg/mlPg轻度促进hPDLSCs的生长,第4天时,10μg/ml和100μg/mlPg则明显抑制hPDLSCs的生长(P<0.05),第6天时,3种浓度的Pg均明显抑制hPDLSCs的生长(P<0.05);1μg/ml和10μg/mlPg上调VEGF的表达,100μg/mlPg明显抑制VEGF的表达;3种浓度的Pg均上调hPDLSCs中MMP-9的表达。结论:作为牙周炎病原菌,大量的Pg可能通过抑制hPDLSCs的生长增殖,抑制局部血管重建以及加速细胞外基质的降解而降低了牙周组织的自我修复能力。

低氧对人牙周膜干细胞骨向分化影响的实验研究

目的观察体外低氧培养环境对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSC）生长、增殖及骨向分化的影响，以期为应用hPDLSC治疗牙周病提供依据。方法hPDLSC分别培养于常氧环境（氧的体积分数为20％）和低氧环境（氧的体积分数为1.5％-2％）中。在培养的第1，2，4，6天分别提取细胞总RNA和总蛋白。运用蛋白免疫印迹法和半定量反转录聚合酶链反应分析比较不同培养环境下hPDLSC中碱性磷酸酶、骨钙素、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白和骨形成蛋白2的表达。结果在培养的第1、2天低氧轻度刺激hPDLSC的增殖（低氧组4值分别为0.516和0.697，常氧组A值分别为0.418和0.617），第3天后则明显抑制hPDLSC的增殖（低氧组A值0.870，常氧组4值1.242）。在培养第5天后低氧抑制碱性磷酸酶的活性高达90％（低氧组A值0.004，常氧组A值0.049）。低氧抑制富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在蛋白水平的表达，也抑制碱性磷酸酶、骨钙素和骨形成蛋白2在mRNA水平的表达。结论低氧抑制hPDLSC的增殖并下调骨形成蛋白2的表达，继而下调其下游目的基因，如碱性磷酸酶、骨钙素和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白的表达，从而抑制了人牙周膜干细胞骨向分化。