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弓形虫GRA1蛋白单克隆抗体的制备与间接免疫荧光检测方法的建立
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作者 吉婧 朱明哲 +3 位作者 宋新宇 印春生 单虎 刘业兵 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期72-82,共11页
本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白并制备单克隆抗体,用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。以弓形虫cDNA为模板,设计引物扩增GRA1基因片段,构建原核表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达蛋白并纯化。用... 本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白并制备单克隆抗体,用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。以弓形虫cDNA为模板,设计引物扩增GRA1基因片段,构建原核表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达蛋白并纯化。用纯化后的重组蛋白作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体并鉴定。以制备的弓形虫GRA1单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗,优化反应条件建立弓形虫间接免疫荧光检测方法。结果表明:成功构建了原核表达质粒pET-30a(+)-TG-GRA1;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白GRA1为可溶性表达,分子量约为27 kDa;Western blot结果显示重组蛋白GRA1可被犬弓形虫阳性血清识别,表明GRA1有良好的反应原性。成功筛选出5株单克隆细胞株,分别命名为1-B10、2-C3、2-C9、3-C11以及6-E6,并对它们进行亚型鉴定,其中2-C3、2-C9、3-C11为IgG1,1-B10、6-E6为IgM;IFA结果显示单克隆抗体具有良好的反应原性;建立了mAb 2-C9最佳稀释浓度为0.875μg/mL、最佳孵育时间为1.5 h,FITC标记的羊抗鼠IgG最佳稀释倍数为1∶400、最佳孵育时间为1.5 h的间接免疫荧光检测方法,并对15只小鼠的肝脏组织切片进行检测,结果表明该方法可用于弓形虫动物组织切片的检测,有助于弓形虫感染的实验室诊断及弓形虫的动态分布研究。 展开更多
关键词 弓形虫 GRA1蛋白 单克隆抗体 间接免疫荧光方法
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病毒宏基因组学检测猪博卡病毒及其遗传进化分析
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作者 孙晓瑜 单虎 黄娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期50-57,共8页
为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读... 为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读数比为6.8%,未发现其他猪病相关RNA病毒。DNA样本注释到的病毒主要为猪博卡病毒(PBoV),读数比为34.5%,命名为PBoV-SDPD-2022;其余猪病相关病毒包括猪巨细胞病毒、猪乳腺腺病毒和猪细环病毒,读数比均小于1.0%。基于全基因组、NS 1基因和VP 1基因构建的系统发育进化树均显示,PBoV-SDPD-2022与参考毒株PBoV3_VIRES_HuB01_C1处于同一分支,属于PBoV G3群。与21株参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为49.6%~97.2%和38.5%~95.3%;VP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为47.9%~97.9%和34.8%~98.8%;NP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为35.2%~98.5%和26.9%~97.4%。与G3群参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白在第654位点处有1个氨基酸的缺失;VP1蛋白在第151、152位点处有2个氨基酸的插入,且包含基序YLGPF(VPl aa 18~22)和HDLAY(VP1 aa 41~45);NP1蛋白在第15、16、35、36、212位点处发生氨基酸的缺失,在第95位点处有1个氨基酸的插入。PCR检测证实样本核酸为PBoV阳性。结果表明,导致该养猪场仔猪腹泻的优势病原是G3群PBoV。本试验有助于进一步了解我国PBoV基因组序列特征,并为未来PBoV流行病学调查提供了参考依据。 展开更多
关键词 病毒宏基因组学 猪博卡病毒 遗传进化分析
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非洲猪瘟p62蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 张安之 孙卓 +2 位作者 张洪亮 单虎 杨瑞梅 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2024年第1期26-31,共6页
为了获得非洲猪瘟(african swine fever virus,ASFV)p62蛋白进行血清学诊断技术研究。根据GenBank ASFV参考序列合成CP530R基因(编码p62蛋白),插入pET-32a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE及Western blot鉴定。采用N... 为了获得非洲猪瘟(african swine fever virus,ASFV)p62蛋白进行血清学诊断技术研究。根据GenBank ASFV参考序列合成CP530R基因(编码p62蛋白),插入pET-32a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE及Western blot鉴定。采用Ni柱纯化p62蛋白,然后免疫Balb/c雌鼠,制备鼠抗ASFV p62蛋白的多克隆抗体,ELISA检测多抗效价。结果表明,成功构建了pET32a-p62质粒,表达蛋白为56.1 kDa,以包涵体表达为主。Western blot显示该蛋白能与ASFV阳性血清结合。Ni柱纯化获得p62蛋白浓度为2.9 mg/mL。用该蛋白免疫小鼠,三免后抗体效价达1∶256000。表明表达蛋白具有良好抗原性,制备的p62多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究p62蛋白的特性和诊断奠定基础。 展开更多
关键词 ASFV 62蛋白 大肠杆菌表达 多克隆抗体
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Metabolic disorders in prediabetes:From mechanisms to therapeutic management 被引量:1
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作者 Wen-Xin Ping shan hu +1 位作者 Jing-Qian Su Song-Ying Ouyang 《World Journal of Diabetes》 SCIE 2024年第3期361-377,共17页
Diabetes,one of the world's top ten diseases,is known for its high mortality and complication rates and low cure rate.Prediabetes precedes the onset of diabetes,during which effective treatment can reduce diabetes... Diabetes,one of the world's top ten diseases,is known for its high mortality and complication rates and low cure rate.Prediabetes precedes the onset of diabetes,during which effective treatment can reduce diabetes risk.Prediabetes risk factors include high-calorie and high-fat diets,sedentary lifestyles,and stress.Consequences may include considerable damage to vital organs,including the retina,liver,and kidneys.Interventions for treating prediabetes include a healthy lifestyle diet and pharmacological treatments.However,while these options are effective in the short term,they may fail due to the difficulty of long-term implementation.Medications may also be used to treat prediabetes.This review examines prediabetic treatments,particularly metformin,glucagon-like peptide-1 receptor agonists,sodium glucose cotransporter 2 inhibitors,vitamin D,and herbal medicines.Given the remarkable impact of prediabetes on the progression of diabetes mellitus,it is crucial to intervene promptly and effectively to regulate prediabetes.However,the current body of research on prediabetes is limited,and there is considerable confusion surrounding clinically relevant medications.This paper aims to provide a comprehensive summary of the pathogenesis of prediabetes mellitus and its associated therapeutic drugs.The ultimate goal is to facilitate the clinical utilization of medications and achieve efficient and timely control of diabetes mellitus. 展开更多
关键词 PREDIABETES Glucagon-like peptide agonists Sodium–glucose cotransporter 2 inhibitors Vitamin D Chinese herbal medicines
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鸭短喙与侏儒综合征病毒分离与鉴定
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作者 孙雨点 宋紫玥 +3 位作者 张洪亮 秦志华 单虎 杨瑞梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3623-3630,共8页
山东某樱桃谷鸭场出现以患鸭短喙、长舌、生长不良为主要特征的疾病,疑似感染鸭短喙与侏儒综合征病毒(duckling short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并检测其对樱桃谷鸭的致病性。首先,通过临床... 山东某樱桃谷鸭场出现以患鸭短喙、长舌、生长不良为主要特征的疾病,疑似感染鸭短喙与侏儒综合征病毒(duckling short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)。本研究旨在分离鉴定该病毒,并检测其对樱桃谷鸭的致病性。首先,通过临床症状、病理变化、病料PCR检测,确定感染鸭短喙侏儒综合征病毒。其次,用SPF鸭胚分离培养病毒后,对病毒进行电镜观察和同源性与系统发育树分析,再检测病毒尿囊液EID_(50)。最后,动物回归试验中,给2日龄樱桃谷鸭口服病毒感染鸭胚尿囊液,观察致病特点,以及用PCR和间接免疫荧光试验检测病毒分布。结果显示:SPF鸭胚接毒后96~120 h鸭胚死亡,电镜观察病毒粒子大小为20~50 nm,尿囊液EID_(50)为10^(-4.85)·0.2 mL^(-1)。尿囊液PCR检测SBDSV为阳性,证明从鸭胚中成功分离培养SBDSV。该病例主要临床表现短喙和体重降低,感染后2周内持续排毒,VP 2片段与鸭短喙侏儒综合征病毒序列的相似性为99.8%,表明是由鸭短喙与侏儒综合征病毒感染引起,命名为SBDS-SD株。动物回归试验中,出现短喙、腹泻、体重显著降低等与自然病例相似的临床症状。本试验成功分离到一株鸭短喙与侏儒综合征病毒,并验证其对樱桃谷鸭具有致病性,为该病的进一步研究提供基础。 展开更多
关键词 鸭短喙与侏儒综合征 致病性试验 病毒增殖培养 电镜观察
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姜黄素对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的影响 被引量:13
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作者 张明 唐晶晶 +5 位作者 谢颖颖 张洁 张秋红 杨侠 单虎 李雅莉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期361-365,共5页
目的探索姜黄素对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的调节作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组、姜黄素干预组和溶剂对照组,采用香烟烟熏联合气管内注射脂多... 目的探索姜黄素对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的调节作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组、姜黄素干预组和溶剂对照组,采用香烟烟熏联合气管内注射脂多糖的方法建立COPD大鼠模型,并按照分组情况对大鼠进行干预。干预结束后计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量,HE染色观察肺组织病理学改变,透射电子显微镜观察肺泡上皮细胞内质网形态,免疫组织化学法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在肺泡上皮细胞中的表达水平。结果与正常对照组比较,COPD模型组大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量均显著升高(P<0.05);姜黄素干预组大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞数量较COPD模型组降低(P<0.05)。光镜和透射电子显微镜观察显示COPD模型组大鼠肺泡腔扩张、肺泡上皮细胞内质网肿胀,姜黄素干预可减轻肺泡上皮细胞及内质网损伤。与正常对照组相比,GRP78在COPD大鼠肺泡上皮细胞中表达水平显著升高(P<0.05);姜黄素干预可显著下调GRP78在COPD大鼠肺泡上皮细胞中表达水平(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制肺泡上皮细胞内质网应激而发挥对COPD的保护作用。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 姜黄素 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78
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貂源肺炎克雷伯菌耐药性、毒力及免疫原性分析 被引量:8
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作者 张传美 谢士杰 +4 位作者 孙晓琦 郭玉广 王丽红 单虎 杨海燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期29-34,共6页
为分析山东地区貂源肺炎克雷伯菌(KPN)分离株的血清型、耐药性、毒力和免疫原性,本研究从临床患有肺炎症状的水貂肺脏组织中采用常规分离培养鉴定方法、16S rRNA PCR方法和分型PCR方法,分离鉴定出10株K2型KPN(QD/Kp1~QD/Kp10),采用109 c... 为分析山东地区貂源肺炎克雷伯菌(KPN)分离株的血清型、耐药性、毒力和免疫原性,本研究从临床患有肺炎症状的水貂肺脏组织中采用常规分离培养鉴定方法、16S rRNA PCR方法和分型PCR方法,分离鉴定出10株K2型KPN(QD/Kp1~QD/Kp10),采用109 cfu/mL的QD/Kp8腹腔注射健康易感水貂,进行动物回归试验,复制出与现地患貂症状等相似的肺炎病例,表明该克雷伯菌分离株为水貂肺炎的病原。进一步选用临床常用的氨基糖苷类药物、β-内酰胺类药物、喹诺酮类三大类药物对分离菌进行药敏试验,结果显示10株分离菌仅对头孢他啶高度敏感,对其他药物存在不同程度的耐药性。采用PCR方法进行耐药基因检测,结果显示,aac(3')-II、TEM、SHV、CTXM-8耐药基因检出率最高为100%,其次为QnrS为70%,aac(6')-Ib与aac(2)为60%。将10株分离菌液调至浓度为109 cfu/mL后0.2 mL/只腹腔注射小鼠,研究其致病性,结果显示感染组小鼠均呈急性发病,死亡率为80%以上。12种毒力基因PCR检测结果显示,10株分离菌均携带不同数量的毒力基因,uge、ureA、wabG和iucB基因检出率为100%。选取致病力最强的分离菌株QD/Kp8测定其对小鼠的LD50为10-8.375/0.1 mL。将分离菌株QD/Kp8制备成灭活疫苗免疫5只8周龄水貂,进行免疫保护试验,结果显示其免疫保护率达100%(5/5)。上述结果表明10株貂源KPN对临床常用药物产生了一定的耐药性,且毒力较强;用该菌制备成的灭活疫苗,对水貂免疫保护力良好,可作为候选疫苗株做进一步研究。本研究为山东地区水貂KPN病临床用药和疫苗研制提供了参考依据。 展开更多
关键词 水貂 肺炎克雷伯菌 鉴定 耐药性 毒力 免疫原性
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N-乙酰半胱氨酸对香烟烟雾提取物诱导的气道上皮细胞线粒体过氧化损伤的保护作用 被引量:3
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作者 张明 张莉 +5 位作者 杨侠 单虎 张秋红 张红妮 张洁 李雅莉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期837-842,共6页
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)诱导的气道上皮细胞线粒体损伤的保护作用及机制。方法体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,分为正常对照组、7.5%(75 mL/L)CSE组、7.5%CSE+NA... 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract, CSE)诱导的气道上皮细胞线粒体损伤的保护作用及机制。方法体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,分为正常对照组、7.5%(75 mL/L)CSE组、7.5%CSE+NAC组,干预24 h后应用MTT法检测细胞活性,荧光显微镜下观察线粒体内活性氧(reactive oxygen species, ROS)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)强度,流式细胞仪检测MMP水平,Western blotting检测细胞内Sirt3和锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase, MnSOD)的蛋白表达,比色法测定细胞内MnSOD活性。结果 7.5%CSE+NAC组的气道上皮细胞活性较7.5%CSE组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜和流式细胞仪检测结果显示,7.5%CSE+NAC组的气道上皮细胞MMP水平显著高于7.5%CSE组(P<0.05)。与7.5%CSE组相比,7.5%CSE+NAC组气道上皮细胞线粒体内ROS显著降低,Sirt3和MnSOD蛋白表达以及MnSOD活性均显著增加(P<0.05)。结论 NAC通过调控Sirt3-MnSOD信号通路减轻CSE所致的气道上皮细胞线粒体过氧化损伤,有助于阐明NAC对慢性阻塞性肺疾病的作用机制。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 气道上皮细胞 线粒体 Sirt3 锰超氧化物歧化酶(MnSOD) 慢性阻塞性肺疾病
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内质网应激介导心肌细胞线粒体损伤参与肺心病发病机制研究 被引量:3
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作者 单虎 张蓉 +5 位作者 张秋红 杨侠 高锦 张洁 李雅莉 张明 《广西医科大学学报》 CAS 2022年第7期1061-1066,共6页
目的:探讨内质网应激(ERS)在慢性缺氧诱导的心肌细胞线粒体损伤中的作用及机制。方法:将8周龄雄性Wistar大鼠随机分为缺氧组、干预组和对照组,缺氧组和干预组大鼠在常压间歇缺氧环境中喂养,干预组同时给予ERS抑制剂4-PBA灌胃处理,对照... 目的:探讨内质网应激(ERS)在慢性缺氧诱导的心肌细胞线粒体损伤中的作用及机制。方法:将8周龄雄性Wistar大鼠随机分为缺氧组、干预组和对照组,缺氧组和干预组大鼠在常压间歇缺氧环境中喂养,干预组同时给予ERS抑制剂4-PBA灌胃处理,对照组大鼠在空气中喂养。21 d后处死大鼠,游离心脏各组分并称重,取右心室组织制作超薄切片于透射电镜下观察线粒体形态。提取右心室组织线粒体用于JC-1荧光探针检测线粒体膜电位和比色法测定琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素C氧化酶(COX)活性。采用Western blotting方法检测右心室心肌组织中ERS标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达水平。结果:缺氧组大鼠出现右心室肥大表现,电镜下观察到心肌细胞线粒体出现肿胀、嵴排列紊乱和膜完整性破坏等异常,同时,线粒体膜电位、COX及SDH活性均降低,CHOP及GRP78表达水平上调(P<0.05)。与缺氧组相比,干预组大鼠CHOP及GRP78表达水平下调,线粒体膜电位、COX及SDH活性均升高,线粒体结构异常得到部分缓解,右心室肥大有所改善(P<0.05)。结论:心肌细胞ERS介导的线粒体损伤参与慢性肺源性心脏病的发病过程,以ERS为靶点的心脏保护治疗可能成为慢性肺源性心脏病的潜在治疗策略。 展开更多
关键词 内质网应激 线粒体 心肌细胞 肺心病
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内质网应激参与调控肺心病心肌细胞线粒体途径凋亡 被引量:2
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作者 单虎 张蓉 +5 位作者 张秋红 杨侠 陈海娟 张洁 李雅莉 张明 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第7期822-827,共6页
目的探讨内质网应激在慢性肺源性心脏病心肌细胞线粒体凋亡途径中的作用及机制。方法24只8周龄Wistar大鼠随机分为缺氧组、干预组和对照组,每组8只。缺氧组大鼠采用常压间歇缺氧法建立肺心病模型,每天给予生理盐水灌胃;干预组大鼠同样... 目的探讨内质网应激在慢性肺源性心脏病心肌细胞线粒体凋亡途径中的作用及机制。方法24只8周龄Wistar大鼠随机分为缺氧组、干预组和对照组,每组8只。缺氧组大鼠采用常压间歇缺氧法建立肺心病模型,每天给予生理盐水灌胃;干预组大鼠同样构建肺心病模型,每天给予内质网应激抑制剂4-PBA灌胃;对照组大鼠在普通饲养笼中饲养,每天给予生理盐水灌胃。处理21 d后处死大鼠并分离右心室,TUNEL法测定右室细胞凋亡率,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Western blot检测右心室心肌组织中内质网应激标志性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及抗CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2和细胞色素C表达水平。结果与对照组相比,缺氧组大鼠右心室肥大、心肌细胞凋亡率明显增加(均P<0.001),CHOP、GRP78、Bcl-2、线粒体释放细胞色素C均明显增加(P≤0.001)。而与缺氧组相比,干预组大鼠右心室细胞凋亡减少,右心室肥大减轻(均P<0.001),CHOP及GRP78表达水平下调(均P<0.05),Bcl-2表达下降(P=0.020),线粒体中细胞色素C释放减少(P=0.017)。结论慢性缺氧通过诱导心肌细胞内质网应激促进线粒体途径心肌细胞凋亡可能是慢性肺源性心脏病的发病机制之一。 展开更多
关键词 内质网应激 慢性肺源性心脏病 细胞凋亡 线粒体 心肌细胞
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基于病例的翻转课堂在诊断学见习教学中的应用及问题思考 被引量:5
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作者 单虎 张蓉 +5 位作者 刘棣 张秋红 杨侠 李雅莉 王卫利 张明 《临床医学研究与实践》 2022年第21期184-187,共4页
诊断学是连接基础医学与临床医学的重要桥梁,也是医学生掌握疾病诊断技巧和临床思维的重要课程,传统诊断学教学方式难以解决课时有限、理论知识枯燥乏味和调动学生积极性等难题。以病例为基础的教学方法(CBL)与翻转课堂结合起来在诊断... 诊断学是连接基础医学与临床医学的重要桥梁,也是医学生掌握疾病诊断技巧和临床思维的重要课程,传统诊断学教学方式难以解决课时有限、理论知识枯燥乏味和调动学生积极性等难题。以病例为基础的教学方法(CBL)与翻转课堂结合起来在诊断学见习带教过程中取得了良好的教学效果,在诊断学见习课前,授课教师通过微信平台为医学生提供一个具体的临床病例和与该病例有关的微课视频和网络资料,学生利用课前碎片化时间积极主动地去复习理论课上学习到的相关知识,查阅相关资料,思考如何通过问诊、体格检查、辅助检查来确定患者的诊断。在课堂上,以学习小组为单位对相应患者进行问诊和体格检查,小组讨论后,向全体同学汇报讨论结果。在这一过程中,授课教师发挥类似于导师的作用,引导学生解决临床诊断问题,对学生诊断思维过程中存在的问题予以指出,引导学生再思考,得出正确的结论。基于病例的翻转课堂这一新型授课方式有助于激发学生自主学习的兴趣,提高学生的整体学习能力,有助于诊断学理论知识的灵活掌握和学生临床思维的锻炼,同时也促进了青年教师教学水平的提高,为培养卓越的临床医师提供了一条新的教学思路。 展开更多
关键词 诊断学 翻转课堂 体格检查 胸痛
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猪细小病毒7型Taqman实时荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量:2
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作者 张志 张丽丽 +3 位作者 刘爽 单虎 李晓成 王树双 《中国动物检疫》 CAS 2018年第9期90-94,共5页
猪细小病毒7型(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是近年新发现的一种细小病毒亚型。为建立PPV-7快速准确的检测方法,以PPV-7病毒全基因组为模板,设计合成1对引物和1条Taqman探针,建立了PPV-7Taqman实时荧光定量PCR检测方法。本方法的标准曲... 猪细小病毒7型(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是近年新发现的一种细小病毒亚型。为建立PPV-7快速准确的检测方法,以PPV-7病毒全基因组为模板,设计合成1对引物和1条Taqman探针,建立了PPV-7Taqman实时荧光定量PCR检测方法。本方法的标准曲线分析显示,其常数为0.999 2,敏感性可以达到46个病毒拷贝/μL,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。用猪圆环病毒2型、3型,猪细小病毒1型,猪伪狂犬病病毒等病原进行特异性试验,证实本方法不能从这些病毒中检测出特异性条带,表明本研究建立的PPV-7实时荧光PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点。用临床样品对该方法进行了应用性评价,从96份样品中检出52份PPV-7阳性样品,证实了本方法在生产实际应用的可行性。 展开更多
关键词 猪细小病毒7型 实时荧光定量聚合酶链式反应 TAQMAN探针
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表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌对仔猪安全性及免疫效力研究 被引量:1
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作者 宋子杰 商纪娟 +6 位作者 盖春云 解倩倩 张洪亮 宫照欣 孙鑫鹏 单虎 黄娟 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第24期89-92,共4页
为了检验青岛农业大学预防兽医学重点实验室构建的能够表达猪传染性胃肠炎SLN基因的乳酸乳球菌对仔猪的安全性及免疫效力,试验以口服的方式给试验猪免疫重组菌,监测免疫接种后试验猪体重、临床症状及肠道内正常菌群的变化;给小鼠等非靶... 为了检验青岛农业大学预防兽医学重点实验室构建的能够表达猪传染性胃肠炎SLN基因的乳酸乳球菌对仔猪的安全性及免疫效力,试验以口服的方式给试验猪免疫重组菌,监测免疫接种后试验猪体重、临床症状及肠道内正常菌群的变化;给小鼠等非靶标性动物口服该重组菌,检验其安全性,同时利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法监测仔猪体内特异性IgG抗体的变化情况。结果表明:试验仔猪口服免疫重组菌后体重与肠道内正常菌群不受影响,重组菌对仔猪及非靶动物没有致病性,且不会向环境微生物转移; ELISA检测该重组菌免疫仔猪后特异性IgG抗体与免疫前相比有明显差异。说明重组SLN基因的乳酸乳球菌对于预防猪传染性胃肠炎是安全有效的。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎 SLN基因 乳酸乳球菌 免疫效力 酶联免疫吸附试验 安全性
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食管腺癌患者血清中脂联素与炎症细胞因子水平的相关性探讨 被引量:1
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作者 张蓉 程妍 +5 位作者 单虎 伍洁 刘冬 王雪 阎春英 张军 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第24期4266-4271,共6页
目的:探讨食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC)患者血清中脂联素与炎症细胞因子水平及肿瘤组织病理特点之间的相关性,分析脂联素是否通过调节食管组织炎症而参与抑制肿瘤的进展。方法:收集25例健康人、23例Barrett食管(Barrett'... 目的:探讨食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC)患者血清中脂联素与炎症细胞因子水平及肿瘤组织病理特点之间的相关性,分析脂联素是否通过调节食管组织炎症而参与抑制肿瘤的进展。方法:收集25例健康人、23例Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)患者和18例EAC患者。登记临床病例资料;采集空腹静脉血,采用ELISA法检测血清中脂联素和TNF-α、IL-8、IL-6水平并分析其相关性;进行HE染色观察食管组织局部炎症情况。结果:健康对照组、BE组、EAC组三组间相比较发现,随着食管病变的加重,食管局部炎症细胞浸润越明显,同时检测到血清中TNF-α、IL-8、IL-6水平逐渐升高,相反血清脂联素水平逐渐降低;相关性分析结果显示血清炎症细胞因子水平与脂联素水平间存在着负相关关系。结论:EAC发病过程中,食管局部炎症反应逐渐加重,血清炎症细胞因子水平逐渐升高,而脂联素水平逐渐降低,两者之间存在着明显的负相关关系。由此可知,低脂联素血症可能与EAC发生和进展过程中持续存在的慢性炎症有关。 展开更多
关键词 食管腺癌 脂联素 BARRETT食管 炎症细胞因子
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微课结合PBL法在呼吸内科临床实习教学中的应用效果 被引量:15
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作者 杨侠 张明 +3 位作者 单虎 张秋红 张洁 李雅莉 《临床医学研究与实践》 2018年第8期197-198,共2页
传统教学模式已很难满足教育信息化的发展需求,为解决这一难题,本文提出了将微课与PBL相结合的方法。微课结合以问题为导向的教学方法(PBL)利用课堂和网络为医学生提供学习交流平台,提高解决临床实践问题的能力,激发学生自主学习的兴趣... 传统教学模式已很难满足教育信息化的发展需求,为解决这一难题,本文提出了将微课与PBL相结合的方法。微课结合以问题为导向的教学方法(PBL)利用课堂和网络为医学生提供学习交流平台,提高解决临床实践问题的能力,激发学生自主学习的兴趣,从而提升学生的整体学习能力,同时也促进教师教学水平的提高。本研究探讨了在呼吸内科临床实习教学中开展微课结合PBL教学法的特点及效果,为进一步优化呼吸内科教学改革提供新思路。 展开更多
关键词 呼吸内科 教学法 微课 PBL
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缺氧诱导巨噬细胞来源外泌体的提取与鉴定 被引量:1
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作者 张蓉 阎春英 +3 位作者 高淑娟 王雪 单虎 商博鑫 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第9期1103-1107,共5页
目的分析缺氧诱导巨噬细胞分泌产生外泌体,并对外泌体的形态特征进行分析鉴定。方法首先采用佛波酯诱导THP-1细胞促使其分化成为巨噬细胞,分别收集缺氧干预0,12,24 h的巨噬细胞源性外泌体,通过BCA方法提取外泌体蛋白,使用Western blot... 目的分析缺氧诱导巨噬细胞分泌产生外泌体,并对外泌体的形态特征进行分析鉴定。方法首先采用佛波酯诱导THP-1细胞促使其分化成为巨噬细胞,分别收集缺氧干预0,12,24 h的巨噬细胞源性外泌体,通过BCA方法提取外泌体蛋白,使用Western blot方法测定分析外泌体阴性对照蛋白Histone和外泌体表面标志蛋白CD63和HSP70的表达。利用透射电子显微镜及Nanosight NS300仪分析外泌体的形态、特征及粒径大小。结果与缺氧干预0 h及12 h相比,缺氧干预24 h所得的巨噬细胞源性外泌体蛋白含量、CD63及HSP70的表达升高(P<0.05),而三组外泌体中均未检出Histone蛋白。外泌体呈形态均一的类圆形,表面有完整的双层模型结构,大多数外泌体颗粒的粒径集中在154 nm左右。结论成功从缺氧干预巨噬细胞的细胞培养上清液中分离提取出外泌体,通过检测其特异性标志蛋白及形态学分析显示提取的外泌体含量及纯度较高。 展开更多
关键词 缺氧 巨噬细胞 外泌体
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内科学临床见习课的带教体会与思考 被引量:7
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作者 张明 张秋红 +3 位作者 单虎 杨侠 张洁 李雅莉 《临床医学研究与实践》 2018年第8期193-194,共2页
临床见习是内科学习的一个重要环节,使理论知识与医疗实践、基础与临床紧密结合,加深医学生对内科常见病、多发病的理解与掌握。然而受学时、病种、病情严重程度及医院条件等诸多因素的制约,临床见习带教中存在较多困难。通过认真备课... 临床见习是内科学习的一个重要环节,使理论知识与医疗实践、基础与临床紧密结合,加深医学生对内科常见病、多发病的理解与掌握。然而受学时、病种、病情严重程度及医院条件等诸多因素的制约,临床见习带教中存在较多困难。通过认真备课、强化基础知识、多样化的教学方式、反复临床实践、分段式教学及医德医风教育,可改善内科临床见习带教效果,从而全面提高医学生的能力和素质。 展开更多
关键词 内科学 临床见习 教学效果
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2021年~2022年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析 被引量:7
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作者 吕硕林 于海丽 +5 位作者 王彬 时建皓 单虎 马清霞 张传美 杨海燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1207-1215,1222,共10页
为了解山东部分地区PRRSV的分子流行及遗传进化情况,本研究对2021年~2022年采自山东部分地区的214份疑似PRRSV感染猪的临床样品通过RT-PCR检测,并经PCR扩增PRRSV阳性样品的ORF5基因和Nsp2基因,采用MegAlign和MEGA X软件对这两个基因进... 为了解山东部分地区PRRSV的分子流行及遗传进化情况,本研究对2021年~2022年采自山东部分地区的214份疑似PRRSV感染猪的临床样品通过RT-PCR检测,并经PCR扩增PRRSV阳性样品的ORF5基因和Nsp2基因,采用MegAlign和MEGA X软件对这两个基因进行同源性、遗传进化及其编码的关键氨基酸位点突变及分析。结果显示,214份临床样品中检出51份PRRSV阳性样品,检出率为23.83%。表明山东部分地区PRRSV的感染较为严重。经PCR扩增并测序得到26条ORF5基因序列和20条Nsp2基因序列。26条ORF5基因序列之间的同源性为98.7%~77.8%,与6株PRRSV参考株(经典株VR2332、Ch-1a、疫苗株JXA1、QYYZ及流行株NADC30、NADC34)相应基因序列的同源性在80.1%~98.7%,其中210412等17株PRRSV ORF5基因序列与NADC30株ORF5基因序列的同源性为80.1%~91.9%;进化树结果显示,26条ORF5基因分布于4个谱系中,分别为Lineage1 (220406等22株PRRSV ORF5基因)、Lineage3 (220714和211111株)、Sub Lineage8.7 (HP-PRRSV-Like)(210806株)、Sub Lineage5.1(VR2332-Like)(210629株)谱系;20条Nsp2基因主要分布于3个谱系中,其中220110等13株PRRSV Nsp2基因位于Sub Lineage1.8 (NADC30-Like)谱系,210629株位于Lineage5谱系,与VR2332株遗传距离较近;220714等6株PRRSV Nsp2基因位于Lineage8谱系。上述结果表明,山东部分地区流行的主要为PRRSV NADC30株,属于PRRSV-2,且流行的PRRSV的谱系较复杂,主要以Lineage1、Lineage8及Sub Lineage1.8谱系为主。关键氨基酸位点变异分析结果显示,仅Sub Lineage1.8谱系中的211221和220109株GP5氨基酸序列表现为强毒株特征R^(13)及R^(151);210806株与RespPRRS MLV均为A^(137);除210806株在非中和表位(aa180~aa197)处的变化较为活跃外,其余GP5氨基酸序列与参考株GP5氨基酸序列的变异特征基本一致;在T细胞表位(aa117~aa131)中,Sub Lineage1.8谱系中的多数流行株(包括本研究中的211110等12株)均出现L^(120)S、L^(120)F或I^(125)F、I^(125)L变异。210629株Nsp2氨基酸序列与以VR2332株为代表的Lineage5谱系的相应氨基酸序列高度一致,仅存在少数氨基酸的变异;220114等5株PRRSV Nsp2氨基酸序列在aa481、aa532~aa560处分别缺失1+29个氨基酸,与Sub Lineage8.7谱系缺失特征一致,尤其是210806株除在aa532~aa560缺失29个氨基酸外,在aa476~aa512还缺失37个氨基酸;220110等13株PRRSV Nsp2氨基酸序列在aa323~aa433、aa483和aa504~aa522处分别缺失111+1+19个氨基酸,与Sub Lineage1.8谱系缺失特征一致。上述结果表明,各谱系PRRSV GP5氨基酸序列之间存在明显差异,同一谱系PRRSV GP5氨基酸序列与参考株相应氨基酸序列有相似性,但也存在一定差异,其中以Sub Lineage1.8 GP5氨基酸的变异最为活跃。20条Nsp2氨基酸序列与参考株Nsp2氨基酸序列具有一定相似性,但也存在部分的缺失和变异。也表明,目前山东部分地区PRRSV的流行情况较为复杂,仍以NADC30-Like PRRSV为优势流行株,对PRRS的防控形式仍很严峻。本研究为了解山东部分地区PRRSV流行变异情况及PRRS的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 遗传进化 ORF5基因 NSP2基因
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弓形虫主要分泌蛋白及其功能的研究进展 被引量:8
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作者 柳方远 李双星 +3 位作者 印春生 单虎 才学鹏 刘业兵 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期94-102,共9页
弓形虫作为胞内寄生原虫,可以感染几乎所有的温血动物,给人类的健康及畜牧业的发展带来严重危害。弓形虫入侵宿主细胞依赖分泌蛋白与宿主相互作用,这些分泌蛋白包括致密颗粒蛋白(GRAs)、棒状体蛋白(ROPs)和微线体蛋白(MICs),它们在弓形... 弓形虫作为胞内寄生原虫,可以感染几乎所有的温血动物,给人类的健康及畜牧业的发展带来严重危害。弓形虫入侵宿主细胞依赖分泌蛋白与宿主相互作用,这些分泌蛋白包括致密颗粒蛋白(GRAs)、棒状体蛋白(ROPs)和微线体蛋白(MICs),它们在弓形虫的生长发育和免疫逃避过程中发挥重要作用。本文对弓形虫主要分泌蛋白及其功能的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 弓形虫 分泌蛋白 功能 宿主细胞
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猪圆环病毒3型实时荧光定量PCR方法的建立和应用 被引量:7
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作者 郝占武 张志 +2 位作者 张美晶 单虎 李晓成 《动物医学进展》 北大核心 2018年第8期27-31,共5页
为实现猪圆环病毒3型(PCV3)的快速检测,根据GenBank中公布的PCV3全基因组序列设计并合成1对引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法。以前期检测的PCV3阳性样品制备的质粒DNA为模板,绘制了该real-time PC... 为实现猪圆环病毒3型(PCV3)的快速检测,根据GenBank中公布的PCV3全基因组序列设计并合成1对引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法。以前期检测的PCV3阳性样品制备的质粒DNA为模板,绘制了该real-time PCR的标准曲线和熔解曲线分析,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,质粒DNA稀释至10-8后(浓度为5×102拷贝/μL)仍然可以检出,可重复性试验中各组的变异系数均小于3%。用23份临床样品进行了应用性检测,结果从中检测出了5份阳性样品,进一步证实该方法的可行性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 实时荧光定量聚合酶链反应 建立
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