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猪胞内劳森菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用
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作者 裴艳艳 张梦琳 +6 位作者 许浒 相丽润 张洪亮 彭金美 王倩 田志军 周国辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期55-60,69,共7页
猪增生性肠病(PPE),通常被称为猪回肠炎(PI),由胞内劳森氏菌(LI)感染引起。为建立检测LI抗体的间接ELISA方法,本研究构建LI外膜蛋白基因(LI0841)的重组表达质粒p ET28a-LI0841,经测序无误后转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-... 猪增生性肠病(PPE),通常被称为猪回肠炎(PI),由胞内劳森氏菌(LI)感染引起。为建立检测LI抗体的间接ELISA方法,本研究构建LI外膜蛋白基因(LI0841)的重组表达质粒p ET28a-LI0841,经测序无误后转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE检测重组蛋白LI0841蛋白(rLI0841)的表达形式,经Ni柱纯化后采用western blot鉴定其反应原性。SDS-PAGE结果显示,在32 ku处出现目的条带,且其主要以可溶性形式表达;western blot结果显示,r LI0841能够与兔LI多克隆抗体特异性反应,表明纯化的r LI0841具有较强的反应原性,可作为包被抗原用于建立间接ELISA检测方法,经各反应条件优化初步建立LI抗体的间接ELISA检测方法。各反应条件的优化结果显示,4.38 ng/孔的r LI0841以4℃过夜包被最佳;血清最佳稀释度为1∶100,37℃反应0.5 h;羊抗猪Ig G-HRP最佳稀释度为1∶10000,37℃作用0.5 h;TMB底物37℃显色15 min。利用建立的间接ELISA方法检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌及经美国Biostone PPE抗体检测试剂盒检测为阳性的猪血清,评估该方法的特异性;将LI阳性血清2倍倍比稀释(1∶100~1∶51200)后,采用本研究建立的间接ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;以同一批次和不同批次包被的酶标板分别检测5份不同LI抗体水平的猪血清,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除能检测到LI阳性血清外,其余相关病原的阳性血清均为阴性,特异性较强;LI阳性血清1∶800稀释时检测结果仍为阳性,敏感性较高;对5份不同抗体水平的LI阳性血清的批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,重复性较好。利用该ELISA方法与美国Biostone公司PPE抗体检测试剂盒同时检测104份临床猪血清样品,比较二者的检测结果,并计算二者的符合率;采用建立的间接ELISA方法检测黑龙江、吉林等地区413份临床猪血清样品,分析LI在上述地区的流行状况。结果显示,两种方法的阳性符合率为90.91%,阴性符合率为91.84%,总符合率为91.35%;413份临床猪血清样品中LI的阳性检出率为59.81%(247/413),表明LI在黑龙江、吉林等地区的猪群中普遍存在。本研究建立了检测LI抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性与准确性均较好,为临床PI血清流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 胞内劳森氏菌 间接ELISA 抗体检测 LI0841重组蛋白
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猪伪狂犬病病毒HeN1株gB蛋白单克隆抗体的制备及B细胞线性表位鉴定 被引量:3
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作者 赵微 田志军 +2 位作者 王倩 倪宏波 彭金美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期854-857,共4页
为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV HeN1株全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接免疫荧光方法筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV g B蛋白的杂交瘤细胞株1E7。Western blo... 为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV HeN1株全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接免疫荧光方法筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV g B蛋白的杂交瘤细胞株1E7。Western blot结果显示,MAb 1E7与PRV全病毒和真核表达的g B蛋白均能够反应。阻断ELISA试验显示MAb 1E7与PRV的结合可以被猪阳性血清阻断。抗体亚类鉴定显示MAb 1E7的重链为Ig G2b亚类,轻链为kappa链。利用大肠杆菌原核表达系统,表达一系列截短的g B蛋白,最终确定1E7识别的抗原表位是^(81)SAEESLE^(87)。序列分析和western blot结果表明该表位在各PRV病毒株间相对保守。该MAb的制备为建立具有广泛适用性检测PRV野毒感染和疫苗免疫效果评价的阻断ELISA方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 单克隆抗体 表位
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2016~2021年我国猪伪狂犬病病毒的分子流行病学调查与分析 被引量:9
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作者 郭镇洋 赵静 +17 位作者 付军 许浒 李超 李宛生 孙琪 裴艳艳 龚帮俊 王倩 周国辉 汤艳东 冷超粮 王永杰 陈长青 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 彭金美 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期122-128,155,共8页
为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登... 为探究近几年猪伪狂犬病病毒(PRV)在我国的流行情况及遗传演化特征,本研究对2016年~2021年采自全国17个省、市和自治区的2299份临床样品经PCR检测,并利用PCR扩增阳性样品中的PRV gB、gE和gC基因并测序,采用MegAlign分析三者与GenBank登录的PRV参考株相应基因序列的同源性;利用MEGA 7.0分别构建上述3个基因的遗传进化树,并采用MegAlign分析gB、gE和gC蛋白氨基酸序列的差异,分析其遗传演化及分子特征的变化。结果显示,共扩增出24份PRV阳性样品,阳性率约1.04%,且不同年份及不同地区均有PRV的检出。PRV gB、gE和gC基因序列的同源性及遗传进化分析结果显示,3个基因及其编码氨基酸序列均与2011年以来的PRV变异株同源性最高,且均属于基因Ⅱ型PRV变异株;氨基酸序列比对结果显示,与基因Ⅰ型PRV相比,所测PRV gB、gE和gC中均存在特征性氨基酸突变位点:gB氨基酸序列aa75~aa77连续缺失3个氨基酸(SPG),aa93~aa94连续插入2个氨基酸(DG);gE氨基酸序列在aa48和aa496各插入1个氨基酸(D);gC氨基酸序列在aa63~aa69连续插入7个氨基酸AAASTPA。此外,本研究通过比对国内外经典株以及2011年以来国内PRV gE蛋白的氨基酸序列,确定了不同亚型PRV(即指基因Ⅱ型PRV变异株和经典株)的分子特征即基因Ⅱ型PRV变异株:gE aa496为“D+”或aa496为“D-”+aa448“I”;基因Ⅱ型PRV经典株:gE为aa496“D-”+aa448“V/A”。上述结果表明,我国现阶段仍以基因Ⅱ型PRV变异株的流行为主,进一步明确了不同基因型和亚型PRV的分子特征,对了解我国PRV的流行现状及当前流行株的分子特征具有重要意义,为PRV诊断试剂的研发及PR的防控提供了参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 变异株 遗传演化 分子特征
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单元类型对800 MPa级高强钢冲压成形与回弹仿真分析的影响
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作者 田志俊 何翠萍 +2 位作者 张军 詹华 俞祖俊 《安徽冶金科技职业学院学报》 2018年第4期10-12,共3页
以800Ma级高强钢冲压门槛梁零件为研究对象,分析了壳单元和实体壳单元两种单元类型对高强钢冲压成形仿真分析结果的影响。结果表明,两种单元类型对零件成形后厚度影响差异不大。采用两种单元时,零件的回弹量有明显差异,采用壳单元时零... 以800Ma级高强钢冲压门槛梁零件为研究对象,分析了壳单元和实体壳单元两种单元类型对高强钢冲压成形仿真分析结果的影响。结果表明,两种单元类型对零件成形后厚度影响差异不大。采用两种单元时,零件的回弹量有明显差异,采用壳单元时零件的最大回弹量较大。 展开更多
关键词 冲压成形 高强钢 壳单元 实体壳单元 回弹
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一株PRRSV N蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量:5
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作者 李敏华 王倩 +1 位作者 田志军 金涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期279-283,共5页
为了制备具有阻断能力的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb),本研究以PRRSV SD53株感染Marc-145细胞后的上清作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得一株稳定分泌抗PRRSV MAb的杂交瘤细胞株(1H4)。鉴定结果显示,1H4 MAb是Ig... 为了制备具有阻断能力的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb),本研究以PRRSV SD53株感染Marc-145细胞后的上清作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得一株稳定分泌抗PRRSV MAb的杂交瘤细胞株(1H4)。鉴定结果显示,1H4 MAb是Ig G1亚类,轻链为κ链。1H4细胞上清经间接免疫荧光(IFA)检测其效价是1∶40,腹水的IFA效价是1∶3 200。阻断ELISA试验显示1H4 MAb与病毒的结合能够被PRRSV阳性血清阻断。Western blot试验显示1H4 MAb可以特异性识别PRRSV的N蛋白,经截短表达N蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为N蛋白末端aa 107~aa 123。该抗原表位在美洲型PRRSV中高度保守,该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRRSV阻断ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 细胞融合 N蛋白 表位鉴定
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猪繁殖与呼吸综合征病毒RFLP 1-4-4 L1C株的分离鉴定及其遗传演化分析 被引量:4
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作者 田笑笑 黄昕怡 +4 位作者 夏大松 王海伟 田志军 蔡雪辉 安同庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期583-590,597,共9页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑似PRRSV感染的临床样品进行了PRRSV ORF5基因的RT-PCR检测与测序。结果显示,41份(18.72%)为PRRSV阳性样品,其中有1份来自黑龙江省样品中的PRRSV ORF5基因为1-4-4模式。将该样品经PAM分离病毒并经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离到一株RFLP模式为1-4-4的PRRSV,命名为HLJ-80。采用PCR对分离病毒的全基因组分段扩增并测序拼接后显示其基因组全长15013 nt,利用MegAlign软件分析分离病毒与PRRSV 6株代表株的全基因组序列、ORF基因序列的同源性及其NSP2的氨基酸序列;利用MEGA6.0软件分析分离株ORF5基因序列并绘制其系统发生树(ML法);采用RDP4分析分离株全基因组序列的重组事件。全基因组序列的同源性分析结果显示,HLJ-80株与NADC30株的同源性最高,为93.3%,与其他代表株的同源性均低于90%。除ORF2基因外,其余基因序列均与NADC30株同源性最高(90.6%~99.3%)。ORF5基因的遗传进化树显示,HLJ-80株属于RFLP 1-4-4 L1C株。NSP2氨基酸序列分析结果显示,与VR-2332株相比,HLJ-80株NSP2存在131个氨基酸(111+1+19)的不连续缺失,缺失位置与NADC30株一致。上述结果表明,HLJ-80株与NADC30株的亲缘关系较近。重组分析结果显示,HLJ-80株有可能与PRRSV 2014-81株、SD53-1603株高度同源的病毒株重组而来。将本研究中的41株分离株ORF5基因序列,及GenBank中1996年~2021年我国3125条共计3166条北美洲型PRRSV ORF5基因序列,按照PRRSV RFLP 1-4-4模式和L1C分支谱系分类,并分析我国RFLP 1-4-4 L1C株在时间和地理上的分布;将2016年~2021年GenBank中7个国家全部北美洲型PRRSV ORF5基因序列(共计1918条),按照PRRSV RFLP分类,分析2016年以来我国与不同国家之间PRRSV RFLP的模式特点。结果显示,我国PRRSV RFLP 1-4-4自2003年首次出现,至今已累计达260株(8.2%),其中217株属于L1C分支(83.46%),其余为L8和L1A分支。PRRSV的RFLP分类结果显示,1918条PRRSV ORF5基因共有36种RFLP模式。其中RFLP 1-7-4模式的数量最多占25.96%,RFLP 1-4-4分布最广泛,除越南和印度外,该模式在其余5个国家均有分布,其在我国的数量最多。本研究为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况提供了重要参考数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 限制性酶切片段长度多态性 分支谱系 RFLP 1-4-4 L1C
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表达O型FMDV衣壳蛋白重组腺病毒的构建及其对小鼠免疫效力的研究 被引量:2
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作者 刘彦玲 裴艳艳 +5 位作者 李敏杰 杨德成 王海伟 于力 田志军 周国辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期636-641,共6页
已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3... 已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,经双酶切鉴定正确后采用同源重组方法构建重组腺病毒rAdV-P12A3C,传代后经PCR鉴定,结果显示各代次均检测到预期的3.5 kb的目的条带,获得了r AdV-P12A3C。将r AdV-P12A3C连续传代后,分别利用IFA和western blot检测rAdV-P12A3C第2、4、6、8代时外源基因在293细胞中的表达情况。结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中均能够稳定表达。将其感染293细胞后测定rAdV-P12A3C各时间点的病毒效价并绘制一步生长曲线,结果显示,该r AdV-P12A3C传至第8代时病毒效价可达7.2×10^(8)TCID/mL,各时间点病毒效价与亲本病毒差异均不显著,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响。将rAdV-P12A3C免疫BALB/c小鼠,对BALB/c小鼠采血并分离血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体,结果显示,rAdVP12A3C免疫组、O型FMDV灭活疫苗组及rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组BALB/c小鼠均在首免后7周(二免后3周)VP1抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,且rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组产生的VP1抗体水平极显著高于另外两个免疫组(P<0.001)。表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体。本研究结果首次表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在小鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 P1-2A-3C基因 重组腺病毒 免疫原性
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北美型猪繁殖与呼吸综合征竞争ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量:2
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作者 李宛生 李敏华 +3 位作者 杨建伟 田志军 王倩 冷超粮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1221-1226,共6页
为建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA方法,本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原,利用抗北美型PRRSV M蛋白的特异性单克隆抗体为竞争抗体,经条件优化,建立了特异性检测北美型PRRSV的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显... 为建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA方法,本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原,利用抗北美型PRRSV M蛋白的特异性单克隆抗体为竞争抗体,经条件优化,建立了特异性检测北美型PRRSV的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示,最佳抗原包被量为660 ng/孔,待检血清样本稀释度为1∶2,竞争抗体最佳稀释度为1∶8。ELISA结果判定标准:血清样本抑制率PI≥25.65%时判定为阳性,PI<25.65%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测北美型PRRSV,与PRV、PCV2、CSFV、PEDV、TGEV等猪病毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出128倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法对黑龙江地区收集的546份临床血清样品进行检测,PRRSV抗体阳性率达95.1%,与商品化IDEXX PRRSV试剂盒的符合率为95.8%。本研究建立的C-ELISA方法为PRRS的流行病学调查、临床上疫苗评估及免疫前后抗体水平监测提供了有效的检测手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 北美型 M蛋白 竞争ELISA
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猪繁殖与呼吸综合征病毒3’-UTR碱基缺失对病毒复制影响的初步研究 被引量:2
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作者 熊俊垚 赵款 +4 位作者 于芳 杨勇博 田志军 蔡雪辉 安同庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期783-788,共6页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)3’-非编码区(UTR)在病毒复制过程中具有重要作用,本研究经序列比对发现,与经典PRRSV相比,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)3’-UTR中第17位碱基G(鸟嘌呤)发生缺失。为进一步探究3’-UTR中该碱基缺失对3’-UTR二... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)3’-非编码区(UTR)在病毒复制过程中具有重要作用,本研究经序列比对发现,与经典PRRSV相比,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)3’-UTR中第17位碱基G(鸟嘌呤)发生缺失。为进一步探究3’-UTR中该碱基缺失对3’-UTR二级结构和PRRSV复制效率的影响,本研究在HP-PRRSV HuN 4感染性克隆株的基础上,将缺失碱基补平,得到突变病毒HuN 4-3’-UTR-(17+G)。复制动力学结果显示突变病毒HuN 4-3’-UTR-(17+G)在48 h和96 h病毒滴度均较亲本病毒HuN 4株显著降低(p<0.05),表明3’-UTR第17位碱基G的缺失增强了HP-PRRSV的复制能力;同时第17位碱基对应的茎环区域的缺失不影响病毒拯救,其还可以作为标记疫苗的分子标签。本研究结果为进一步探究PRRSV复制的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 3’-UTR 复制 缺失
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美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量:1
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作者 刘梦莹 李敏华 +2 位作者 王倩 田志军 周伦江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期641-644,共4页
为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSVSD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合。采用PRRSVSD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检... 为制备具有中和活性的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用PRRSVSD53株的超离病毒作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠并进行细胞融合。采用PRRSVSD53株和真核表达的PRRSV各结构蛋白作为检测抗原,应用间接免疫荧光试验(IFA)筛选到一株稳定分泌抗SD53株GP4蛋白的杂交瘤细胞株(LM26)。抗体亚类鉴定其为IgG2a,轻链为κ链。原核表达一系列截短的GP4蛋白鉴定LM26的抗原表位结果显示,LM26识别的抗原表位序列为57VVLQDI^62,此抗原表位在美洲型PRRSV中相对保守。病毒中和试验结果显示,MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性,中和效价最高为1∶50,对其它美洲株PRRSV均不具有中和活性。该MAb的制备为进一步研究PRRSVGP4蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 GP4蛋白 表位 中和活性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的缺失第3外显子的肿瘤坏死因子受体介导细胞凋亡能力的探究
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作者 许嘉宇 李忍 +2 位作者 田志军 陈洪岩 王玉娥 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期9-12,共4页
肿瘤坏死因子受体(TNFR)可以在肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员的作用下引起受体介导的细胞凋亡。为了探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和TNFR介导的细胞凋亡的关系,首先使用GenBank中发表的猪源TNFR1的序列设计并合成针对TNFR1的特异性... 肿瘤坏死因子受体(TNFR)可以在肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员的作用下引起受体介导的细胞凋亡。为了探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和TNFR介导的细胞凋亡的关系,首先使用GenBank中发表的猪源TNFR1的序列设计并合成针对TNFR1的特异性引物,然后检测PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后TNFR1的表达情况。结果表明,在PRRSV感染的PAM细胞中,有两种分子量不同的TNFR1存在,序列测定分析表明,一种为野生型TNFR1,另一种为第3外显子缺失(129 bp)的TNFR1(TNFR1-d3)。为探究缺失型TNFR1-d3在细胞凋亡中的意义,我们采用过表达的方法将携带TNFR1和TNFR1-d3的真核表达载体分别转染于HEK293细胞中,用TNF-α结合放线菌酮共刺激细胞诱导凋亡。通过流式细胞术检测发现,与野生型TNFR1相比,TNFR1-d3不再具有促进细胞凋亡的功能,说明缺失的第3外显子参与调控TNF-α诱导的细胞凋亡。本研究阐明了PRRSV和细胞凋亡的新机制。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 肿瘤坏死因子受体 细胞凋亡
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Evaluation of the Pathogenicity of a Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Variant in Piglets 被引量:4
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作者 WEI tian-chao tian zhi-jun +8 位作者 ZHOU Yan-jun AN Tong-qing JIANG Yi-feng XIAO Yan HU Shou-ping PENG Jin-mei HAO Xiao-fang ZHANG Shan-rui TONG Guang-zhi 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2011年第8期1280-1291,共12页
Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic ... Since May 2006,a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) variant characterized by 30 amino acids deletion within its NSP2-coding region emerged and caused extensive economic losses to China's pig industry.To investigate the in vivo pathogenicity and immune responses of the newly emerging PRRSV,3 groups of 60-d-old conventional piglets were inoculated intranasally with a representative strain of the HP-PRRSV variant HuN4 with 3 different infection doses (3×103-3×105 TCID50).The results revealed that the virus variant caused severe disease in piglets and the significant clinical characteristics consisted of persistently high fever (41.0-41.9oC) and high morbidity and mortality (60-100%),the marked clinical signs of PRRS and severe histopathogenic damages in multiple organs.It induced rapid and intense humoral immune responses and seroconversion was detected in most infected pigs at 7 d post-infection (DPI).The virus vigorously replicated in vivo and the highest virus average titer was 9.7 log copies mL-1 serum at 7 DPI.Elevated levels of IFN-g and IL-10 cytokine production in serum in this study were also observed.Taken together,our results demonstrated that the HP-PRRSV variant HuN4 strain is highly pathogenic for piglets and suitable to be a reference strain of highly virulent PRRSV for evaluating the efficacy of the new vaccines. 展开更多
关键词 highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus PATHOGENICITY immune responses viral load
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基于长距离光传送网的光信噪比计算 被引量:5
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作者 孙严智 胡劲松 +2 位作者 刘宇明 田之俊 柴晖依 《光通信研究》 北大核心 2018年第2期14-17,共4页
随着国家电网的快速发展,大型电力通信网向光传送网(OTN)组网快速演进以支撑电网管理、运维中的大量数据通信需求。大型的OTN组网具有长距离光通信的特点,光信噪比(OSNR)是衡量网络质量的重要参数,为保证高效传输,系统OSNR计算具有重要... 随着国家电网的快速发展,大型电力通信网向光传送网(OTN)组网快速演进以支撑电网管理、运维中的大量数据通信需求。大型的OTN组网具有长距离光通信的特点,光信噪比(OSNR)是衡量网络质量的重要参数,为保证高效传输,系统OSNR计算具有重要的研究与应用意义。文章针对长距离OTN电力通信网,分析了网络拓扑的特点,提出了基于该网络特点的OSNR计算方法,并分析了该计算方法的特点、意义及推广价值。 展开更多
关键词 光信噪比计算 长距离光传送网 电力通信网
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关于对钢材产品成分偏析影响因素的分析
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作者 刘雨轩 田志军 韩小强 《甘肃冶金》 2022年第2期50-52,共3页
通过对不同工艺条件下的钢材产品进行数据统计分析,找到产品成分偏差状况。理论上主要从钢水吹氩和钢的凝固偏析进行深入的分析,了解焊接因素对钢材产品的影响。综合影响产品成分偏差的所有因素,制定相应的控制措施,措施实施后,钢材产... 通过对不同工艺条件下的钢材产品进行数据统计分析,找到产品成分偏差状况。理论上主要从钢水吹氩和钢的凝固偏析进行深入的分析,了解焊接因素对钢材产品的影响。综合影响产品成分偏差的所有因素,制定相应的控制措施,措施实施后,钢材产品成分合格率是可以控制到99.9%以上的。 展开更多
关键词 成分偏差 钢水吹氩 凝固偏析 焊接因素
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金矿开采活动区土壤-农作物系统重金属污染特征及风险评价
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作者 田志君 何付兵 +3 位作者 姜昱聪 赵云峰 张涛 李佳颖 《环境科学》 EI CAS 2024年第12期7218-7225,共8页
基于土壤重金属Hg、Cd、Cr、Pb、As元素含量及七步形态组成和同位置农作物重金属含量,采用内梅罗综合污染指数法、富集系数法和风险评价编码法等开展土壤和农作物重金属污染特征及生态风险分析评价,探索重金属在土壤-农作物系统中的吸... 基于土壤重金属Hg、Cd、Cr、Pb、As元素含量及七步形态组成和同位置农作物重金属含量,采用内梅罗综合污染指数法、富集系数法和风险评价编码法等开展土壤和农作物重金属污染特征及生态风险分析评价,探索重金属在土壤-农作物系统中的吸收富集规律,为研究区土壤污染防治及农作物食用安全提供科学依据.结果表明,研究区存在土壤重金属污染,Cd、Pb和As为主要污染元素,重度、中度和轻度污染等级占比分别为26.09%、4.35%和10.87%;各元素含量相较于环境治理前有所降低,但生态风险依然存在,元素Hg、Cr、Pb和As为低生态风险,元素Cd为高生态风险,是主要土壤生态风险因子;水果类、坚果类和谷物类农作物未受到污染,瓜果类、根茎类和叶菜类受到不同程度污染,重污染作物主要有小白菜、韭菜、萝卜和茄子,Cd和Pb元素是主要污染贡献因子;农作物重金属元素富集同金矿及其开采活动关系密切,农作物中Cd元素富集主要与土壤中Cd高可利用态有关,Pb元素富集主要与土壤中Pb高含量有关.平谷金矿开采区土壤重金属元素含量及其可利用态共同决定了农作物重金属元素富集,影响农作物重金属污染空间分布.由于农作物本身的生理特异性,在金矿开采活动区内,农作物种植类别也可形成重金属富集差异,大小表现为:叶菜类>瓜果类>根茎类>谷物类>水果类>坚果类.研究区现有农业种植条件下,瓜果类中的辣椒和茄子以及叶菜类的韭菜和小白菜等尚处于限制级种植品种. 展开更多
关键词 金矿 土壤重金属 农作物 生物富集系数(BCF) 平谷区
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