基于结构动力学的EGFR罕见突变型(S768I)致NSCLC分子机制研究

表皮生长因子受体(EGFR)基因突变是导致非小细胞肺癌(NSCLC)的重要诱因.S768I点突变作为EGFR的一种罕见突变,目前尚无标准的靶向治疗方法,因此详细了解EGFR S768I突变体与野生型的结构差异对于开发相关药物至关重要.为了探究S768I突变在NSCLC中的作用,对WT-EGFR和S768I-EGFR进行分子动力学(MD)模拟、本质动力学(ED)分析和自由能图谱(FEL)重构.MD模拟表明S768I突变增加了EGFR的全局和局部柔性;ED分析得出的大尺度协同运动表明,区分活性状态和非活性状态的两个重要结构元件A-loop和αC-helix在S768I-EGFR中比在WT-EGFR中具有更明显的过渡到活动状态的趋势;自由能计算显示S768I-EGFR的FEL比WT-EGFR的更粗糙更复杂,这意味着S768I突变体具有更丰富的构象多样性.研究结果为S768I突变导致NSCLC提供了合理的分子机理解释,并为开发针对S768I突变患者的新靶向治疗药物提供帮助.

草鱼nrf1基因的克隆与表达及其应激响应研究

为研究跨膜转录因子核因子E2相关因子1(Nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,nrf1)在动物机体抗氧化应激过程中的作用,通过同源克隆获得草鱼nrf1基因序列,其开放阅读框为1560 bp,编码519个氨基酸;系统进化树分析表明草鱼nrf1与团头鲂(Megalobrama amblycephala)进化关系较近。对nrf1进行组织表达分析,结果显示nrf1在肝脏中表达水平最高,其次是心脏和肠道(P<0.05)。昼夜节律分析显示,在9:00时nrf1表达水平最高且显著高于3:00、12:00、18:00、21:00和24:00(P<0.05)。经急性氨氮胁迫处理24h和48h时,发现草鱼nrf1基因在低氨氮(5 mg/L)组和高氨氮(20 mg/L)组中表达量相对于对照组均显著升高(P<0.05);且低氨氮组nrf1表达量在24h时显著低于高氨氮组(P<0.05),而在48h时显著高于高氨氮组(P<0.05)。此外,研究使用3种不同蛋白源(鱼粉、菜粕和豆粕)饲料对草鱼进行生长实验,发现在养殖后14d、28d和35d,菜粕和豆粕组nrf1表达水平显著高于鱼粉组(P<0.05),其中28d时豆粕组nrf1表达量显著高于菜粕组(P<0.05)。综上所述,草鱼nrf1基因表达具有组织特异性,且受到水体氨氮浓度和饲料蛋白源的调控,研究为揭示鱼类nrf1基因的分子特征及其抗氧化应激反应中的功能奠定了理论基础。

青橄榄浸膏的提取及其抗氧化活性研究

为优化青橄榄浸膏提取工艺,并探讨其抗氧化性。以茂名盛产的青橄榄为原料,采用超声波辅助乙醇提取法,以总黄酮和总多酚得率为评价指标,考察各因素对青橄榄浸膏提取效果的影响。采用邻苯三酚自氧化法、结晶紫法和DPPH清除能力评价青橄榄浸膏的抗氧化活性。结果显示,浸膏的最佳提取工艺为:乙醇体积分数70%,料液比1∶18 (g∶mL),超声提取温度50℃,时间6 min(超声提取阶段);单纯有机溶剂提取温度60℃,时间45 min(有机溶剂浸提阶段);此条件下总黄酮得率为1. 76%,总多酚得率为15. 53%。终产物浸膏在0. 3 mg/mL浓度下对超氧阴离子自由基抑制率为22. 74%,相当于同等质量浓度的抗坏血酸抑制效果的23. 47%;在0. 02 mg/mL浓度下对羟基自由基的清除率为67. 32%,相当于同等质量浓度的抗坏血酸清除效果的112. 58%;在0. 2 mmol/mL的DPPH溶液体系中,0. 15 mg/mL的浸膏对DPPH的清除率为95. 40%,相当于同等质量浓度的抗坏血酸清除效果的140. 83%;总体来讲,浸膏具有良好的抗氧化能力,虽然对超氧阴离子自由基抑制率弱于抗坏血酸,但羟基自由基的清除率及DPPH清除率均优于抗坏血酸。

基于倾向评分匹配法分析大学生无聊感对失眠症的影响

目的了解不同群体大学生无聊感和失眠症现状,基于倾向评分匹配法分析大学生无聊感对失眠症的影响。方法采用现况研究对以班级为单位便利抽样法选取的905名大学生进行多维状态无聊量表中文版-大学生修订版、阿森斯失眠量表、抑郁自评量表、焦虑自评量表和基本资料调查,利用1∶1倾向评分匹配控制干扰变量后纳入失眠症和非失眠症各317名。结果倾向评分匹配后失眠症和非失眠症的干扰变量均无统计学意义(P>0.05),无聊感区分失眠症ROC曲线下面积为0.780,最大约登指数对应的截断值85.5分,无聊感总分≥85.5分为高无聊感,预测失眠症的灵敏度66.9%、特异度75.1%、阳性预测值72.9%、阴性预测值69.3%。42.5%大学生处于失眠症状态,44.1%大学生处于高无聊状态。倾向评分匹配前无聊感(OR=4.613)、工学专业(OR=2.363)、理学专业(OR=1.881)、文学专业(OR=2.141)、恋爱(OR=1.571)、抑郁(OR=2.250)、焦虑(OR=4.803)是失眠症的独立危险因素;倾向评分匹配后高无聊感(OR=6.083)的失眠症风险高于低无聊感。结论大学生高无聊感组比例高,失眠症发生率高,无聊感≥85.5分是失眠症的危险因素,应重视大学生失眠症和无聊感的针对性干预。

Real time detection of antibody-antigen interaction using a laser scanning confocal imaging-surface plasmon resonance system

A laser scanning confocal imaging-surface plasmon resonance （LSCI-SPR） instrument integrated with a wavelength-dependent surface plasmon resonance （SPR） sensor and a laser scanning confocal microscopy （LSCM） is built to detect the bonding process of human IgG and fluorescent-labeled affinity purified antibodies in real time. The shifts of resonant wavelength at different reaction time stages are obtained by SPR, corresponding well with the changes of the fluorescence intensity collected by using LSCM. The instrument shows the merits of the combination and complementation of the SPR and LSCM, with such advantages as quantificational analysis, high spatial resolution and real time monitor, which are of great importance for practical applications in biosensor and life science.

一株高温酸性淀粉酶产生菌的分离、筛选、鉴定及其酶学性质研究

淀粉酶作为水解淀粉和糖原的酶类,在生物的新陈代谢和工业化生产中起着广泛而重要的作用,尤其是高温淀粉酶在利用过程中备受关注.从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的43℃底泥中分离并筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)的一株菌,命名为Bacillus sp. Amy-43.对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃.所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应p H值为4.0.在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn2+和Mn2+对该酶有一定的抑制作用,而Ca2+、K+、Mg2+、Fe2+、Cu2+均对该酶活力起到促进作用,其中Cu2+的促进效果最为明显.这些特性预示着Bacillus sp.Amy-43来源的淀粉酶为工业运用提供了重要的酶源.

基于分子动力学模拟和自由能计算的非小细胞肺癌对克唑替尼(crizotinib)耐药性研究

为了研究间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)F1174V突变引起非小细胞肺癌患者对crizotinib的耐药性机制,使用分子动力学模拟(molecular dynamics simulations,MD).本质动力学(essential dynamics,ED)分析及分子力学泊松-玻尔兹曼比表面积(molecular mechanics Poisson-Boltzmann surface area,MM-PBSA)结合自由能计算等方法研究了野生型及F1174V突变型ALK与克唑替尼(crizotinib)结合模式的差异.MD模拟和ED分析结果表明,F1174V突变导致ALK的crizotinib结合口袋部位构象柔性降低,由此可能造成药物进出ALK速度减慢,影响药物发挥正常作用.MM-PBSA结合自由能计算结果表明,F1174V突变造成ALK与crizotinib的结合能力降低.进一步构建了野生型和突变型ALK的自由能图谱(free energy landscape,FEL),并选取了二者最主要自由能井的代表性结构进行比较.结果表明,F1174V突变可以显著改变ALK的构象,特别是可以通过收缩P-环和缩小结合口袋来减弱其与crizotinib的相互作用.研究有助于揭示基于ALK的靶向药物耐药机制,并为开发抗非小细胞肺癌药物提供帮助.

一株高温酸性淀粉酶产生菌的筛选、鉴定及其酶学性质研究

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的55℃底泥中筛选到1株高温淀粉酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16SrRNA基因序列分析,将其初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的一株菌,命名为Bacillus thuringiensis Amy-55。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产淀粉酶最适酶活温度为75℃,最适反应pH值为5.0。在25℃以下,能保持良好的稳定性,Zn^(2+)和Mn^(2+)对该酶有一定的抑制作用,Ca^(2+)、K^+、Mg^(2+)、Fe^(2+)、Cu^(2+)均对该酶活力起到促进作用,其中Fe^(2+)的促进效果最为明显。

本科护理学导论在线课程资源建设及应用

目的探讨建设本科护理学导论在线课程资源的方法及在混合式教学中的应用效果。方法构建5个模块32个知识点的护理学导论在线课程资源,在43名护理本科一年级学生的混合式教学中应用,采用学习成效、学习参与度和教学满意度评价其应用效果。结果学生的平时成绩为(94.51±1.97)分,期中成绩为(89.75±5.14)分,期末成绩为(89.42±4.82)分。学生人均访问在线课程资源为(406.23±138.82)次;教学视频总时长为347 min,学生人均观看视频时长为(357.26±103.87)min;学生人均参与讨论为(31.44±12.33)次;教师参与互动讨论715次。学生对教学内容、教学方法、教学互动和教学反馈的满意度分别为91%(39/43)、93%(40/43)、95%(41/43)和95%(41/43)。结论应用本科护理学导论在线课程资源开展混合式教学取得较好的教学成果,获得学生的较高评价。

一株苍山地区产尿酸氧化酶菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

尿酸氧化酶作为一种可催化尿酸氧化为尿囊素的酶类,广泛应用于医药产业,在治疗痛风,检测血液尿酸浓度,预防和治疗由于肿瘤化学治疗引起的高尿酸血症等方面发挥着重要作用,尤其近年高尿酸疾病频发,尿酸氧化酶的研究备受关注.从云南省大理市苍山土壤中分离并筛选到1株高产尿酸氧化酶菌株,经16S rRNA基因序列分析,其被鉴定为克雷伯菌属(Klebsiella)的一株菌,菌株编号为DLCS-31.对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明,菌株DLCS-31来源尿酸氧化酶的最适反应pH和温度分别为6.6和40℃,35℃和40℃下孵育120 min仍保持80%以上的相对活性,且40℃孵育60 min时其活性提高至140%,经产酶条件优化,菌株DLCS-31的酶活较优化前约提高了4.3倍.

通风供冷墙体隔热降温性能的数值模拟

为防止厂房内高温热源的热量向工作区域的扩散,提出一种新式的用于厂房高温热源的通风供冷墙体。采用Fluent软件分别模拟了供水参数、送风速度、环境温度、空腔厚度等对墙体隔热降温性能的影响,最后研究得出夏季工况下不同因素对通风供冷墙体单位面积供冷量,外墙温度和散热量的变化规律,为外围护结构的节能设计提供了新的思路和方法。