多重重组酶介导等温扩增技术检测食品中3种食源性致病菌

目的 建立快速、灵敏的多重重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)同时检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。方法 根据大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因、沙门氏菌的invA基因以及金黄色葡萄球菌的nuc基因的序列保守区域设计RAA特异性引物,筛选出最优的引物组合并优化各项实验条件;通过标准菌株验证方法特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,验证方法在实际食品样本中的检测能力。结果 多重RAA方法最佳扩增温度为37℃,反应时间为50min;方法特异性良好,仅对目标菌株存在特异性扩增条带,与其他常见食源性致病菌无交叉反应;方法对基因组DNA的检测灵敏度为0.10 ng/μL;对经过简单增菌的人工污染牛奶样本和牛肉干样本中目标菌株的检出限为100 CFU/mL。结论 本研究建立的多重RAA扩增方法具有特异性好、灵敏度高、检测通量高等优势,适用于多种场景下食品样本中3种食源性致病菌的快速检测。

五重实时荧光聚合酶链式法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分

目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异性和绝对灵敏度,最后通过样品掺假模拟实验验证方法 的检出限。结果 该方法 的特异性强,仅能检出豌豆源性、绿豆源性、木薯源性、玉米源性成分;灵敏度较高,对绿豆源性和木薯源性的检测灵敏度可达到1×10^(–1) ng/μL水平,豌豆源性和玉米源性的检测灵敏度可达到1×10^(–2) ng/μL水平。结论 本研究建立的五重实时荧光PCR方法 可用来区分市场上淀粉及其制品中的豌豆源性、绿豆源性、玉米源性和木薯源性成分,具有较好的应用价值。

转基因食品分析检测技术研究进展

随着转基因研发技术的快速发展及在农业领域产业化应用的不断推进,抗逆、抗病和高产优质的转基因(genetically modified,GM)作物品种日渐增多。但转基因食品(genetically modified food,GMF)在带来极大经济效益同时,其安全性也备受争议。因此,世界各国不断建立和完善GM产品标识制度,有些国家甚至规定了转基因成分(genetically modified ingredients,GMIs)具体阈值限量。为更好地对GMF安全性提供评价,识别和量化GMIs检测技术的持续创新与发展尤为重要。本文从基于外源核酸水平的检测技术和基于外源蛋白的检测技术两个方面,系统介绍了定性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、定量PCR技术、等温扩增技术、基因组测序技术、酶联免疫吸附技术、免疫层析试纸条技术以及较新的CRISPR/Cas核酸检测技术等重要技术的原理、应用情况和研究进展,并总结分析各转基因食品成分检测技术的优缺点和亟需解决的难点问题,以期为促进GMF快速、准确及高通量检测技术发展,为确保我国GMF安全的高效准确的监督提供有效支撑。

核桃JrSnRK1α1.1调控种子油脂合成与积累

为探讨核桃SnRK1蛋白激酶对种子油脂合成与积累的调控机理,本研究以‘香玲’核桃种仁cDNA为模板,克隆分离得到SnRK1蛋白激酶α亚基的一个编码基因JrSnRK1α1.1,其CDS序列全长为1539 bp,编码512个氨基酸。构建植物超表达重组载体PBI121-JrSnRK1α1.1,转化并获得了超表达核桃JrSnRK1α1.1基因的拟南芥株系J-1、J-2和J-3。与野生型拟南芥相比,转基因植株表型无明显差异。采用数码显微镜对转基因拟南芥株系种子进行观察,结果显示,相对于野生型,转基因拟南芥株系的种子瘪小、表皮皱缩;株系J-1、J-2和J-3瘪小种子占比分别为43.69%、60.80%和45.87%,显著高于野生型WT(8.43%);种子的千粒重比野生型降低了27.95%-29.32%,差异显著;种子平均粒长和粒宽也显著变小;因此JrSnRK1α1.1可能参与了种子的发育进程。进一步对种子的粗脂肪含量进行测定,结果表明,与野生型相比,转基因拟南芥株系J-1、J-2和J-3的种子粗脂肪含量显著下降,分别比野生型下降9.66%、23.86%和17.61%。荧光双分子试验结果表明,核桃JrSnRK1α1.1与油脂合成关键转录因子JrWRI1互作。综上所述,超表达核桃JrSnRK1α1.1对拟南芥植株生长发育影响不明显,显著影响了拟南芥种子的发育,负调控种子油脂的合成与积累过程。

等温核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

等温扩增技术是近年来发展迅速的一种新型核酸扩增技术,其反应过程始终维持在恒定的温度下,降低了对精密仪器和检测场地的要求,并大幅度缩短了检测时间,更能满足准确、快速、灵敏、便携的日常检测需求。目前,食源性致病菌仍是影响食品安全的主要因素之一,等温核酸扩增技术已成功应用于部分食源性致病菌的检测中,具有广阔的应用前景,有望成为食源性致病菌快速检测的新方法。本文综述了环介导核酸等温扩增、滚环扩增、跨越式滚环扩增、重组酶聚合酶扩增、等温多自配引发扩增、单引物等温扩增、依赖解旋酶的等温扩增、链置换扩增、交叉引物扩增9种等温核酸扩增技术的扩增原理和优缺点,及其在食源性致病菌检测中的应用研究进展,提出了样品前处理、引物设计、结果判读、检测灵敏度、检测通量方面存在的共性问题,并给出相应解决措施,以期为等温核酸扩增技术在食源性致病菌快速检测中的实际应用和相关标准的制定提供研究思路。

Expression and correlation of pyroptosis-related markers and PI3K/AKT pathway in endometriosis

Objective:The expression of pyroptosis related factors GSDMD,Caspase-1,NLRP3,IL-1β,IL-18 and PI3K/AKT signaling pathways in ovarian endometriosis was investigated and their correlations analyzed.Methods:A total of 50 patients with endometriosis who underwent ovarian cystectomy in the Department of Gynecology,the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from January 2022 to January 2023 were enrolled as endometriosis group.In addition,55 patients with normal endometrial tissue who underwent hysteroscopic surgery in the hospital during the same period were selected as the control group,and patients with endometriosis were excluded during the operation.RT-qPCR,Western Blot was used to detect the expression of pyroptosis-related factor and PI3K/AKT signaling pathway mRAN,protein in the above tissues,and the correlation between the expression of the two was analyzed by Pearson correlation test.Results:The expression of pyroptosis-related factors and mRAN of PI3K/AKT signaling pathway in ectopic ovarian cyst tissues was significantly higher than that in the control group,and the difference was statistically significant(P<0.05).Pearson correlation analysis showed that pyroptosis-related factors in ectopic ovarian cysts were positively correlated with the mRNA expression levels of PI3K/AKT signaling pathway(P<0.05).Conclusion:The pyroptosis correlation factors GSDMD,Caspase-1,NLRP3,IL-1β,IL-18 and PI3K/AKT signaling pathways are highly expressed in ovarian endometriosis,and the pyroptosis-related factors are positively correlated with the expression of PI3K/AKT signaling pathway,suggesting that the regulation of endometriosis by activating the PI3K/AKT signaling pathway is likely to be achieved by activating the PI3K/AKT signaling pathway.

临床路径与循证医学相结合应用于心内科住院医师规范化培训

目的探讨临床路径与循证医学相结合教学法在心内科住院医师规范化培训中的应用效果。方法选取在我院心内科住院医师规范化培训的60名学生作为研究对象,分为实验组和对照组,每组各30人,对照组采用传统的教学方法,实验组采用临床路径联合循证医学教学法,规范化培训任务结束后进行随堂测试和问卷调查评估教学效果。结果临床路径联合循证医学教学法组的学习成绩显著高于传统教学法组,实验组学生考核成绩为(86.2±3.4)分,对照组学生(79.0±4.6)分,差异有统计学意义(P<0.05);临床路径联合循证医学教学组对培训的满意度优于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论在心血管内科住院医师规范化培训教学中,临床路径联合循证医学教学法优于传统教学法。

急性冠脉综合征血小板源性生长因子与血管紧张素Ⅱ的相关性及其临床意义

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者中血清血小板源性生长因子(PDGF)与血管紧张素(Ang)Ⅱ的相关性及其意义。方法 ACS组132例,按临床类型分为不稳定型心绞痛组(n=40)、非ST段抬高型心肌梗死组(n=54)和ST段抬高型心肌梗死组(n=38),采用酶联免疫吸附法检测PDGF的水平、放射免疫法检测血清AngⅡ的水平,并进行相关统计学分析。结果 ACS各组患者外周血中PDGF及AngⅡ水平均有显著差异(均P<0.05),相关性分析显示ACS患者外周血中PDGF与AngⅡ水平呈正相关(r=0.413,P<0.05),且与患者的GRACE评分存在显著正相关(r=0.527,P<0.05)。结论随着ACS病情加重,PDGF表达水平升高,PDGF与ACS的GRACE积分和AngⅡ水平有相关性,可为评估ACS的危险分层及预后提供新的指标。

南京市不同结构植物群落在冬夏两季的微气候调节作用

植物的微气候调节能力,对于改善城市公共空间人居环境舒适度具有重要意义。本研究以南京市公园和广场绿地为对象,通过实地测量,分析了5种群落结构(草地、常绿乔木单层林、常绿乔-草复合林、落叶乔木单层林、落叶乔-草复合林)在冬夏两季温度、湿度及热舒适度(温湿指数)调节能力方面的差异。结果表明:夏季,各种群落均有显著或极显著(P<0.05或P<0.01)的降温增湿效果,但各林地之间降温和微气候舒适度调节能力无显著区别;林地降温增湿及热舒适度调节能力效果显著或极显著地高于草地(P<0.05或P<0.01);冬季,常绿乔木单层林或常绿乔-草复合林通过显著降温作用恶化了场地热舒适度,草地及落叶林对微气候无显著影响;除了夏季落叶乔木与草本层在降温效应方面具有显著的交互作用外(P<0.05),草本层与乔木层在其他微气候调节指标方面均无显著的交互作用。从热舒适度角度,建议在冬冷夏热地区,城市绿化应适当增加落叶林比例。

HPLC法检测硫酸吗啡片的有关物质

目的:建立硫酸吗啡片中有关物质的HPLC检测方法。方法:采用Symmetry C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以庚烷磺酸钠溶液(取庚烷磺酸钠1.01g,加水1000 mL溶解,用磷酸调节pH至2.6)为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速1.5 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长230 nm,进样量20μL。结果:硫酸吗啡与各杂质以及各杂质间均能达到很好分离。硫酸吗啡质量浓度在2.026~2532μg·mL^(-1);范围内线性关系良好(r=0.9999);杂质A、B、C、D、E、F质量浓度分别在0.195~5.847、0.305~17.080、0.154~6.172、0.198~5.929、0.473~6.626、0.420~6.294μg·mL^(-1);范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9998、0.9999、0.9998、0.9998、0.9998、0.9999。硫酸吗啡检测限为0.068μg·mL^(-1),杂质A、B、C、D、E、F检测限分别为0.059、0.092、0.047、0.060、0.143、0.127μg·mL^(-1);硫酸吗啡定量限为0.224μg·mL^(-1),杂质A、B、C、D、E、F定量限分别为0.195、0.305、0.154、0.198、0.473、0.420μg·mL^(-1)。3批样品共检出6个主要杂质,其中包括杂质A、B、D、E、F和1个未知杂质,均未检出杂质C,其他杂质均符合相应限度规定。结论:本法可准确检测硫酸吗啡片中杂质A、B、C、D、E、F。

抗非小细胞肺癌新型表皮生长因子受体抑制剂的研究进展

肺癌已成为我国发病率和死亡率最高的癌症,对其发病机制及治疗方法的研究刻不容缓。非小细胞肺癌(NSCLCs)是肺癌中最常见的亚型,临床上治疗NSCLCs的药物主要是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂,目前已发展到第三代,代表药物为奥西替尼。然而,在长期使用该药物后,患者的EGFR激酶普遍发生了以C797S为主的耐药突变,导致疗效明显下降。本综述的主要内容就是针对C797S耐药的EGFR有效抑制剂的最新研究进展。