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基于Multisim飞机纵向操纵系统力臂自动调节电路仿真研究
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作者 张元峰 孟欣 于春风 《自动化技术与应用》 2024年第5期15-18,34,共5页
基于飞机纵向操纵系统中飞行高度和飞行速度变化对飞机舵面偏转角调节需求,研究杆系操纵系统力臂自动调节装置的电气控制原理及工作过程。首先根据不同飞行高度和速度对飞机单位过载平尾偏角固有影响规律,得出力臂自动调节规律,然后利用... 基于飞机纵向操纵系统中飞行高度和飞行速度变化对飞机舵面偏转角调节需求,研究杆系操纵系统力臂自动调节装置的电气控制原理及工作过程。首先根据不同飞行高度和速度对飞机单位过载平尾偏角固有影响规律,得出力臂自动调节规律,然后利用Multisim软件分别开展敏感电桥、差分放大、施密特触发及功率放大电路设计与仿真,得出各级控制电路电气参数传输特性变化规律,为进一步研究飞机力臂性能超差故障分析和故障预测提供借鉴。 展开更多
关键词 飞机操纵 力臂调节 MULTISIM 电路仿真 故障诊断
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剖宫产后疤痕子宫再次妊娠阴道试产的效果及分娩结局分析 被引量:13
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作者 林小磊 张源凤 张媛 《海南医学》 CAS 2023年第2期257-260,共4页
目的分析剖宫产后疤痕子宫再次妊娠阴道试产的效果及分娩结局,为分娩方式的选择提供依据。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月在阳江市妇幼保健院产科因剖宫产后疤痕子宫再次妊娠阴道试产的126例产妇的临床资料,择同期非疤痕子宫且顺... 目的分析剖宫产后疤痕子宫再次妊娠阴道试产的效果及分娩结局,为分娩方式的选择提供依据。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月在阳江市妇幼保健院产科因剖宫产后疤痕子宫再次妊娠阴道试产的126例产妇的临床资料,择同期非疤痕子宫且顺利经阴道分娩产妇80例纳入对照组。将阴道分娩成功的86例纳入成功组,失败的40例纳入失败组。比较不同组别间产妇的临床资料,以及分娩情况和妊娠结局(包括新生儿体质量、Apgar评分、产后出血及产后发热等)。结果失败组产妇的年龄、孕前体质量指数(BMI)及孕周分别为(33.02±4.20)岁、(24.07±1.48)kg/m^(2)、(40.88±1.53)周,明显高于成功组的(28.02±5.14)岁、(22.20±1.70)kg/m^(2)、(38.12±2.42)周和对照组的(27.91±3.22)岁、(21.97±1.33)kg/m^(2)、(38.20±2.09)周,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组与成功组的年龄、孕前BMI及孕周比较差异均无统计学意义(P>0.05);成功组与对照组在新生儿体质量、产后出血发生率及产后出血量、产后发热率方面比较差异均无统计学意义(P>0.05);失败组产妇产后的出血发生率、产后发热率分别为22.50%、20.00%,产后出血量及新生儿体质量分别为(501.36±98.63)mL、(3.68±0.57)kg,明显高(多)于成功组的5.81%、5.81%、(197.15±35.95)mL、(3.24±0.43)kg和对照组的5.00%、5.00%、(180.53±30.83)mL、(3.31±0.65)kg,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对于剖宫产后疤痕子宫再次妊娠,在严格把握适应证、严密监测的基础上,经阴道分娩是安全可行的,且经阴道分娩有利于降低剖宫产率,减少产后出血的发生。 展开更多
关键词 剖宫产 疤痕子宫 阴道分娩 产后出血 分娩结局
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双线圈绕组的航空接触器动作特性分析
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作者 郝世勇 战祥新 +2 位作者 张元峰 于春风 孟欣 《环境技术》 2023年第8期20-24,共5页
航空接触器是飞机供配电系统中不可或缺的控制电器,其动作特性直接影响到飞机供配电系统的安全与可靠性。本文针对具有双线圈绕组的航空接触器,通过测试线圈电流和触点电压波形解释了其动作过程,提取了吸合时间、释放时间、回跳时间等... 航空接触器是飞机供配电系统中不可或缺的控制电器,其动作特性直接影响到飞机供配电系统的安全与可靠性。本文针对具有双线圈绕组的航空接触器,通过测试线圈电流和触点电压波形解释了其动作过程,提取了吸合时间、释放时间、回跳时间等特征参数,最后通过分析线圈电压对其动作特性的影响,得出线圈激励电压是影响该类接触器动作特性的关键。 展开更多
关键词 飞机供配电 航空接触器 双线圈绕组 吸合过程 释放过程
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航空接触器“吸合二步”现象的观测与分析
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作者 张元峰 于春风 +1 位作者 刘治国 张溪 《环境技术》 2023年第1期44-47,共4页
动作特性参数是判断航空接触器健康状态的关键。本文基于某航空接触器动作特性的测试结果,详细分析了接触器发生“吸合二步”现象的原因,并提出了该现象对其电寿命和可靠性的影响。所得的结论对于航空电气系统运维成效的提升具有参考价值。
关键词 接触器 吸合过程 电磁吸力 机械反力 电接触
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航空接触器主触头输入端烧毁故障及原因分析
5
作者 张元峰 张秋生 +1 位作者 于春风 张溪 《环境技术》 2023年第2期24-28,共5页
某型航空直流接触器在使用中出现主触头输入端烧毁故障。通过故障树综合分析,采用模拟烧毁试验手段对送检的接触器开展故障原因分析。结果表明,主触头输入端被烧毁的原因主要是接触器接触片表面氧化、接触处有污物,导致接触片与外接导... 某型航空直流接触器在使用中出现主触头输入端烧毁故障。通过故障树综合分析,采用模拟烧毁试验手段对送检的接触器开展故障原因分析。结果表明,主触头输入端被烧毁的原因主要是接触器接触片表面氧化、接触处有污物,导致接触片与外接导线的接线片之间的接触电阻过大。在实际使用过程中,应结合定期检查工作,对接触器的螺母紧固、接触片的表面状态是否存在氧化发黑等情况进行外观检查,视情更换接触器,避免主触头接触片发生烧毁故障。 展开更多
关键词 航空接触器 主触头 输入端 接触电阻 烧毁故障
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航空接触器动作特性的退化现象与机理分析
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作者 张元峰 张秋生 +1 位作者 于春风 刘治国 《失效分析与预防》 2023年第5期335-340,共6页
针对由于飞机泵站航空接触器工作不稳定引发的飞机发电机断电故障,开展航空交流接触器动作特性的退化现象与机理分析。搭建测试平台,测试接触器动作电压波形,查探触头动作时间及接通状况。将原机故障件和同型号正常接触器进行拆解,用体... 针对由于飞机泵站航空接触器工作不稳定引发的飞机发电机断电故障,开展航空交流接触器动作特性的退化现象与机理分析。搭建测试平台,测试接触器动作电压波形,查探触头动作时间及接通状况。将原机故障件和同型号正常接触器进行拆解,用体式显微镜和扫描电镜对比观察2台接触器的动、静触头的宏观和微观形貌,为接触器工作失效分析提供佐证。结果表明:接触器触头同步时间超过2 ms标准要求,接触器泵类负载长期启动产生的浪涌电流是导致接触器耐线路系统过载能力不足的重要原因,在设计中应尽量减弱泵类负载启动浪涌电流对触头电烧蚀的危害。 展开更多
关键词 航空接触器 动作特性 电烧蚀 退化现象 机理分析
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肝郁证雌性大鼠乳腺组织癌前因子的表达及柴胡疏肝散的干预作用 被引量:11
7
作者 钱梦 谢鸣 +2 位作者 张媛凤 刘碧原 李聪 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第9期1398-1405,共8页
【目的】探讨肝郁证雌性大鼠乳腺组织癌前因子表达的变化及柴胡疏肝散的干预作用。【方法】将动情周期稳定的大鼠随机分为正常组(N=10)和造模组(N=30)。造模组雌鼠采用慢性束缚应激法成功复制肝郁证模型后,随机分为模型组、柴胡疏肝散... 【目的】探讨肝郁证雌性大鼠乳腺组织癌前因子表达的变化及柴胡疏肝散的干预作用。【方法】将动情周期稳定的大鼠随机分为正常组(N=10)和造模组(N=30)。造模组雌鼠采用慢性束缚应激法成功复制肝郁证模型后,随机分为模型组、柴胡疏肝散大剂量组和柴胡疏肝散小剂量组,每组10只。柴胡疏肝散大、小剂量组分别按1.24、0.31g·kg^-1·d^-1给予柴胡疏肝散汤液灌胃,连续2周。正常组、模型组给予等量蒸馏水。定时记录各组大鼠的外观行为变化。造模结束后,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察乳腺病理变化,放射免疫法测定血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)和下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量,酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定血浆5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、三叶因子1(TFF1)、三叶因子3(TFF3)和乳腺组织内基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、存活素(Survivin)含量。【结果】(1)肝郁证相关指标:与正常组比较,模型组大鼠第2~4周外观行为评分明显升高(P<0.01),下丘脑CRH,血中ACTH、CORT、E表达明显升高(P<0.05或P<0.01),血中5-HT、NE、DA含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,柴胡疏肝散大剂量组大鼠第3~4周外观行为评分明显降低(P<0.01),下丘脑CRH、血中ACTH和CORT含量明显降低(P<0.01),血中5-HT、NE含量明显升高(P<0.05或P<0.01),柴胡疏肝散小剂量组大鼠1~4周外观行为评分均未见明显变化(P>0.05),血中CORT含量降低(P<0.05),NE、DA含量明显升高(P<0.01)。(2)乳腺及相关癌前因子的变化:与正常组比较,模型组大鼠乳腺腺泡形状不规则,腺导管管腔扩张,导管内分泌物增加,乳腺Survivin和TIMP-2表达明显升高(P<0.01),血清TFF1、TFF3表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,柴胡疏肝散大剂量组大鼠乳腺腺泡形状趋于规则,间见不规则腺泡,导管内分泌物较少,乳腺Survivin和TIMP-2表达均明显降低(P<0.01),柴胡疏肝散小剂量组大鼠乳腺腺泡趋于规则,但不规则腺泡较多,TIMP-2表达明显降低(P<0.01)。【结论】慢性束缚应激法复制的肝郁证雌性模型大鼠的乳腺出现增生样变且伴有癌前相关因子的异常表达。柴胡疏肝散不仅对模型大鼠肝郁证相关指标有较好的改善作用,还可缓减其乳腺增生及调节促癌/抑癌因子的表达,其大剂量作用优于小剂量。 展开更多
关键词 肝郁证 柴胡疏肝散 乳腺增生 癌前因子 疾病模型 动物 大鼠
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小浪底水库运用后黄河下游河道洪水与泥沙输移特性 被引量:12
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作者 申冠卿 张原锋 张敏 《泥沙研究》 CSCD 北大核心 2020年第6期59-66,共8页
根据小浪底水库拦沙运用后的河道观测资料,分析了黄河下游河道泥沙冲淤及河床质组成的时空变化特性。伴随着河道的持续冲刷,导致河床粗化、细泥沙补给不足,水流挟沙能力明显降低。建立了河道冲刷效率与累积冲刷量的量化关系,河道冲刷效... 根据小浪底水库拦沙运用后的河道观测资料,分析了黄河下游河道泥沙冲淤及河床质组成的时空变化特性。伴随着河道的持续冲刷,导致河床粗化、细泥沙补给不足,水流挟沙能力明显降低。建立了河道冲刷效率与累积冲刷量的量化关系,河道冲刷效率随累积冲刷量的增加呈指数衰减。2018年黄河下游河道的输沙能力相对于2000年降低约57.1%。分析了洪水期河道冲淤量与水沙量、流量及累积水量间的函数响应关系。考虑到河床粗化对输沙能力降低的影响,对2018年7月洪水冲淤结果进行了验证。建立了在洪水不同含沙量级条件下,利津站含沙量恢复值与流量间的关系。 展开更多
关键词 泥沙输移 洪水 小浪底水库 黄河下游
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纳米驱油技术进展 被引量:4
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作者 张志超 柏明星 +3 位作者 王玺程 张元锋 李文明 高振东 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期66-70,共5页
系统论述了纳米驱油技术提高原油采收率的机理,包括降低油水界面张力、改变油藏润湿性、分离压驱油、调剖堵水、改善流度比及防止沥青质沉淀阻塞油藏孔道。而针对常规纳米驱油体系因自身不稳定易发生材料的聚沉进而影响提高油藏采收率... 系统论述了纳米驱油技术提高原油采收率的机理,包括降低油水界面张力、改变油藏润湿性、分离压驱油、调剖堵水、改善流度比及防止沥青质沉淀阻塞油藏孔道。而针对常规纳米驱油体系因自身不稳定易发生材料的聚沉进而影响提高油藏采收率的效果,解决方法是对常规纳米颗粒接枝不同的官能团进行改性来实现稳定性;同时,特殊的官能团和驱油纳米材料的有机结合能形成对温度、磁性、pH及含油饱和度敏感的智能纳米驱油体系,实现对油藏剩余油的定向挖潜,改善油藏的驱油效果。 展开更多
关键词 纳米驱油 改性 智能纳米 提高采收率
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长链非编码RNA MALAT1对神经母细胞瘤系细胞生物学特性的影响 被引量:4
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作者 董孟宁 张建党 +1 位作者 张元峰 韩伟一 《中国临床神经外科杂志》 2019年第2期93-97,共5页
目的探讨长链非编码RNA MALAT1对神经母细胞瘤系细胞生物学特性的影响及作用机制。方法体外培养神经母细胞瘤系SHEP2细胞,细胞分为Control、sh-MALAT1、miR-181a-5p inhibitor和sh-MALAT1+miR-181a-5p inhibitor组,其中sh-MALAT1组转染s... 目的探讨长链非编码RNA MALAT1对神经母细胞瘤系细胞生物学特性的影响及作用机制。方法体外培养神经母细胞瘤系SHEP2细胞,细胞分为Control、sh-MALAT1、miR-181a-5p inhibitor和sh-MALAT1+miR-181a-5p inhibitor组,其中sh-MALAT1组转染sh-MALAT1,miR-181a-5p inhibitor组转染miR-181a-5p inhibitor,sh-MALAT1+inhibitor组共同转染sh-MALAT1与miR-181a-5p inhibitor,Control组加入等量空载体。PCR检测mRNA水平;生物信息预测MALAT1与miR-181a-5p的靶向关系,荧光素酶实验鉴定;CCK8法检测细胞增殖能力;Hoechst法检测细胞凋亡;划痕实验测试细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;免疫印迹法检测蛋白表达。结果 sh-MALAT1明显降低MALAT1并提高miR-181a-5p在神经母细胞瘤细胞系SHEP2细胞mRNA水平。miR-181a-5p mimic明显降低MALAT1 wt荧光素酶活性。sh-MALAT1抑制SHEP2细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡;miR-181a-5p inhibitor促进细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡,并减弱sh-MALAT1产生的影响。同时,sh-MALAT1抑制PI3K/Akt信号通路,而miR-181a-5p inhibitor可激活此信号通路并减弱sh-MALAT1的抑制作用。结论MALAT1靶向下调miR-181a-5p表达促进神经母细胞瘤细胞系SHEP2细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 SHEP2细胞 长链非编码RNA MALAT1 miR-181a-5p 细胞侵袭 细胞增殖 细胞凋亡
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“航空电机学”网络课程开发设计与实现 被引量:1
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作者 张元峰 郝世勇 +1 位作者 于守淼 于春风 《电气电子教学学报》 2018年第1期59-63,共5页
本文针对"航空电机学"课程教学中,基于网络教学平台开发的网络课程,从课程教学目标定位,教学内容选取,框架结构构建,交互训练设计等方面开展深入研究,丰富学员课前自学手段,方便教员课上开展导学活动,促使学员课后实施测评、... 本文针对"航空电机学"课程教学中,基于网络教学平台开发的网络课程,从课程教学目标定位,教学内容选取,框架结构构建,交互训练设计等方面开展深入研究,丰富学员课前自学手段,方便教员课上开展导学活动,促使学员课后实施测评、作业提交及互评,实现基于信息资源建设的信息化教学手段的应用。 展开更多
关键词 信息化教学 网络课程 课程实施 开发设计
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基于Multisim飞机直接电力起动电路仿真研究 被引量:2
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作者 张元峰 骆彬 于春风 《自动化技术与应用》 2018年第8期107-111,共5页
基于飞机发动机直接电力起动安全及快速起动需求,研究起动电气控制原理及工作过程。首先根据起动机和发动机二者机械特性,得出控制电路基本设计思路,并重点针对磁通变化对转矩的影响,分析磁通变化对转矩的影响规律;搭建典型四级电力起... 基于飞机发动机直接电力起动安全及快速起动需求,研究起动电气控制原理及工作过程。首先根据起动机和发动机二者机械特性,得出控制电路基本设计思路,并重点针对磁通变化对转矩的影响,分析磁通变化对转矩的影响规律;搭建典型四级电力起动仿真电路,得出起动过程转矩、电压及电流等电气参数变化规律,为进一步研究飞机起动电气性能可靠性提供借鉴。 展开更多
关键词 MULTISIM 电力起动 起动系统 电路仿真
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非洲猪瘟病毒A137R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定 被引量:8
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作者 向志达 李长尧 +4 位作者 张涛清 张元峰 黄丽 杨玉莹 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期402-410,共9页
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白鼠源单克隆抗体(MAb),本研究通过原核系统表达并纯化了重组A137R(rA137R),将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌A137R MAb的杂交瘤细胞株3D1和2C3。亚类试剂盒鉴定结果显示,两... 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白鼠源单克隆抗体(MAb),本研究通过原核系统表达并纯化了重组A137R(rA137R),将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌A137R MAb的杂交瘤细胞株3D1和2C3。亚类试剂盒鉴定结果显示,两株MAb重链亚类均为IgG1,轻链亚类均为Kappa链。采用间接ELISA方法测得MAb 3D1和2C3的腹水效价均高于10^(5),选取效价较高的MAb 3D1用于后续试验。采用western blot检测制备的MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的A137R的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R的反应性。Western blot结果显示,过表达A137R的293T细胞出现了15 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量浓度的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAMs中(感染后8 h)出现了15 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加。IFA结果显示,在过表达A137R的293T细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的MAb 3D1既能够与过表达的A137R反应,也能够与天然表达的A137R反应,反应性较强。将MAb 3D1用于激光共聚焦试验中检测ASFV感染PAMs后不同时间A137R的细胞定位;用于免疫共沉淀(Co-IP)试验中检测293T细胞中过表达的A137R和Flag-Agarose结合的反应性。激光共聚焦试验结果显示,ASFV感染PAMs后6 h出现绿色荧光,且荧光主要在细胞质中,随着感染时间的延长,绿色荧光逐渐增多增强,表明A137R主要定位于细胞质中。Co-IP试验结果显示,MAb 3D1可以检测到结合在Beads上的A137R,出现约15 ku的特异性条带,表明MAb 3D1可以用于Co-IP试验。利用一系列表达部分重叠的重组A137R片段并经western blot鉴定两株MAb识别的表位;根据western blot结果合成一系列多肽并包被ELISA板,采用间接ELISA方法进一步筛选MAb识别的抗原表位,并利用western blot验证筛选到的抗原表位。结果显示,A137R氨基酸序列中的18NFHRCAWEE26和64AWHEVPECREFI75分别为MAb 3D1和2C3的抗原表位。本研究首次制备了ASFV A137R蛋白的MAb,并进行了初步应用研究,还对其进行了表位鉴定,为进一步将该MAb利用于ASFV的检测和疫苗研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 A137R蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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“飞机电气电路设计与制作”实践课程教学改革研究与实践
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作者 张元峰 骆彬 于春风 《课程教育研究(学法教法研究)》 2017年第35期33-34,共2页
按照深化任职教育教学改革、培养高素质岗位人才的要求,开展“飞机电气电路设计与制作”实践课程教学设计研究。通过完善课程的顶层设计,合理选取和编排教学科目,精心设计和研制实践教学硬件平台,有效运用“任务驱动式”教学模式,... 按照深化任职教育教学改革、培养高素质岗位人才的要求,开展“飞机电气电路设计与制作”实践课程教学设计研究。通过完善课程的顶层设计,合理选取和编排教学科目,精心设计和研制实践教学硬件平台,有效运用“任务驱动式”教学模式,灵活规范组织教学实施过程,提示了学生学习效果及解决工程实际问题的能力。 展开更多
关键词 任职教育 实践课程 教学设计
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猪脑心肌炎病毒VP1蛋白与宿主RPS20蛋白相互作用研究 被引量:7
15
作者 张元峰 张昆丽 +3 位作者 薛娟 黄丽 杨玉莹 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期715-719,共5页
为筛选并鉴定与猪脑心肌炎病毒(EMCV) VP1蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交系统筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库。酵母共转化和免疫共沉淀试验表明VP1和RPS20蛋白之间存在特异性相互作用。激光共聚焦试验显示,过表达的VP1和... 为筛选并鉴定与猪脑心肌炎病毒(EMCV) VP1蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交系统筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库。酵母共转化和免疫共沉淀试验表明VP1和RPS20蛋白之间存在特异性相互作用。激光共聚焦试验显示,过表达的VP1和RPS20共定位于细胞质中。本研究初步证实了RPS20与EMCV VP1蛋白之间的相互作用,为进一步研究RPS20蛋白在EMCV感染过程中的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪脑心肌炎病毒 VP1蛋白 核糖体蛋白S20 病毒-宿主相互作用
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非洲猪瘟病毒pI215L蛋白单克隆抗体的制备及其反应性研究 被引量:5
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作者 许文杰 薛梦迪 +4 位作者 张元峰 李长尧 黄丽 熊涛 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期405-410,共6页
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι型干扰素(IFN-Ι)的机制提供物质基础,本研究构建了重组原核表达质粒pET-21a-pI215L,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定,结果显示表达了可溶性的pI215L蛋白。进一步纯化pI215L蛋白后免疫小鼠,并经脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选,获得能够分泌pI215L蛋白单克隆抗体(MAb)的细胞株。Western blot结果显示,该MAb能够特异性识别25 ku处的外源转染过表达不同浓度的pI215L蛋白,并且能够识别感染MOI 1、MOI 10接毒剂量的ASFV编码的内源pI215L蛋白,以及感染ASFV 2 h后不同时间点表达的内源pI215L蛋白;真核表达质粒pET-21a-pI215L转染HEK293T细胞后,以及以MOI 1的ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后分别进行间接免疫荧光(IFA)检测,结果显示,使用兔源标签HA抗体以及Flag抗体为一抗染色的细胞可见绿色荧光,使用抗ASFV pI215L MAb为一抗染色的细胞可见红色荧光,表明本实验制备的MAb可用于IFA试验,识别内外源pI215L蛋白;免疫沉淀(IP)试验结果显示,纯化的MAb能够特异性结合HEK293T细胞中外源过表达的pI215L蛋白以及ASFV感染PAMs细胞中表达的内源pI215L蛋白。本研究为进一步探究pI215L的分子免疫机制以及ASFV疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pI215L 单克隆抗体
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非洲猪瘟病毒E301R蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用 被引量:6
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作者 刘学敏 张元峰 +3 位作者 王永琦 康力 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期963-969,共7页
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)E301R蛋白单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化了重组E301R蛋白(r E301R)。将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E301R蛋白MAb的杂交瘤细胞株8B3,亚类鉴定结果显示8B3 MA... 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)E301R蛋白单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化了重组E301R蛋白(r E301R)。将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E301R蛋白MAb的杂交瘤细胞株8B3,亚类鉴定结果显示8B3 MAb为IgG1型。利用一系列表达部分重叠的重组E301R片段并经western blot鉴定8B3 MAb识别的抗原表位,结果显示,8B3 MAb识别的抗原表位为^(1)MSEDIRRGPGRPPKKRVVPN。采用western blot检测制备的8B3 MAb与HEK293T细胞中过表达的E301R蛋白(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的E301R蛋白的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测8B3 MAb与293T细胞中过表达的E301R蛋白的反应性及E301R蛋白在细胞中的定位。Western blot结果显示,过表达E301R蛋白的293T细胞出现了36 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAM中(感染后8 h)出现了36 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加。IFA结果显示,在过表达E301R蛋白的293T细胞中出现绿色荧光,且其定位于细胞质中。以上结果表明,制备的8B3MAb既能够与过表达的E301R蛋白,也能够与天然表达的E301R蛋白反应,反应性较强。将8B3 MAb用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的E301R蛋白和Flag-Agarose结合后与8B3 MAb的反应性。结果显示,8B3 MAb可以检测到结合在Flag-Agarose上的E301R蛋白,出现约36 ku的特异性条带。表明8B3 MAb可以用于Co-IP试验。这些研究结果为进一步研究E301R蛋白的功能奠定实验基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 E301R蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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非洲猪瘟病毒A137R蛋白多克隆抗体的制备与应用 被引量:3
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作者 向志达 张涛清 +3 位作者 张元峰 黄丽 杨玉莹 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期60-64,共5页
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表达质粒pET-21a-A137R,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的A137R重组蛋白分子质量约15.0 ku,其主要以可溶形式表达。利用HisTrap亲和层析和凝胶过滤层析纯化获得高纯度的A137R重组蛋白,利用该纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,经Protein G亲和层析介质纯化后经western blot、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验检测结果显示,制备的兔抗ASFV A137R蛋白的多克隆抗体能特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的ASFV Flag-A137R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV A137R蛋白。本研究为进一步探究ASFV A137R蛋白的功能、其在ASFV感染及致病性中的作用和诊断技术研究奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 A137R蛋白 多克隆抗体
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猪脑心肌炎病毒3AB蛋白与宿主蛋白RPL11相互作用的鉴定 被引量:2
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作者 薛娟 张昆丽 +3 位作者 张元峰 黄丽 杨玉莹 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期375-380,共6页
为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA... 为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA复制、有丝分裂和细胞凋亡等过程;酵母共转化试验与免疫共沉淀试验证实EMCV 3AB和RPL11两者之间存在特异性结合;激光共聚焦试验显示EMCV 3AB与RPL11共同过度表达时,二者共定位在细胞核中,而在EMCV感染状态下,3AB与RPL11主要共定位在细胞质中。另外,EMCV感染HeLa细胞能降低细胞中p53的蛋白水平,但3AB并不直接促进p53蛋白降解,表明EMCV 3AB对RPL11-MDM2-p53通路无影响。本研究发现并证实了RPL11与EMCV 3AB之间的相互作用,为进一步研究RPL11蛋白在EMCV复制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪脑心肌炎病毒 3AB蛋白 60S核糖体蛋白L11 病毒-宿主相互作用
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内皮祖细胞对野百合碱诱导的肝静脉闭塞病的防治作用研究
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作者 安立才 李喜静 +4 位作者 刘英慧 刘小倩 张元峰 王燕明 初晓霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期242-247,共6页
目的:探讨内皮祖细胞对野百合碱诱导的小鼠肝静脉闭塞病的防治作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为3组:生理盐水组(n=15)、野百合碱组(n=15)、野百合碱+内皮祖细胞输注组(n=15)。灌胃后d 8检测各组小鼠肝功能(TBIL、ALT、AST)、肝脏指数及... 目的:探讨内皮祖细胞对野百合碱诱导的小鼠肝静脉闭塞病的防治作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为3组:生理盐水组(n=15)、野百合碱组(n=15)、野百合碱+内皮祖细胞输注组(n=15)。灌胃后d 8检测各组小鼠肝功能(TBIL、ALT、AST)、肝脏指数及TNF-α、IL-6水平;HE染色及免疫组织化学染色观察肝血窦内皮细胞、肝中央静脉内皮细胞及肝细胞的损伤情况,Masson染色了解肝脏纤维化的程度。结果:在光学显微镜下可见野百合碱组小鼠肝脏中至重度肝血窦内皮细胞、中央静脉内皮细胞损伤及肝小静脉淤血;Masson染色可见中至重度肝中央静脉、肝血窦纤维化。野百合碱+内皮祖细胞组在光学显微镜下可见小鼠肝血窦内皮细胞和中央静脉内皮细胞损伤;Masson染色可见肝中央静脉和肝血窦纤维化为轻度至中度,肝小静脉淤血减轻。与野百合碱+内皮祖细胞组小鼠相比,野百合碱组小鼠肝脏指数升高,肝功能异常明显,且野百合碱组小鼠的血清TNFα、IL-6表达水平更高。结论:野百合碱诱导的肝血窦内皮及中央静脉内皮细胞损伤是肝静脉闭塞病的始发因素,内皮祖细胞输注可以起到防治肝静脉闭塞病的作用。 展开更多
关键词 肝静脉闭塞病 野百合碱 肝窦内皮细胞 内皮祖细胞
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