肺炎克雷伯杆菌致重症肺炎小鼠模型的建立

目的:建立细菌感染的重症肺炎小鼠模型。方法:将102只雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为对照组(30只)、模型组(72只),气管滴注5×10^(9) CFU肺炎克雷伯杆菌,于造模后第1、2、4、8、14天处死小鼠,考察小鼠的一般情况、体重及死亡率、白细胞及中性粒细胞数、炎症因子水平、肺及心、肝、脾、肾、肠组织病理等。结果:与对照组比较,模型组小鼠造模后6 h~4 d出现呼吸急促、蜷缩聚集等表现且逐渐加重,体重持续下降,第5~14天上述表现逐渐缓解(P<0.01);模型组小鼠第1~8天动脉血氧饱和度持续下降至80.7%(P<0.01),第9~14天逐渐恢复至正常水平;模型组小鼠第1~9天死亡23只,第10天后无死亡,死亡率达31.9%(P<0.01);模型组小鼠第1~2天肺组织炎症细胞浸润、充血水肿明显,第4~8天仍可见较多炎症细胞浸润与肺泡结构紊乱,第14天可见肺泡破裂融合(P<0.05或P<0.01);模型组小鼠第1~8天外周血中性粒细胞数、白细胞数及肺泡灌洗液蛋白含量、总细胞数、中性粒细胞比例及炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);模型组小鼠心、肝组织无明显病理改变,脾、肾、肠组织病理改变明显:脾脏红髓与白髓界线不清,肾小球、肾小管及集合管周围间质明显充血、水肿,结肠黏膜层大量炎症细胞浸润。结论:气管滴注5×10^(9) CFU肺炎克雷伯杆菌诱导肺炎模型小鼠表现出重症肺炎的临床病理改变,可以为重症肺炎的发病机制及药物研究提供有效模型。

Mg-Zn-Ca合金的体外降解行为

背景:鉴于人体复杂的生理环境,目前降解实验中使用的模拟生理体液种类繁多,因此分析Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解行为具有重要意义。目的:研究Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解过程和性能变化,明确Ca含量和模拟体液种类对合金的影响。方法:采用熔融挤压成型工艺制备含钙质量分数分别为0.2%,0.5%,1%的Mg-Zn-Ca合金,依次命名为Mg-Zn-0.2Ca、Mg-Zn-0.5Ca、Mg-Zn-1Ca合金,以Mg-Zn合金作为对照。将每种合金分别置于3种模拟体液(生理盐水、PBS和Hank’s液)中,对合金降解过程中的形貌、成分变化、质量损失、pH值及力学性能等进行表征分析。结果与结论:①随着降解时间的延长,4种合金表面生成了大量的纳米级片层和柱状结构,主要成分是MgO和Mg(OH)2,4种合金在生理盐水中的降解速度最快,在Hank’s液中的降解速率最慢,在生理盐水中的降解速率快慢为:Mg-Zn<Mg-Zn-0.2Ca<Mg-Zn-0.5Ca<Mg-Zn-1Ca,在PBS和Hank’s液中的降解速率快慢为:Mg-Zn<Mg-Zn-0.2Ca≈Mg-Zn-0.5Ca<Mg-Zn-1Ca;②随着降解时间的延长,4种合金都有一定的质量损失,其中在生理盐水中降解最快,在Hank’s液和PBS中降解缓慢,并且在相同模拟体液中,随着合金中钙含量的增加,合金的腐蚀速率明显加快;③4种合金降解环境pH值的上升主要集中在1 d内,之后趋缓,在PBS中的pH值上升幅度较其他两种模拟体液大,并且在相同模拟体液中,随着合金中钙含量的增加,降解环境pH值上升显著;④在初始状态下,各Mg-Zn-Ca合金的弹性模量均高于Mg-Zn合金;置于模拟体液中后,随着降解时间的延长,4种合金的弹性模量均有所降低,其中在生理盐水中降低最明显;⑤结果显示,Ca加入改善了Mg-Zn合金的力学性能,少量Ca不会加快合金的降解速率,但过量Ca加快了合金的降解速率,降解过程中生理盐水模拟体液对合金力学强度的影响最显著。

一种利用Tol2转座子快速获得牙鲆稳转细胞的方法

脂质体转染是分子生物学中研究基因功能和基因表达调控的常规手段。然而,在海水硬骨鱼细胞中,脂质体转染效率低下且很难通过转染后直接筛选的方式获得稳转细胞。本研究以pminiTol2为模板,在末端反向重复序列中间添加了CMV启动子、EGFP荧光蛋白、新霉素抗性基因等功能区域,构建了CMV-EGFP-pminiTol2重组载体。CMV-EGFP-pminiTol2和pCS-TP质粒经脂质体包裹共转染至牙鲆(Paralichthys olivaceus)卵巢颗粒细胞后,仅需2~3周的新霉素(G418)筛选即可获得稳定转染的细胞。本实验首次探究了利用Tol2转座子系统快速筛选获得牙鲆稳转细胞的方法,其研究成果可应用于牙鲆分子生物学研究,并为其他硬骨鱼类稳转细胞构建及筛选提供新思路。

市场生物安全监管中的现场快速检测技术应用分析

市场流通领域生物安全是国家整体生物安全的重要部份。流通领域各环节的生物安全风险因子,对我国农业、畜牧业和人民的健康和生命安全造成巨大威胁。针对流通领域生物风险,及早发现、尽快处置,是生物安全风险防控的必然要求。现场快速检测技术检测周期短、费用低、操作简单,在应对市场生物安全事件和市场监督管理中具有重要意义。

草履虫食物泡快速观察实验改良

“观察草履虫食物泡”是重要的动物学基础实验,快速观察到食物泡的形成、融合、排出代谢废物,是高效完成实验教学的关键.实验中用牙签蘸取墨汁喂食草履虫,最快15 s即可观察到食物泡的形成,食物泡从延长的胞咽处脱离,在伸缩泡的推动下向虫体前端运移,并逐渐融合,当食物泡再次运移到虫体后端胞肛处,食物泡破裂并将食物残渣一次性排出,排泄物呈粉状.改进后的实验提高了效率,增强了学生的感官认知、激发了学生探索的动力.

基于激光扫描共聚焦显微镜的蛋白质相分离研究方法

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)具有高分辨率、高对比度和可定量测量等优势,其在细胞及组织成像等方面的广泛应用极大地推动了生命科学领域的发展。相分离的研究极度依赖显微成像技术,本文着重总结了基于激光扫描共聚焦显微镜的相分离研究方法,并探讨了相分离研究的难点,为相关研究人员了解蛋白质相分离及显微镜在相分离领域的应用提供了参考,也为开展相分离研究提供了技术依据。

一种适宜高通量基因型鉴定的植物组织取样法及其应用

高效快速植物基因型鉴定是现代分子育种及分子生物研究中基因定位与克隆的前提条件,因而快速且高通量的取样技术有利于建立高效快速植物基因型鉴定技术体系。随着高通量测序技术的飞速发展,可对重要遗传材料进行重测序来进行全基因组范围内基因型鉴定,但因成本及鉴定周期等限制,该技术尚难应用于大群体遗传材料的图位克隆及基于基因型鉴定的分子育种。虽然目前已有多种不同的植物叶片取样方法、DNA提取方法,但步骤繁琐,耗时较长,或所需要特殊的仪器设备,其效率并不能满足现代高通量的技术需求。本研究以外直径为3.0 mm的塑料圆管结合木质牙签为简易的取样器,将大豆叶片均匀准确地取样至384深孔微孔板,同时优化了配套的DNA提取方法与步骤,建立了一整套的高效大豆植株基因型鉴定流程。本鉴定技术体系可大大提高工作效率,缩短鉴定周期。应用该技术流程,成功地对杂合型洐生后代群体1150个植株个体进行了基因型鉴定,确定了与黄化突变相关分子标记之间的联系,为进一步精细定位与克隆控制黄化突变基因奠定了基础。本研究所建立的植物组织高效取样法及基因型鉴定流程可扩展应用于水稻、玉米等多种作物的基因克隆研究与分子育种中。

3D细胞培养在细胞生理学研究中的应用进展

3D细胞培养技术是生命科学中发展最快的实验技术之一。随着细胞成像和数据分析的发展以及新的细胞支架的使用,3D模式逐渐成为主流的细胞培养方式。这种培养已被证明更接近体内细胞的原始状态,能为很多研究提供有价值的细胞材料。通过介绍现阶段3D细胞培养方法、优势、现有的支架材料以及在模拟生理学相关进程中的应用,为未来的细胞生理学研究提供参考。

不同水解方法对植物叶片结合氨基酸测定影响分析

为建立植物叶片结合氨基酸(bound amino acid,BAA)适宜检测方法,试验采用全自动氨基酸分析仪对4种植物叶片BAA进行测定:zuixinZG二极管,钠体系色谱柱(125 mmHR),柱后衍生光度法,570 mm/440 nm,单点校正。研究常规盐酸水解法、苯酚+盐酸水解法、β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,BME)+盐酸水解法、过甲酸氧化法对植物叶片17种BAA及其总量的影响。结果表明:过甲酸氧化法适合用于水稻和小麦叶片含硫氨基酸测定;BME+盐酸水解法适合用于4种植物叶片BAA测定。采用BME+盐酸水解26 h,植物叶片中多数极性正电和非极性氨基酸含量达到最大值;添加0.80%BME,植物叶片中极性正电氨基酸、负电氨基酸、中性氨基酸中的酪氨酸、胱氨酸及大部分非极性氨基酸含量达到最大值。该方法操作简单、重复性强、稳定性高,适合用于植物叶片BAA的检测。

琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化

对影响琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的四个主要因素:琼脂浓度、Tween20、培养温度、预培养进行了研究。结果表明,0.75%琼脂的效价检测培养基、0.5% Tween20的添加以及30℃培养条件,可提高乳链菌肽效价测定的灵敏度和精确性;4℃预培养有利于乳链菌肽在琼脂中的扩散。

重庆地区7种生物质的成分分析及热重实验

对重庆地区的玉米秆、玉米芯、高梁秆、稻秸、麦秸、黄桷树、竹子等7种生物质进行了工业成分分析与干基化学组成分析,并用热重分析仪对7种生物质的热解特性进行了热重实验.通过对热失重曲线分析,研究了生物质种类、加热速率、样品粒径、压力对生物质热解特性的影响,得到了最大热解速率对应温度及反应活化能、频率因子等热解反应动力学参数.

天津大港近岸海域生物体内重金属、石油烃含量及其安全风险评价

于2010年11月对天津大港近岸海域生物样品中重金属及石油烃的质量比进行了调查研究,并运用金属污染指数法分析了各种生物体内重金属污染程度的差异。各类生物体内重金属污染程度从高到低为毛蚶、口虾蛄、扁玉螺、鹰爪虾、短蛸、鱼、日本鲟。综合国内现有的海洋生物污染标准,如海洋生物污染评价标准、人体消费卫生标准、无公害食品水产品中有毒有害物质限量及海洋贝类生物质量标准等,选用各类标准中污染因素的最低限值,运用单因子污染指数法对生物体重金属和石油烃污染进行安全评价。结果表明,该海域海产品主要受到Pb、Cd的污染,并且在各类海洋生物体中,毛蚶受这两种元素污染较严重,应当引起足够的重视。

微生物传感器测定河豚毒素研究

以地衣芽孢杆菌、假单胞菌和枯草芽孢杆菌为识别元件,采用夹层法固定化微生物膜与氧电极组成毒性微生物传感器,实验了3种不同菌株生物传感器对河豚毒素的响应能力,得出对河豚毒素敏感的微生物菌株为地衣芽孢杆菌。实验得出地衣芽孢杆菌传感器最佳工作条件为pH=7.76,温度35℃,底物GGA质量浓度为21.5 mg/L。在此条件下传感器对河豚毒素响应的标准曲线y=0.0025x＋0.0122,线性范围为10-100μg/mL,相关系数0.9776。

气相色谱质谱联用技术在海面溢油事故鉴别中的应用--案例分析

通过对中国近海海域一个具体海面溢油事例的研究,提出了通过气相色谱及气质联用技术进行海面溢油鉴别的方法。采用GC-FID对油样中的正构烷烃的主要组分进行定性分析,利用GC-MS对油中难降解的生物标记化合物：霍烷及其他五环三萜类化合物、规则甾烷及重排甾烷类化合物、三芳甾类化合物、多环芳烃进行分析,计算相应的比值并采用“t-分布”方法进行溢油样品和可疑溢油源样的相关分析。结果如下：（1）从GC-FID色谱图可以看出,YY2679与KY0631、KY0632的色谱图极其相似,与其余四个可疑油源的色谱图差异较大。六个可疑油源的R值在0.04～1.95之间,只有KY0631和KY0632的R值小于0.1,KY0633～KY0636与YY2679的差异不是由风化引起的,可以排除,由此可以推断出YY2679溢油样品可能来源于KY0631或KY0632两个可疑溢油源。（2）采用21个生物标志物指标进行相关性判别,KY0631可疑溢油源在比值点的区间范围为95%和98%时,有多个点x或y误差棒均未跨过直线y=x。KY0632可疑溢油源在比值点的区间范围为95%时,各点的x或y误差棒均跨过直线y=x,由此推断YY2679溢油样品和可疑油源KY0632是同一油源。

微卫星的构成及其检测技术

微卫星标记是近几年来发展起来的一种新型分子标记,由于其具有检测方便,多态性高、共显性遗传、符合孟德尔遗传定律、重复性好等优点,所以在动物遗传育种中作为标记辅助选择的手段日益得到广泛关注。试就微卫星的构成及特点、以及检测技术及应用作一综述,旨在为该技术的推广应用提供理论依据。

北戴河近岸沉积物中微生物16SrDNA的PCR-RFLP分析

采用间接法提取了北戴河地区近岸沉积物中微生物的总DNA,以细菌的通用引物27F和1492R扩增16S rDNA片段,将扩增产物克隆到T-载体上,并转化大肠杆菌感受态细胞,构建沉积物中细菌16S rDNA克隆文库。PCR扩增基因文库中插入的16S rDNA外源片段,用两种限制性内切酶HhaI和RsaI分别酶切,获得该海洋沉积物131个克隆的酶切指纹图谱。结果表明:HhaI和RsaI联合酶切产生了41个基因分型,文库的覆盖度达74.81%,HhaI和RsaI单酶切产生的基因分型分别为30和22,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在一种优势类群,占总克隆的23%。16S rDNA测序结果表明:北戴河近岸沉积物中的细菌在分类方面主要属于α-和γ-变形杆菌亚门。

抗坏血酸-钼蓝分光光度法测定海藻中磷的研究探讨

常规的测磷方法显色时间缓慢,效果不明显,易受环境等因素的影响且不稳定。本文选用湿法消解海带标准样品,并通过多组试验对比,利用抗坏血酸-钼蓝分光光度法(改良的亚硫酸钠还原法)对海带标准样品中总磷进行测定,同时对加剂顺序、显色时间、显色温度及其他可能影响显色效果的因素进行了探讨。试验结果表明,该法显色快速,操作简便,颜色稳定,是一种快速、准确的试验方法;同时不受盐度的影响,适用于海藻中总磷的测定。

我国东海和南海近岸海域麻痹性贝类毒素污染状况

于2007年11月至2008年10月在深圳罗湖水产批发市场定期采集产自我国东海和南海海域的主要市售贝类,运用小白鼠生物法进行麻痹性贝类毒素污染状况调查.结果表明:在所调查的13种贝类中,只有华贵栉孔扇贝染毒,检出率为75%,毒性值均较低,最高值出现在2007年11月27日产自湛江的样品,达到2.57 Mu/g,无超标.在时间分布上,该种贝类全年都含有毒素,表现出冬、春季染毒率较高,夏、秋季染毒率比较低的季节特点.广东沿海贝类毒素的检出率为25.4%,主要分布在南澳和湛江海域,含量范围介于0.31～2.57 Mu/g.福建沿海的贝类毒素检出率为53.9%,含量范围介于0.35～0.96 Mu/g.广西沿海的贝类样品未检出PSP.

DNA分子标记技术在中草药鉴别中的应用

DNA分子标记技术以其特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点为中草药鉴别开辟了新的道路.RFLP,RAPD,AFLP,DNA序列分析等DNA分子标记技术已经在该领域被广泛研究,并且取得了可喜的成绩.介绍了这几种技术的原理和特点,概括了近年来的应用进展,并对前景进行了展望.

磷钼蓝光度法测定海藻中磷的含量

采用对P的特异性高、共存离子干扰小、显色稳定的钼蓝分光光度法，以抗坏血酸作为还原剂，通过在酸性条件下PO4^3-与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，并经对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物一钼蓝，在其最大吸收波长660nm条件下，对海带标准样品进行了测定。该方法所用试剂少、操作简便、测定速度快，测定结果精度高、准确度好，回收率为99．1％-100．5％，是一种简便、快捷测定海藻体内总磷含量的方法。