日本鳗鲡胶原蛋白和小清蛋白的过敏原性

以日本鳗鲡皮与肌肉组织为研究对象,采用碱溶、酸溶、盐析、冻干等方法纯化得到胶原蛋白,采用加热、饱和硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析等方法纯化得到两种亚型的小清蛋白(PV-Ⅰ和PV-Ⅱ),纯化的目标蛋白经动物特异性抗体的免疫印迹实验确证。酶联免疫吸附测定和免疫印迹分析结果显示,纯化的胶原蛋白和小清蛋白分别与鱼类过敏患者阳性血清发生特异性反应,且二者之间无免疫交叉反应。体外模拟胃液消化实验和SDS-PAGE分析结果显示,胶原蛋白和小清蛋白均具有较高的消化稳定性。结果提示,日本鳗胶原蛋白和小清蛋白具有较高的消化稳定性和免疫原性,二者可引发不同患者的IgE介导特异性超敏反应。

胶原蛋白的制备及用作生物医用材料的研究进展

对动物结缔组织中重要的结构蛋白质——胶原蛋白提取、纯化的研究进展及其作为生物医用材料的新应用进行了综述。

草鱼鱼鳔胶原性质的研究

为了有效利用鱼类废弃物,从草鱼鳔中提取酸溶性胶原(ASC)和酶溶性胶原(PSC)并对其部分性质进行研究。ASC和PSC的提取得率以干基计分别为4.7%和11.1%;ASC和PSC的紫外光谱表明,最大吸收峰都接近于230nm;氨基酸组成分析表明,ASC和PSC中羟脯氨酸和羟赖氨酸的总含量分别为16.87%和17.55%;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱显示草鱼鳔胶原至少由两条不同的α链(α1和α2)组成,与I型胶原相似;ASC和PSC热变性温度(Td)分别为33.0、34.8℃,比猪皮胶原的热变性温度(37℃)低3～4℃。结果表明,草鱼鳔胶原有可能替代或作为补充陆生动物胶原广泛应用于工业领域。

丝素蛋白多孔材料及其在组织工程领域的应用

讨论丝素蛋白纤维多孔材料、再生丝素蛋白多孔材料以及丝素蛋白非织造状纳米纤维多孔材料的制备方法和材料性能。认为丝素蛋白多孔材料具有合适的孔径结构和良好的生物相容性,多种组织或器官的细胞可在这些材料上黏附和增殖。综述丝素蛋白多孔材料作为一种优良的组织工程支架材料,在人工皮肤、骨、软骨、人工肌腱和韧带等组织工程领域的应用情况。

鱼皮胶原蛋白的纯化及酶解性质的研究

分别对鲨鱼、鲢鱼、草鱼、罗非鱼鱼皮的胶原蛋白进行提取、纯化并进行SDS PAGE电泳分析,对它们的酶解性质进行研究.结果表明,提取的胶原蛋白有较高纯度,是典型的I型胶原蛋白.4种鱼皮胶原蛋白均能被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,两种酶酶切位点有差异.不同鱼种鱼皮胶原蛋白的一级结构不同.本实验的酶解条件是适宜的.

草鱼皮酸溶性和酶溶性胶原蛋白的提取及性质

本文研究了从草鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC)及其部分性质。草鱼皮中ASC和PSC的提取得率以干基计分别为8.0%和18.6%;对草鱼皮ASC和PSC的紫外光谱分析,最大吸收峰都接近223nm;SDS-PAGE电泳图谱显示草鱼皮胶原蛋白是由两条不同的α链组成,分子量都在100kDa以上,与猪皮I型胶原蛋白相似;草鱼皮ASC和PSC热变性温度分别为33.8、34.5℃,只比猪皮的热变性温度(37℃)低3℃左右。结果表明草鱼皮胶原蛋白在功能食品、医药、化妆品、制药等方面有潜在的应用。

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原（胶原蛋白）,依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液（胃蛋白酶）消化15min出现较为明显的降解,消化1h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰蛋白酶）消化30min出现较为明显的降解,消化3h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液（胰凝乳蛋白酶）消化1～4h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.

可溶性Ⅱ型胶原蛋白提取纯化条件的研究

目的优化实验条件,建立提取纯化可溶性Ⅱ型胶原蛋白(solublecollagentypeⅡ,SCⅡ)的可靠方法。方法选择鸡胸箭突软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖,对胃蛋白酶的消化方式、氯化钠盐析浓度、DEAE阴离子树脂种类进行研究。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析对SCⅡ进行鉴定。结果4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖,分二步加入胃蛋白酶的消化结果满意,氯化钠盐析浓度为2.4mol/L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的SCⅡ与Sigma公司的产品一致,SCⅡ最大吸收峰为230nm,在检出的15种氨基酸中甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论改进后的方法具有材料广泛、实验条件简便、结果可靠等优点,适用于科研、临床各种规模SCⅡ的提取。所得产品纯度高、符合II型胶原的特征。

纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究

目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。

原子力显微镜研究鱼鳞胶原蛋白的溶液聚集行为

用原子力显微镜(AFM)考察了样品质量浓度、溶液pH及温度对鱼鳞胶原蛋白溶液聚集态的影响。结果表明,在pH2.7的醋酸溶液中,当鱼鳞胶原蛋白质量浓度为10μg/mL时,鱼鳞胶原蛋白主要以单体和线性小聚集体形式存在,随着质量浓度继续增大,胶原分子开始自组装形成网状结构,当质量浓度达到4 mg/mL时,形成无规线团结构;而在pH7.2的Tris-HC l溶液中,即使在10μg/mL的低质量浓度下,鱼鳞胶原蛋白也能自组装成不规则的片状聚集体,并通过横向融合形成多孔网状结构。随着质量浓度的增大,纤维直径和高度明显增加;鱼鳞胶原蛋白在40℃处理1 h,其聚集行为发生明显改变,聚集体由线性变为球状;当处理温度升至80℃时,其高级结构基本被破坏,AFM图像上只可见少许不规则分布的团状聚集体。

纤维蛋白止血敷料的止血效果

目的评价纤维蛋白止血敷料对股动脉切口和肝脏损伤出血模型的止血效果。方法制造大鼠股动脉切口出血模型和兔肝脏损伤出血模型,分别用纤维蛋白止血敷料和医用胶原蛋白海绵进行止血,记录止血时间和出血量。结果对大鼠股动脉切口模型,纤维蛋白止血敷料止血时间为(90.60±33.12)s,出血量为(0.51±0.26)ml,医用胶原蛋白海绵止血时间为(164.20±53.70)s,出血量为(1.04±0.50)ml,二者差异有统计学意义(P<0.05);对兔肝损伤模型,纤维蛋白止血敷料止血时间为(48.67±8.14)s,出血量为(0.82±0.09)ml,医用胶原蛋白海绵止血时间为(107.67±6.66)s,出血量为(1.07±0.13)ml,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论纤维蛋白止血敷料的止血效果优于医用胶原蛋白海绵,是一种良好的止血材料。

东北林蛙皮中胶原蛋白含量的测定及提取工艺

为了充分利用东北林蛙资源,利用羟脯氨酸法对废弃的林蛙皮肤进行了胶原蛋白的提取试验,测定了林蛙皮肤中总胶原蛋白的含量,并对提取方法进行了优化。酸、酶提取对比试验表明:加入胃蛋白酶后提取率明显提高;通过酶的正交试验,确定出最佳提取条件为37℃、72h、30mg胃蛋白酶;以最佳条件提取胶原蛋白,并经盐析、透析和真空冷冻干燥,得到海绵状的胶原蛋白产品,含量检测表明成品的收率为15%,纯度为54.1%。

牛肉盐溶蛋白质热诱导凝胶特性研究

实验以牛背最长肌为材料,采用L9(34)正交设计研究了MgCl2、NaCl和pH值对盐溶蛋白质热诱导凝胶特性的影响。研究表明,在0.01mol/L MgCl2-0.6mol/L NaCl-pH值7.0条件下牛背最长肌盐溶蛋白质热诱导凝胶保水性最好,为92.25%,破断应力最高,为14.00kPa。NaCl浓度和pH值对凝胶保水性和凝胶强度均有显著影响(p<0.01)。MgCl2仅对凝胶破断应力影响较大。凝胶的超微结构分析表明,保水性高的凝胶的网络结构比较致密,大量的微细孔洞均匀分布。保水性低的凝胶的网络结构中线条多呈束状、结构粗糙、不均匀。

抗角蛋白Fab抗体在大肠杆菌中的表达与复性研究

目的 :用大肠杆菌分别表达抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段 ,体外复性得到Fab抗体。方法 :从已构建的质粒p3MH/Fab中 ,亚克隆抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段基因 ,并分别插入载体pET32a中 ,构建重组质粒。以重组质粒分别转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下进行表达。SDS PAGE分析发现 ,在相对分子量 (Mr)为 2 5 0 0 0处有外源蛋白表达。轻链和Fd片段变性后等量混合于折叠液中 ,复性后形成Mr 约为4 5 0 0 0的蛋白。结果 :成功地表达抗角蛋白抗体的轻链和Fd片段 ,ELISA和Westernblot证实 ,复性产物具有与角蛋白结合的能力。结论 :获得了具有活性的抗角蛋白的Fab抗体 ,为其应用研究打下了基础 ,也表明包涵体表达基因工程抗体技术是可行的。

c-Fos和巢蛋白在鼠胚肺内的表达及缺氧对其影响

目的探讨胚胎大鼠肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达及宫内缺氧对其表达的影响。方法将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚肺组织经c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析。结果对照组肺组织c-Fos有弱表达,肺内支气管上皮有较强的巢蛋白表达;缺氧组肺组织c-Fos表达增强(P<0.05),肺内支气管上皮巢蛋白表达明显增强(P<0.05),且肺内支气管上皮以外肺组织也有巢蛋白表达。结论正常鼠胚肺组织内有c-Fos和巢蛋白表达,且巢蛋白的表达只在肺内支气管。缺氧可刺激鼠胚肺组织内c-Fos和巢蛋白的表达。

MicroRNA-25对大鼠骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡调节作用

探讨miR-25对白细胞介素1β(IL-1β)促进OA软骨细胞凋亡和增殖的影响。以木瓜蛋白酶膝关节腔注射诱导骨性关节炎动物模型和SD大鼠骨性关节炎软骨细胞原代培养。IL-1β体外刺激OA软骨细胞,模拟骨性关节炎体外环境。MiR-25mimic或inhibitor转染至OA软骨细胞。利用Annexin V-FITC/PI和CCK-8法检测软骨细胞细胞凋亡和细胞增殖。miR-25过表达明显抑制软骨细胞凋亡而miR-25低表达促进软骨细胞凋亡(P<0.05);miR-25 mimic促进软骨细胞增殖,而miR-25 inhibitor抑制软骨细胞增殖(P>0.05)。miR-25介导OA发病发生,进展中发挥着保护性调节作用,抑制OA软骨细胞凋亡和促进其增殖作用,可能对OA发病机制有新的认识和提示OA新治疗策略。

鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究

以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链(α1与α2)、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示:2种蛋白质的pH值稳定性相似;胶原蛋白的热稳定性不如小清蛋白,但比小清蛋白更耐胃蛋白酶消化;在高温高压处理下,胶原蛋白明显降解,小清蛋白则出现了降解与聚合2种情况.应用8份鱼类过敏患者血清的酶联免疫吸附测定实验结果显示,小清蛋白对6份血清有特异性IgE反应,胶原蛋白对3份血清有特异性IgE反应.Dot-blot实验结果显示,胶原蛋白与鱼类过敏患者血清出现了特异性的杂交显色斑点.与小清蛋白相似,鲤鱼胶原蛋白具有特异的IgE结合活性,提示其是一种潜在的过敏原.

胶原蛋白在临床医学中的应用

胶原蛋白是一种天然存在的具有很高利用价值的生物物质,其特有的极低的抗原性、可生物降解性、生物吸收性、止血性能和促进细胞生长的功能,使得近年来在医药工业和医学临床的研究和应用日益广泛。本文在简述胶原蛋白特性与制备工艺的基础上,较为详细地介绍了胶原蛋白在烧伤、烫伤、止血和眼科治疗及其组织工程中的应用和进展。

利用膦鞣革屑制备胶原蛋白类除醛剂

以有机膦鞣革屑为原料,采用碱-酶两步法提取胶原蛋白,单因素实验结果表明:在m(氧化镁)∶m(革屑)=0.06∶1,反应温度70℃,反应时间2.5 h,m(碱性蛋白酶)∶m(革屑)=0.006∶1的条件下,提胶率达88%。采用多媒体显微镜、红外光谱仪以及凝胶渗透色谱仪对最优条件下提取的胶原蛋白进行了结构分析,并与市售的明胶水解产物做了分析对比。结果表明:提取的胶原蛋白与市售的明胶水解产物的谱图基本一致,市售的明胶水解产物的平均相对分子质量为1 346和564,而提取的胶原蛋白的平均相对分子质量较大,为1 928和755,说明提取的物质为胶原多肽和氨基酸的混合物。应用实验结果表明:当胶原多肽溶液的用量为80 mL/m3时,甲醛去除率可达81%。