无脊椎动物脂肪酸结合蛋白的研究进展

脂肪酸结合蛋白(Fatty acid binding proteins,FABPs)是一类来自共同祖先基因的小分子蛋白,广泛存在于动物肠道、心脏、脑、脂肪和肌肉等多种组织中,能特异性结合脂肪酸并将脂肪酸输送到过氧化物酶体、线粒体和细胞核等细胞器中,进而调控脂肪酸氧化和甘油三酯及磷脂合成等脂代谢过程。文章通过综述FABPs的分类、结构特征、生物学功能及典型无脊椎动物(原生动物、节肢动物、软体动物和棘皮动物)FABPs的研究进展,发现无脊椎动物的FABPs分子结构缺少糖、水分子、氨基和巯基等官能团,其功能更具复杂性,且主要与生长发育及脂肪酸转运等相关。相对于脊椎动物,无脊椎动物的FABPs研究尚处于起步阶段,今后需要进一步探究其基因结构、蛋白构造及其生物学功能等,包括如FABPs作为脂肪酸的细胞内载体以确定无脊椎动物特定膜供体和受体位点的识别,阐明FABPs分子结构是否具有捕获或释放配体的构象能力,分析配体结合特异性应与β-桶折叠定义空腔表面涂层的理化特性关系,以及不同类型FABPs是否具有不同的结构特点及生物学功能等。此外,从无脊椎动物分离获得的某些FABPs对生物疫苗制备具有一定促进作用,因此可应用于水产动物育种和代谢性疾病防治等生产实践中,为当前集约化养殖模式下的生物营养代谢性疾病预防和治疗提供新的视角。

白藜芦醇苷通过上调SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞增殖和炎性因子表达

目的观察白藜芦醇苷对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞(MDM)炎性增殖与细胞因子表达的影响及机制。方法培养THP-1巨噬细胞,分为对照组(仅加入普通培养基)、ox-LDL组(80μmol/L ox-LDL处理细胞24 h)、白藜芦醇苷处理组(100μmol/L白藜芦醇苷预处理2 h后,再加入80μmol/L ox-LDL处理24 h)、EX-527组(10μmol/L EX-527预处理细胞2 h)。CCK-8法检测各组细胞增殖率,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)含量,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测活性氧(ROS)的含量;实时定量PCR法检测白藜芦醇苷对组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA水平的影响,Western blot法检测SIRT1、MCP-1、TNF-α、IL-6的蛋白水平。结果 ox-LDL促进THP-1巨噬细胞增殖。100μmol/L白藜芦醇苷组明显抑制ox-LDL诱导的细胞增殖,同时明显增加SOD含量,降低胞内MDA与ROS含量。ox-LDL抑制THP-1巨噬细胞中SIRT1 mRNA与蛋白表达,促进MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达。白藜芦醇苷显著增加ox-LDL诱导后SIRT1 mRNA与蛋白表达,抑制MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达,EX-527能抑制白藜芦醇苷上述保护作用。结论白藜芦醇苷可通过上调SIRT1表达提高抗巨噬细胞增殖的能力,减少ox-LDL诱导细胞内活性氧生成、抑制炎性因子表达。

两步超速离心法快速分离大量血浆极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白

本法先使血浆中的脂蛋白快速富集浓缩，再将脂蛋白各组份分离纯化。即具备序列漂浮法分离样品量大的长处，又具有密度梯度法离心时间短的优点。使用ＢＥＣＫＭＡＮＬ８－８０Ｍ型超速离心机，Ｔｙｐｅ７０Ｔｉ转头，分离２８０ｍｌ血浆只需超速离心５ｈ。所得极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及低密度脂蛋白（ＬＤＬ）经琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳（ＰＡＧＥ）及载脂蛋白ＳＤＳ－聚丙烯酰胺电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）鉴定纯度良好。本文为超速离心分离制备大量血浆ＶＬＤＬ、ＬＤＬ提供了一种快速、经济的新方法。

氧化低密度脂蛋白循环免疫复合物诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积

目的:探讨氧化、天然低密度脂蛋白循环免疫复合物(Ox -LDL- IC)致动脉粥样硬化作用。 方法:采用人源的氧化、天然LDL与异源的抗载脂蛋白B(apoB)结合制备IC,观察不同浓度的Ox- LDL -IC对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和泡沫细胞形成的影响。 结果:氧化、天然LDL- IC均可引起巨噬细胞内胆固醇酯大量堆积,其效果强于Ox -LDL(P<0. 001),而且随剂量的增加而升高,并转化为泡沫细胞;而天然LDL、抗apoB处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的堆积。 结论:LDL- IC可导致巨噬细胞转化为泡沫细胞,参与动脉粥样硬化的形成。

甘草的药理作用概述

通过对国内外期刊中有关甘草药理作用的文献进行查阅,综述了甘草具有肾上腺皮质激素样作用、抗消化性溃疡、解痉、抗炎及免疫抑制作用和解毒、抗病毒、镇咳祛痰、抗肿瘤、抑菌、防治肝损害、抗衰老、抗心律失常、抑制气道平滑肌细胞增生、降血脂与抗动脉粥样硬化等药理作用,其临床应用有广阔的前景。

改良沉淀法快速分离制备人血清低密度脂蛋白

改良沉淀法快速分离制备人血清低密度脂蛋白姜远英曾华武△李全力董崴龙血清低密度脂蛋白（ＬＤＬ），特别是氧化修饰ＬＤＬ（ｏ－ＬＤＬ）是重要的致动脉粥样硬化（ＡＳ）因子［１］。深入研究ＬＤＬ，ｏ－ＬＤＬ的细胞生物学效应及ｏ－ＬＤＬ的产生机制具有重要意义。...

麦胚黄酮抗动脉粥样硬化体内机制的研究

研究不同剂量的麦胚黄酮(Flavonoids of Wheat Germ)对高脂血症大鼠血清和肝脏中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肝体比值以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和脂质过氧化物(LPO)的影响。结果表明,麦胚黄酮可明显地降低大鼠血清和肝脏中TC、TG的含量(P<0.01,P<0.05),提高HDL-C的含量(P<0.01),另外,麦胚黄酮对高脂血症大鼠具有较强的抗氧化作用,能显著降低血清和组织中LPO含量(P<0.01),提高SOD和GSH-Px的活性(P<0.05)。提示,麦胚黄酮具有治疗和预防动脉粥样硬化的作用。

植物油体及其相关蛋白的研究进展

油体是植物种子贮脂的亚细胞颗粒,作为植物体中最小的细胞器贮存脂类(主要为三酰甘油),为随后的生命活动及活跃的代谢过程提供能量。油体结合蛋白是依附于油体表面的一类蛋白质,包括油质蛋白、油体钙蛋白、油体固醇蛋白-A和油体固醇蛋白-B。本文综述了植物油体的亚细胞结构、化学组成、大小及其类型,油体结合蛋白的结构特征与功能及其编码基因的表达调控等的研究进展。讨论了植物油体作为一种新型植物生物反应器在生物工程上的应用前景和存在的问题。

北京自然人群载脂蛋白E基因多态性频率分布研究

应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性技术 (PCR RFLP) ,以北京自然人群为基础 ,采用分层随机抽样的方法进行横断面研究 ,对 1 0 46人进行apoE基因分型 ,并分析不同特点人群apoE基因频率分布特点。结果表明 :1 )本组人群ε2、ε3、ε4基因频率分别为 9.1 %、81 .2 %和 9.7% ,男女和各年龄组间基因频率无显著差异 ;2 )与欧美国家相比 ,本组人群ε2基因频率增高 ,ε4频率减低 ,与日本人群相比也有相同趋势 ;3 )在空腹血糖受损及糖尿病人群中ε2频率明显增高 ;4)在高胆固醇血症人群中ε2频率减低。

氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2和9表达的影响

为探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的作用是否与基质金属蛋白酶表达活性改变有关 ,应用Northernblot、Dotblot、Westernblot和明胶酶图分析方法观察氧化型低密度脂蛋白对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶 - 2和 9的影响。结果显示 ,10mg/L氧化型低密度脂蛋白作用于血管平滑肌细胞 2 4h ,可明显增强基质金属蛋白酶 - 2和 9mRNA表达、蛋白分泌和酶的活性 ,高浓度的氧化型低密度脂蛋白对基质金属蛋白酶 - 2和 9表达的影响不同 ,氧化型低密度脂蛋白浓度为 5 0mg/L时 ,基质金属蛋白酶 - 9表达活性仍然高于对照细胞 ,但与 10mg/L氧化型低密度脂蛋白的作用强度无显著差别 ;相同条件下 ,基质金属蛋白酶 - 2的基因表达和蛋白分泌明显降低。以上结果提示 ,氧化型低密度脂蛋白可诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶 - 2和 9的表达 ,并可促进细胞外基质降解。

脱氢表雄酮对血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响

目的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)是成人体内最为丰富的来源于肾上腺的甾体激素,文中探讨DHEA对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)所致血管内皮细胞损伤后单核细胞与内皮细胞相互作用的影响。方法以培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入ox-LDL或在试验体系中加入不同浓度的DHEA,测定人单核细胞系U937与HUVEC的黏附,检测内皮细胞条件培养基中一氧化氮(nitric oxide,NO)及单个核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量,应用流式细胞仪检测内皮细胞表面黏附分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascularcell adhesion molecule-1,VCAM-1)及E-选择素的表达。将内皮细胞条件培养基作用于U937细胞,应用RT-PCR检测U937细胞CCR2、LFA-1以及VLA-4 mRNA的表达。结果 DHEA可明显抑制单核U937细胞与内皮细胞之间的相互黏附,明显促进内皮细胞NO合成,抑制MCP-1分泌,降低内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1的表达,且经DHEA作用后的内皮细胞条件培养基可明显抑制单核U937细胞CCR2、淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte function-associated antigen,LFA)-1以及非常晚期抗原(very late antigen,VLA)-4 mRNA的表达。结论 DHEA可通过抑制内皮细胞分泌趋化因子、下调内皮细胞表面黏附分子的表达,抑制内皮细胞对单核细胞的趋化及相互黏附,据此认为DHEA可能对血管内皮细胞具有保护作用。

天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白促进动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA

目的 :探讨天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白 (n -LDL ,n -VLDL ,ox -LDL ,ox -VLDL)是否能促进培养的动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 (MIP) 1αmRNA。方法 :将培养的兔主动脉平滑肌细胞暴露于上述 4种脂蛋白后 ,分别用原位分子杂交法及逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测其MIP - 1αmRNA的表达。结果 :培养的兔主动脉平滑肌细胞能表达低水平的MIP - 1αmRNA ,4种脂蛋白均能增强平滑肌细胞表达MIP - 1αmRNA ,氧化型脂蛋白作用强于天然型脂蛋白 ,其中又以ox-VLDL作用最强 ,组间差异有极显著意义 (P <0 0 1)。结论 :n -LDL ,n -VLDL ,ox -LDL和ox -VLDL可能通过诱导平滑肌细胞表达MIP - 1α ,从而在动脉粥样硬化早期病变的形成中起重要作用。

紫丁香叶提取物对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

采用沉淀法从猪血中提取LDL,通过硫酸铜对LDL的诱导氧化修饰,研究了紫丁香叶提取物在不同添加量时对LDL氧化修饰的抑制作用。结果表明,紫丁香叶提取物在LDL的诱导氧化过程中,对MDA、脂褐素的生成有很好的抑制作用,可降低LDL相对电泳迁移率,且抑制作用随着紫丁香叶提取物添加量的增加而增强。

低密度脂蛋白诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性的研究

目的 :研究低密度脂蛋白 (LDL)与巨噬细胞髓过氧化物酶 (MPO)活性的关系。方法 :LDL诱导培养的小鼠腹水巨噬细胞 ,用MPO催化底物邻联二茴香胺氧化的方法测定MPO活性 ;以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)的方法检测MPO基因的表达 ,借此观察LDL与MPO活性的关系。结果 :LDL可以促进巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性升高 ,但远比细菌脂多糖 (LPS)的作用小 ;氧化型低密度脂蛋白 (OX LDL)没有此作用 ;随着LDL作用时间的延长巨噬细胞内及分泌的髓过氧化物酶活性逐渐升高 ,但随着LDL浓度的增加髓过氧化物酶基因的表达达到最大值后便维持该水平而不再随LDL浓度的变化而变化。结论 :LDL非特异性地诱导巨噬细胞MPO活性升高以及分泌增强 ,加强自身的氧化吸收 ;MPO活性升高的原因可能主要为巨噬细胞内酶活性的激活及分泌增强而非基因表达的增强。

低密度脂蛋白不同亚组分对血管内皮细胞粘附分子表达的不同影响

通过观察低密度脂蛋白不同亚组分对细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1表达的影响 ,来探讨低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的分子机制。采用两次超速离心法分离制备大颗粒疏松低密度脂蛋白和小颗粒致密低密度脂蛋白 ,在内皮细胞培养基中分别加入不同剂量的天然或氧化型小颗粒致密或大颗粒疏松这 4种脂蛋白 ,37℃温育 12h ,用细胞酶联免疫吸附法检测细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1蛋白的表达。结果发现 ,不同剂量的 4种脂蛋白均可使细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1蛋白表达增高 ,天然或氧化型小颗粒致密低密度脂蛋白增加内皮细胞表面细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1蛋白表达呈剂量依赖性。比较相同浓度的 4种脂蛋白的作用时发现 ,2 5mg和 5 0mg小颗粒致密低密度脂蛋白增加细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1表达的作用强于大颗粒疏松低密度脂蛋白 ,但差异无统计学意义 ;10 0mg天然小颗粒致密低密度脂蛋白增加细胞间粘附分子 1和血管细胞粘附分子 1表达的作用强于其它三种脂蛋白 (细胞间粘附分子 1的表达分别为 0 .83± 0 .0 9、0 .6 6± 0 .15、0 .80± 0 .0 7和 0 .76± 0 .0 8;血管细胞粘附分子 1的表达分别为 0 .37± 0 .0 4、0 .2 8± 0 .0 4、0 .2 9± 0 .0 2和0 .2 7± 0 .

氧化修饰低密度脂蛋白对内皮细胞功能的影响

目的观察氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞NO/ET-1、t-PA/PAI-1合成、细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法采用培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在分别加入不同浓度ox-LDL(50、100、150、200 mg/L)孵育24 h后,观察培养液中NO、ET-1、t-PA、PAI-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。结果ox-LDL可显著抑制NO、t-PA的合成,ox-LDL还可明显增加ET-1、PAI-1的分泌及诱导细胞表面ICAM-1的表达。结论ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用,它对NO/ET-1、t-PA/PAI-1及ICAM-1表达的影响可能是其致动脉粥样硬化发生的重要机制之一。

脂肪细胞因子Chemerin研究进展

脂肪细胞因子在能量代谢平衡、葡萄糖和脂肪代谢、细胞分化、食欲控制、产热、神经内分泌功能、繁殖、免疫及重要心血管功能方面均发挥重要作用。目前报道的重要脂肪细胞因子包括瘦素、IL-6、MCP-1、PAI-1、TNF、Chemerin等,其中Chemerin与肥胖和代谢综合征相关,

巨噬细胞、内皮细胞对高密度脂蛋白的氧化修饰

为了探讨高密度脂蛋白 (HDL)在体内发生氧化修饰的部位及机制 ,分别观察了培养人动脉平滑肌细胞 (SMC)、动脉内皮细胞 (EC)及巨噬细胞 (MΦ)与HDL共同温育过程中 ,HDL的琼脂糖电泳相对迁移率 (REM)、硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS)以及溶血卵磷脂 卵磷脂 (LPC PC)值等氧化指标的变化 .结果发现 ,HDL与 3种细胞温育 12h时 ,HDL几乎不发生氧化修饰 ,而HDL与MΦ和EC温育 2 4h后 ,其REM、TBARS、LPC PC值均显著上升 (p <0 0 1) ;而HDL与SMC温育后 ,其REM、TBARS值无显著改变 ,LPC PC值增加 (p <0 0 1) .结果提示 。

极低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白E基因表达的影响

为研究载脂蛋白Ｅ含量不同的极低密度脂蛋白对巨噬细胞载脂蛋白Ｅ表达的影响，以肝素－琼脂糖凝胶亲和层析法将正常人极低密度脂蛋白分离为富含载脂蛋白Ｅ和贫含载脂蛋白Ｅ的二种不同亚组分，并分别以不同浓度与小鼠腹腔巨噬细胞共培养。而后以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析和十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究了其对小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因表达的不同影响。结果发现，两种极低密度脂蛋白亚组分在较低浓度（含甘油三酯１００μｇ／Ｌ）时均可刺激小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因的表达，且尤以贫含载脂蛋白Ｅ的极低密度脂蛋白作用更为明显，其刺激后的细胞ｍＲＮＡ及蛋白质表达分别增高约１．５８和１．８２倍。但高浓度的二种极低密度脂蛋白亚组分刺激的细胞ｍＲＮＡ水平下降为对照的６５％，而蛋白质水平却升高２倍之多，其机制未明。上述实验结果说明，贫含载脂蛋白Ｅ极低密度脂蛋白可能在较低浓度下具有更强的刺激小鼠腹腔巨噬细胞载脂蛋白Ｅ基因表达的能力，而高浓度时则不然。