环糊精超分子体系的手性识别研究──D,L-色氨酸对映体的手性识别荧光分析法

The paper reports the simultaneous fluorescence determination of D,L-tryptophanenantiomer by chiral recognition of β-cyclodextrin for the first time. Chiral discrimination isobserved for fluorescence emission of D- and L-tryptophan when complexed toβ-cyclodextrin, and is significantly related to reaction temperature, time and PH. The proposedenantiomeric resolution of D- and L-tryptophan is based on the non-fluorescellce emission ofLtryptophan in β-cyclodextrln solution at 35℃ and after 24 h standing by. The fluorescenceemission and absorbance of L-tryptophan disappear with the Increase of β-cyclodextrin at 35℃ and 24 h standing by, where as it is not observed for D-tryptophan. The detection limitsare 3.1×10-8 mol/L for D-tryptophan and 2.7 ×10-7 mol/L for L-tryptophan, respectively,with a RSD of 1. 0%-2. 6% (n=7). The method has been shown to be accurate with a ratioof 2%(molar ratio) of one enantiomer in the presence of the other. The observed pseudofirst-order rate constant is calculated. The reaction mechanism has been discussed usingpyrene as a fluorescence probe.

甘氨酸在DMF/水和乙醇/水混合溶剂中的焓对相互作用

利用LKB 2277生物活性检测仪对298.15K时甘氨酸在纯水,DMF/水和乙醇/水混合溶剂(DMF或乙醇的质量分数为0.05～0.45,以10%递增)中的稀释焓进行了测定,并利用维里展开式法关联得到焓对相互作用系数值.结果表明,焓对相互作用系数h^2与溶剂的结构性质密切相关.在DMF/水混合溶剂中,h^2随DMF含量的增加而变得更负;而在乙醇/水混合溶剂中,h^2与乙醇含量近似呈抛物线型关系,在乙醇质量分数为0.25时h^2达到一个极小值.

邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法测定人和小鼠血浆中的游离氨基酸

以邻苯二甲醛（ＯＰＡ）／３－巯基丙酸（３－ＭＰＡ）为衍生试剂，手动柱前衍生，ＯＤＳ（十八基硅烷）柱分离；以磷酸盐缓冲液（ｐＨ７２）配制流动相，二元一级线性梯度洗脱，紫外３４０ｎｍ检测，在４０ｍｉｎ内分离测定了人和小鼠血浆中２１种游离氨基酸的含量。方法准确可靠，２１种氨基酸保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为００９％～０３８％和１５％～４９％（ｎ＝８），氨基酸的进样量为０１～１６ｎｍｏｌ时，峰面积与进样量之间的线性相关系数为０９９６～０９９９，标准加入回收率为９３３％～１０５９％。

氨基酸对映体拆分的研究进展

本文综述色谱法、毛细管电泳法和萃取法在分离氨基酸对映体方面的有关最新研究成果 。

米曲氨基酰化酶的纯化及固定化酶法拆分D,L-丙氨酸

利用硫酸铵分级与双水相萃取结合的方法从米曲霉中提取米曲氨基酰化酶，并将其固定在ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５上，用于拆分Ｄ，Ｌ－丙氨酸。

氨基酸柱前衍生化的3种新荧光试剂的光谱特性及高效液相色谱研究

合成了３种新的荧光标记试剂；吖啶－Ｎ－乙酰氯（ＡＲＣ－Ｃｌ），咔唑－９－乙酰氯（ＣＲＡ－Ｃｌ）和 咔唑－９－丙酰氯（ＣＲＰ－Ｃｌ）。它们的最大发射和激发波长分别为 ４３０ｎｍ（λｅｘ＝４３０ ｎｍ），３６８ ｎｍ λｅｘ＝３３５ｎｍ ）和 ３６５ｎｍ（λｅｘ＝３４０ｎｍ ）。 ３种衍生化试剂与氨基酸形成的衍生物在ｐＨ ６．５的 条件下结合梯度洗脱程序在 Ｃ１８反相柱上对色谱条件进行了优化。每种氨基酸在 ５ ｐｍｏｌ的浓 度下的相对标准偏差小于４％，检测限达ｆｍｏｌ级。

二(2-乙基己基)磷酸萃取L-异亮氨酸的研究

以二(2-乙基己基)磷酸(D2EHPA)-正辛烷及D2EHPA-正辛醇萃取L-异亮氨酸为对象，研究了D2EHPA浓度、L-异亮氨酸初始浓度以及pH值对萃取平衡分配系数的影响。结果表明，在实验研究涉及的pH值范围内，分配系数先随pH的增加而增大，在3.5<pH<5区域，pH值对分配系数的影响较小。分配系数还随D2EHPA浓度的增加而增大。正辛醇加入有机相，萃取分配系数增大。D2EHPA与L-异亮氨酸生成萃合比为1∶1或2∶1的萃合物。证实了在D2EHPA萃取L-异亮氨酸的过程中存在着质子转移反应。建立的萃取平衡分配系数关联式的拟合精度是令人满意的。

溶剂萃取法提取氨基酸

以二（２－乙基己基）磷酸（Ｐ２０４）为萃取剂，从沉淀胱氨酸后的毛发水解母液中提取复合氨基酸。萃取过程的最佳工艺条件为：萃取剂组成（体积分数）Ｐ２０４（０．７５）－磺化煤油（０．１５）－乙基己醇（０．１０）；室温；初始水相的ｐＨ值为２．５；用去离子水反萃取。萃取及反萃取的理论级数分别为８级和９级。

高效液相色谱法测定超滤后血浆中的谷氨酰胺

用高效液相色谱法测定超滤后血浆中的谷氨酰胺，平均回收率为９６．７５％，在１３０～１３００μｍｏｌ／Ｌ范围内呈线性关系（ｒ＝０．９９０６），健康人正常值男性为（６９４．９７±１０２．３１）μｍｏｌ／Ｌ，女性为（６２３．７９±９９．２７）μｍｏｌ／Ｌ，男女间值有显著差别（Ｐ＜０．０５）该分析方法简单、迅速，可用于外科肠道内营养的监测和对肠粘膜结构与功能的研究．

动植物产品中牛磺酸含量测定的前处理方法

本研究对动植物产品中牛磺酸测定的前处理方法进行分析比较。结果表明 :采用热水提取或 φ =70 %乙醇沸水浴提取———磺基水杨酸沉淀法两种方法进行牛磺酸测定的前处理 ,其结果精确度高 ,重现性好 ,回收率高 ;而采用GB76 5 0— 87(盐酸水解法 )和GB76 49— 87(碱水解 )两种方法 ,测定结果不可靠 ,前者比后者回收率更低。因此 ,动植物样品可选择游离测定前处理方法 ;此外 ,加急样品测定可考虑改良碱解法 ,这是一种简便。

一种新的氨基酸测定衍生化方法

采用２，４二硝基氟苯作为衍生化试剂，１６种常见人体生理性氨基酸为分析对象，区带毛细管电泳为分离模式，建立一种新的氨基酸衍生化方法。系统研究了反应时间、反应温度和ｐＨ值对衍生化反应的影响。同时观察了４℃和２５℃室温下衍生化产物的稳定性情况，结果发现，无论是在４℃冰箱，还是在２５℃室温下，氨基酸衍生化产物保存５天，紫外吸收值无明显改变。方法的性能指标测定表明，该法的线性在１０～７００μｍｏ１／Ｌ范围内良好（γ在０．９６４～０．９９５之间）。最低检测限（Ｓ／Ｎ＝２）为２．５～７．９μｍｏｌ／Ｌ。测得平均回收率在８６．３～１０７．４％之间。该法具有衍生化反应操作简便、灵敏度高、稳定性好、线性及回收率佳等特点，不仅可用于氨基酸的衍生化反应，而且同样适合于其它含有氨基的生物活性物质的衍生化反应。

色氨酸及其主要代谢产物的分离和在生物样品中的测定

建立以乙酸缓冲系统和甲醇作流动相、电化学和紫外检测器联用的高效液相色谱法，分离和测定了色氨酸经5-羟色胺和犬尿酸原两条主要代谢途径的8种代谢物。使用三氯乙酸作离子对试剂以延长3-羟犬尿酸原的保留时间，分析了流动相pH值和三氯乙酸浓度对各物质分离的影响及检测条件。结果表明，pH值及三氯乙酸浓度对各物质保留时间有明显影响，可作为控制分离的主要因素。此外，对生物样品中各物质分离和检测条件进行了讨论。

以钴离子为探针测定半胱氨酸的研究

详细研究了半胱氨酸与钴（Ⅱ）在ＮＨ４ＣＬＮＨ４ＯＨ介质中的相互作用，建立了快速测定半胱氨酸的分光光度法，方法检出限２８×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１，线性范围０～２０×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１，摩尔吸光系数７９８×１０３Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１。用于尿液中半胱氨酸的测定，结果满意。

2,4-二硝基氟苯衍生法测定游离氨基酸方法的优化

以美国HPLC 110 0系列为基本实验设备 ,在流速为 1 0ml/min ,紫外检测器波长为 36 0nm ,运行时间 2 5min ,进样量为 10ul情况下 ,筛选了流动相梯度、2 ,4_二硝基氟苯用量、柱温 ,测定了回收率。结果表明 :FDBN衍生法分析游离氨基酸 ,流动相Ⅰ为 0 0 4NKH2 PO4 ( pH =7 2± 0 0 5 ,40 %KOH调整 )缓冲液 ;流动相Ⅱ为乙腈的水溶液 ,其浓度为 5 5 % ,流动相Ⅰ的百分比梯度为 86 / 0min— 88/ 2min— 86 / 4min— 70 / 10min— 30 / 2 0min— 10 / 2 1min— 0 / 2 4.0min ,1%FDBN用量为 5— 2 0ul,柱温 40℃ ,样品AA浓度大于 0 5nmol/ul,17种AA分离效果最佳。此方法AA回收率在10 0 %～ 10 4%之间。

反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质

反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质顾拥军，倪文，包维丽，程介士（医学神经生物学国家重点实验室，上海医科大学基础医学院神经生物学教研室）谷氨酸（Ｇｌｕ）、门冬氨酸（Ａｓｐ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）、牛磺酸（Ｔａｕ）等氨基酸是...

用流动注射法研究巯基化合物-铈(Ⅳ)-氢化可的松的化学发光反应

采用流动注射法研究了巯基化合物－铈（Ⅳ）－氢化可的松（ＨＣＲｓ）体系的化学发光行 为，对影响化学发光强度的诸因素进行试验和探讨，建立了流动注射化学发光法检测谷胱甘 肽（ＧＳＨ），半胱氨酸（Ｃｙｓ）等含巯基化合物的新方法。检测ＧＳＨ和Ｃｙｓ和线性范围分别为 ２．０×１０－６～１０．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１．０×１０－６ｍｏｌ／Ｌ～１０．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ；检测限分别为２．０ ×１０－７ｍｏｌ／Ｌ和１．４×１０－６ｍｏｌ／Ｌ（Ｓ／Ｎ＝３）；ＧＳＨ、Ｃｙｓ加入血清中进行回收测定的回收率 为９０％～９５％，相对标准偏差小于４％。

鼠脑微透析液痕量氨基酸的激光诱导荧光检测

使用自制微透析探针和活动体位生化取样装置以及自行组装的毛细管电泳 增强型电荷耦合器件 激光诱导荧光系统 ,对鼠脑透析液中的痕量氨基酸以异硫氢酸荧光黄 (FITC)进行柱前衍生后进行了分离和检测 .鼠脑海马CA3区微透析液中游离氨基酸的浓度为 1 0 - 8～ 1 0 - 6mol/L ,并将其用于学习与记忆的研究 ,为无损伤研究活体脑内神经递质和其他痕量生化物质的动态变化提供了一种新方法 .

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的生物质谱和毛细管电泳法

目的：为准确分析重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒＨｕＧＭＣＳＦ）半成品及其制剂的纯度和表达的正确性。方法：用毛细管区带电泳测定了２批ｒＨｕＧＭＣＳＦ半成品和３批ｒＨｕＧＭＣＳＦ注射液的纯度。用基体辅助激光解吸飞行时间质谱和电喷雾质谱测定了２批ｒＨｕＧＭＣＳＦ半成品的分子量。用毛细管等电聚集法测定了ｒＨｕＧＭＣＳＦ半成品的等电点。结果：２批半成品中１批含有少量二聚体，且含有４个不同等电点的组分，另１批表达不正确；２批成品均存在大量杂质。结论：发现有些ｒＨｕＧＭＣＳＦ样品有生物学活性，但表达不正确，纯度也不高；各分析方法是互补的，不能相互替代。

高效液相色谱法监测小肠移植病人输注谷氨酰胺的效果

用高效液相色谱法测定人血液内的谷氨酰胺（Ｇｌｎ），方法简便、快速、灵敏，回收率线性关系良好，超滤去蛋白技术对检测Ｇｌｎ这一类易降解的物质尤其适用。用Ｇｌｎ分析法监测小肠移植病人输注这一特殊组织营养——谷氨酰胺，取得良好的效果。

胶原蛋白特异性氨基酸测定方法的改进

目的 建立一种快速、准确、可靠的胶原蛋白定量检测方法。方法 采用 6 3 0 0黄金系统氨基酸分析仪 ,在钠柱 90min程序蛋白质水解分析方法基础上 ,根据羟脯氨酸 (HYP)和羟赖氨酸 (HYL)的特性 ,分别建立了HYP和HYL的快速测定方法 ,并用此方法检测了大白兔尺骨中段骨缺损处再生组织内HYP和HYL的含量。结果 用此方法完成HYP和HYL分析的时间均为 1 8min ,比原方法缩短了 72min,且有较好的重现性 (HYPCV :日内 0 .89% ,日间 1 .2 8% ;HYLCV :日内 2 .6 6 % ,日间 3 .48% )、回收率高 (HYP :97.5 % ;HYL :96 .0 9% )。结论 本方法是一种快速、准确、可靠的胶原蛋白定量检测方法 。