β-烟酰胺单核苷酸及其在维持基因组稳态中的研究进展

β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是辅酶Ⅰ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))的前体,其主要通过NAD^(+)在细胞生命过程中发挥关键作用,包括DNA损伤修复信号通路、氧化还原反应和代谢反应等。补充NMN提高细胞内NAD^(+)水平以增强DNA损伤修复,已成为国内外研究的焦点。该文综述了NMN在延缓衰老、治疗疾病、维持基因组稳定性及细胞稳态方面的最新研究进展,分析了其提升宿主DNA损伤修复能力的作用机制,并对补充NMN的潜在风险进行探讨,为后续的NMN相关科学研究提供参考。

中国部分地方鸡肌肉肌苷酸含量研究

本文采用高效液相技术测定了肖山鸡、白耳鸡、狼山鸡、泰和鸡、北京油鸡 5个地方鸡种及白耳鸡 (♂ )×肖山鸡 (♀ )和肖山鸡 (♂ )×白耳鸡 (♀ )两种杂交鸡的胸肌中肌苷酸含量。结果表明 :(1)肌肉中肌苷酸含量由高到低依次为泰和鸡、白耳鸡、北京油鸡、肖山鸡 (♂ )×白耳鸡 (♀ )、白耳鸡 (♂ )×肖山鸡 (♀ )、肖山鸡、狼山鸡。其中泰和鸡肌肉中肌苷酸含量显著高于肖山鸡、狼山鸡、白耳鸡 (♂ )×肖山鸡 (♀ )、肖山鸡 (♂ )×白耳鸡 (♀ ) (P <0 0 5) ,而与白耳鸡、北京油鸡无显著差异 (P >0 0 5) ;白耳鸡、北京油鸡肌肉中肌苷酸含量显著高于狼山鸡 (P <0 0 5)。 (2 )肌肉中肌苷酸含量公鸡低于母鸡 (P <0 0 5)。 (3)肌肉中肌苷酸含量与体重呈显著性负相关 (- 0 1538～ -0 5547) ,总相关系数为 - 0 3986 (P <0 0 1)。

小麦地方品种小白冬麦抗白粉病基因分子标记

小麦农家品种小白冬麦对小麦白粉病具有良好抗性,对病原菌拥有较广的抗谱,并与其他已知抗白粉病基因的抗谱不同,遗传分析证实小白冬麦的苗期抗性由一个隐性抗白粉病基因控制。为了寻找与小白冬麦所携带抗白粉病基因连锁的分子标记,采用小白冬麦和感病品种Chancellor（CC）正反交组合,在2个F2群体125和107个单株上进行验证。结果显示,抗白粉病基因mlxbd与引物Xgwm577、Xgwm1267等紧密连锁,通过中国春及其第7部分同源群缺体-四体系,双端体系和缺失系将其定位在7B染色体长臂末端区域（7BL-10,Bin0.78-1.00）,利用与mlxbd最近的引物Xgwm577扩增23个含有已知抗白粉病基因的小麦品种,检测发现这个引物不能单独用于分子标记辅助选择育种。

利用小鼠模型评价含有5'-GTCGTT-3'特征序列的人CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激活性

为了寻找合适的动物模型来评价人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)的活性 ,研究了CpG2 0 0 6等含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN对小鼠的免疫刺激活性。在体外它们能够促进小鼠脾淋巴细胞转化 ,促进B细胞分泌IgM ,但不能诱生高水平的IFN γ。研究了CpG2 0 0 6等序列在体内作为疫苗佐剂对HBsAg免疫效果的影响 ,发现 :(1)人CpG ODN能够明显提高抗 HBs抗体水平 ,并逆转Al(OH) 3 对Thl类免疫应答的抑制 ;(2 )初免时以CpG2 0 0 6为佐剂可以使免疫应答“锁定”在Thl类免疫应答 ,而加强免疫时以CpG2 0 0 6为佐剂可以在一定程度上逆转初免时Al(OH) 3 诱生的Th2类免疫应答 ;(3)CpG2 0 0 6联合Al(OH) 3 作为佐剂的单剂量疫苗的免疫效果强于两剂量以Al(OH) 3 为佐剂的常规疫苗。上述结果表明 :小鼠可以作为动物模型用于含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN免疫效果的研究。

单核苷酸多态性的研究技术

本文在对人类基因组单核苷酸多态性 (SNP)的概念做简要说明的基础上 ,系统地介绍 14种检测分析SNP的技术和方法的原理、操作要点及其优缺点。

6种鱼类肌肉组织肌苷酸的检测分析

采用高效液相色谱技术，在国内首次测定了条纹斑竹鲨（Chilocsyllium plagiosum）、大黄鱼（Pseudosci—aena crocea）、鳜（Siniperca chuatsi）、青石斑鱼（Epinephelus awoava）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）和乌塘鳢（Bostrichthys sinensis）等6种鱼类新鲜和冻存肌肉组织中肌苷酸含量。结果表明：（1）不同鱼类肌肉组织中肌苷酸质量比不同，牙鲆新鲜肌肉组织中肌苷酸质量比最高，为4．214mg／g，其余5种鱼类为2，365～3，634mg／g。（2）10d冻存试验中，经～70℃超低温冻存，6种鱼类冻存肌肉组织中肌苷酸质量比均高于新鲜肌肉组织，大黄鱼肌肉组织冻存1d肌苷酸质量比达最大值，鳜肌肉组织冻存10d肌苷酸质量比呈上升态势未出现最大值，其余5种鱼类肌肉组织肌苷酸质量比均在冻存第5天达到最大值。长时间的冻存将会降低食用鱼肉中肌昔酸质量比，导致鲜味下降，但经1周左右短时间的冻存后可明显提高鱼肉中肌苷酸质量比，增加鲜味，提高食用价值。

牛Myostatin基因单核苷酸多态性分析

Myostatin基因即肌肉生长抑制素,是一种肌肉生长的负调控因子。应运PCR-SSCP和测序的方法对中国秦川牛、南阳牛以及国外引入品种皮埃蒙特牛双肌基因的第三外显子进行了多态性分析。结果表明:第三外显子938处G→A的单核苷酸的突变造成了南阳牛、皮埃蒙特牛第三外显子扩增片段多态性,秦川牛则不然。

核苷酸在营养免疫中的作用

瞟呤核苷酸和嘧啶核苷酸是组成细胞的主要成分，是DNA和RNA的基本组成单位，在细胞结构。代谢、能量和功能调节等方面起重要作用。核苷酸是核酸在体内的代谢产物，其中部分核苷酸又可进一步水解为核苷。核苷酸及其水解产物均可被肠粘膜吸收肠粘膜细胞可将核苷酸运输到其他细胞。

核苷酸生产技术现状及展望

核苷酸的生产方法主要有化学合成法、RNA酶解法、微生物发酵法以及生物催化法。探讨了这些方法的原理和发展及其在工业化生产中的优劣势。化学合成法的路线长、立体选择性差,所用试剂昂贵并有一定毒性,生产成本较高;酶解法能一次得到4种核苷酸的混合物且收率较高,是目前我国核苷酸工业生产所用的主要技术,但其后提取难度大,产品纯度不高;微生物发酵法难以解决细胞通透性的问题;生物催化法是发酵法的延伸,菌体培养和酶催化反应分两步进行,有效地解决了细胞通透性问题,并可以通过偶联不同的基因工程菌株生产多种复杂核苷酸、核苷糖乃至寡聚糖,这在核苷酸工业、医药及糖化学、糖生物学合成工业中是极其重要的一个环节。

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用

为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性。结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用。

bcl-x_L短发夹状RNA诱导人鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡(英文)

背景与目的:实验证明bcl-xL 在鼻咽癌细胞株CNE-2Z 中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展、转移及治疗过程中产生耐药等方面发挥重要作用。本研究拟探讨bcl-xL 短发夹状RNA (shorthairpin RNA ,shRNA )诱导CNE-2Z 细胞凋亡的作用。方法:把表达bcl-xL shRNA 的重组质粒pm U6-RNAi转染到CNE-2Z细胞中,用荧光染色和流式细胞术等方法检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polym erase chain reaction,RT-PCR )检测bcl-xL、bcl-2、survivin和caspase-3的m RNA 表达水平;用W estern blot检测Bcl-xL、Caspase-3和P53的蛋白表达水平。结果:流式细胞术检测发现,pm U6-RNAi重组质粒作用24h 后,细胞出现明显的凋亡峰;H oechst33258单染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩和核断裂;RT-PCR 分析pm U6-RNAi重组质粒作用细胞后明显下调了bcl-xL、bcl-2和caspase-3的m RNA 表达水平, 对survivin 的m RNA 表达水平无影响;W estern blot分析pm U6-RNAi质粒作用细胞后明显下调了Bcl-xL、Caspase-3的蛋白表达水平,而大幅度上调了P53的蛋白表达水平。结论:bcl-xL shRNA 可诱导CNE-2Z 细胞凋亡;CNE-2Z 细胞的凋亡可能与bcl-2、caspase-3和p53有着密切的关系;质粒表达的bcl-xL shRNA

藏猪生长激素基因核苷酸多态性分析

本文应用PC R方法,体外扩增了藏猪5个个体的生长激素(GH)基因64～2022位之间1959 bp的片段(包含完整的5个外显子和4个内含子),并进行了序列测定。结合网上下载的猪GH基因同源区段序列进行比较分析,结果表明:藏猪GH基因有较丰富的核苷酸多态性;检出的24个核苷酸突变位点中有6个发生在外显子区,外显子2内有4个突变位点,导致2个氨基酸变异,外显子3和外显子4内各有一个突变位点,特别是外显子4内这个突变位点引起了1个氨基酸变异;单核苷酸转换(21个位点)大于颠换(5个位点)。

6种笛鲷属鱼类Cyt b基因片段序列的比较

采用聚合酶链式反应直接测序法,获得紫红笛鲷(Lutjanusargentimaculatus)、白星笛鲷(L.stellatus)、千年笛鲷(L.sebae)、勒氏笛鲷(L.russelli)、红鳍笛鲷(L.erythropterus)5种笛鲷属鱼的线粒体细胞色素b(Cytb)425bp序列,并结合基因库中的斜带笛鲷(L.decussatus)Cytb同源序列进行比较分析,共发现88个核苷酸位点存在变异(20.7%)。用MEGA2.1软件中的Pairwisedistance工具计算了6种笛鲷属鱼类的相对遗传距离,表明6种笛鲷属鱼类的序列差异在0.096—0.129之间,其中红鳍笛鲷和紫红笛鲷序列差异最大为0.129,千年笛鲷与红鳍笛鲷的序列差异最小为0.096;序列变异的转换/颠换比值较低,平均只有2.160。

新城疫病毒V4株F基因的克隆与核苷酸序列分析

本试验采用RT_PCR方法对NDVV4 克隆株V4(Hr)的F基因进行了扩增与克隆,并以Sanger’s 双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列,推导出氨基酸序列。F基因全长为1662bp,单一的开放阅读框编码553 个氨基酸的长肽。F蛋白的疏水构型有3 个强疏水区;F蛋白上共有12 个Cys 残基位点和5 个潜在糖基化位点。同其亲本毒株Queensland 相比,核苷酸同源率为99.3% ,氨基酸同源率98.7% 。上述主要功能区的序列完全一致,但其中7 个氨基酸的不同,的确导致了二级结构的变化(主要表现为α_螺旋、β_折叠、β_转角和β_卷曲的数量和位置的不同),而且单一的氨基酸差异足以导致二级结构的变化,如:214位的P对L的替换,就导致212 ～215

稀土元素对腺嘌呤及鸟嘌呤单核苷酸的水解断裂作用

本文研究稀土元素对5’-腺嘌呤核苷酸(5’-AMP)和5’-鸟嘌呤核苷酸(5’-GMP)的水解断裂作用.空气中CeCl_3在pH9,37℃能有效地水解断裂5’-AMP及5’-GMP,而其它三价稀土对5’-AMP和5’-GMP的水解断裂作用很小,铈对5’-AMP的水解断裂速度大于5’-GMP.紫外吸收光谱实验结果表明反应体系中Ce(Ⅲ)部分被氧化成Ce(Ⅳ),Ce(Ⅳ)的氢氧簇合物是使5’-AMP和5’-GMP水解的活性组分.

环核苷酸(CNT)在豚鼠体内代谢规律的研究

以豚鼠为实验动物 ,研究了3H cAMP、3H cGMP在动物体内的转运与代谢规律 ,其示踪动力学模型可用C^t =12 2 9 5131e- 0 0 35lt +52 52 2 7e- 0 0 350t - 12 82 0 36 8- 3 0 878t,C^t =12 76 4 6 4 3e- 0 0 36 4t+18 9551e- 0 0 36 3t- 12 95 4 194e- 3 2 0 4 4t一级吸收二室模型来描述。研究还证明 ,cAMP、cGMP在动物体内分布不平衡 ,以肾脏、脂肪为多 ;且二者均吸收较快 ,分布与消除较慢 ,属于慢消除类“药物”。

硫酸铈对5′-腺嘌呤及5′-鸟嘌呤核苷酸的水解断裂的催化作用

本文用核磁共振 (NMR)波谱和化学定磷法研究了 Ce(SO4) 2 对 5′-腺嘌呤核苷酸 (5′- AMP)及5′-鸟嘌呤核苷酸 (5′- GMP)的水解断裂作用。结果表明 :Ce(SO4) 2 在 37℃ ,酸性条件下使 5′- AMP断裂为腺嘌呤核苷 (A)及无机磷 ,使 5′- GMP断裂为鸟嘌呤核苷 (G)及无机磷 ,SO2 -4 浓度及酸强度对 5′- AMP及 5′- GMP的水解断裂程度有很大影响 ,并对其水解断裂机制进行了研究。

大肠杆菌菌毛抗原K_(99)基因的亚克隆及核苷酸序列测定

利用PCR技术 ,从含有大肠杆菌菌毛抗原K99基因的质粒pX5K中扩增出 0 .4kb的K99菌毛抗原基因 ,然后将其亚克隆到pGEM T easy载体上 ,并转化至受体菌JM10 9中 ,采用碱性裂解法提取质粒DNA后 ,经NcoI和EcoRⅠ双酶切分析和核苷酸序列分析 。

适体SELEX筛选中单链DNA的制备

探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定。结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA。表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成。

Ce^4＋水解切断5′—AMP，3′—AMP和CAMP的原位增强拉曼光谱研究

首次用原位增强拉曼光谱技术研究了Ce4+水解切断核苷酸的过程.实验表明在粗糙化的银表面可以得到5'-AMP,3'-AMP和CAMP明显增强的拉曼光谱,Ce4+水解切断5'-AMP时在2 895cm-1和2 950 cm-1处分别出现CH2的振动峰;3'-AMP中原有CH2振动峰,当它的磷酸酯键被Ce4+水解切断时,这些峰则明显减弱,甚至消失.把Ce4+水解切断CAMP过程的原位拉曼光谱与5'-AMP和3'-AMP同Ce4+反应以后的拉曼光谱相比较,推测Ce4+断裂CAMP时,首先切断CAMP中的一个磷酸酯键,生成5'-AMP和3'-AMP,随着反应的进行Ce4+再逐渐断裂5'-AMP和3'-AMP的磷酸酯键,生成最终产物腺苷.