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苦瓜子蛋白的分离纯化及其性质研究 被引量:18
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作者 叶国杰 钱瑞卿 +3 位作者 卢保元 顾梓伟 金善炜 汪猷 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第11期1135-1144,共10页
从苦瓜种子的粗提物苦瓜子蛋白丙酮分级沉淀干粉中,用CM-Sephadex C-50和SephadexG-75分离得到了两个核糖体失活蛋白,α-苦瓜子蛋白(α-momorcharin,α-MMC)和β-苦瓜子蛋白(β-momorcharin,β-MMC),其等电点分别为9.10(α-MMC),9.32(β... 从苦瓜种子的粗提物苦瓜子蛋白丙酮分级沉淀干粉中,用CM-Sephadex C-50和SephadexG-75分离得到了两个核糖体失活蛋白,α-苦瓜子蛋白(α-momorcharin,α-MMC)和β-苦瓜子蛋白(β-momorcharin,β-MMC),其等电点分别为9.10(α-MMC),9.32(β-MMC).用ESI-MS和MALDI-TOF-MS测定它们的分子量,分别为28625(α-MMC),29076(β-MMC)(+Na,29099);,28795(α-MMC),29074.7(β-MMC).它们都是糖蛋白.其生物活性的分析测定表明,都属于RNA N-糖苷酶.本文重点对β-苦瓜子蛋白的分离纯化及其性质进行详细报道,并对其N-端部分的氨基酸顺序进行了测定. 展开更多
关键词 苦瓜子蛋白 核糖体失活蛋白 糖苷酶 纯化 性质
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合浦珠母贝碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究 被引量:25
2
作者 谢莉萍 林静瑜 +1 位作者 肖锐 张荣庆 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期37-40,共4页
以合浦珠母贝 (Pinctadafucata)为提取酶的原料 ,经Tris HCl缓冲液 (pH7.5)抽提 ,正丁醇处理 ,硫酸铵分级沉淀分离 ,DEAE 纤维素离子交换树脂柱层析 ,DEAE A25离子交换分子筛柱层析纯化 ,得到一定纯度的碱性磷酸酶 ,比活力达到1444U/mg... 以合浦珠母贝 (Pinctadafucata)为提取酶的原料 ,经Tris HCl缓冲液 (pH7.5)抽提 ,正丁醇处理 ,硫酸铵分级沉淀分离 ,DEAE 纤维素离子交换树脂柱层析 ,DEAE A25离子交换分子筛柱层析纯化 ,得到一定纯度的碱性磷酸酶 ,比活力达到1444U/mg。酶学性质和动力学性质研究表明 ,该酶催化对硝基苯磷酸 (pNPP)的水解反应 ,最适 pH值为9.72,最适温度为45℃ ,水解反应的活化能为Ka=21.4kJ/mol,初速度为6.1μmol/L,米氏常数Km 值为2.86mmol/L,Vm 值为9.09μmol/L。产物类似物HPO2 - 4,WO3 - 4 对该酶均有明显的抑制作用 ,表现为竞争性抑制。金属离子对该酶的催化活力有不同的影响 ,正一价金属离子对该酶活性无影响 ,Mg2 +,Co2 +,Mn2 +对该酶有激活作用 ,Zn2 +对该酶有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 合浦珠母贝 碱性磷酸酶 酶活性 分离 人工育珠
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大凉疣螈碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质 被引量:15
3
作者 刘晓雯 刘克武 +5 位作者 杨守忠 刘绍龙 赵欣平 闵丽娥 江琰 喻东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期135-138,共4页
Alkaline phosphatase(AKP)was isolated and purified from the skin of Tylototriton taliangensis Liu and its kinetic property was examined.The partially purified alkaline phosphatase was purified by salting\|out,CM\|cell... Alkaline phosphatase(AKP)was isolated and purified from the skin of Tylototriton taliangensis Liu and its kinetic property was examined.The partially purified alkaline phosphatase was purified by salting\|out,CM\|cellulose ion\|exchange column and gel filtration with Sephadex G\|150.The purified enzyme from skin moved as a single electrophoretic band in PAGE.The specific activity was 90.26 units/mg protein.Its subunit weight was 42.0 kD as determined with SDS\|PAGE.The optimum pH value for the enzyme was pH9.0.The optimum temperature was about 34℃.The Michealis\|Menton constant( K \-m)was 0.83 mmol/L on the disodium phenyl phosphate.Activity differences of the enzymes were determined when metal ions effected on the AKP.The results showed that K + was found to have no inhibition of AKP activity.Mg 2+ ,Ca 2+ ,Cu 2+ could activate the AKP and the higher the metal ions concentration were,the more the activity of AKP increased.When 3.0 mmol/L Cu 2+ was used,the activity of AKP could rise to 187%.Ni 2+ ,Zn 2+ and Ag + could inhibit the AKP and the higher the metal ions concentration were,the more the activity of AKP decreased.When 3.0 mmol/L Ag + was used,the activity of AKP retained 23% only. 展开更多
关键词 大凉疣螈 碱性磷酸酶 分离 纯化 性质
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玉米降血压肽的分离纯化研究 被引量:17
4
作者 李世敏 张丽君 +1 位作者 刘冬 黄国清 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第7期69-71,共3页
以玉米蛋白为原料酶解得到的酶解液具有降血压活性,为了得到高活性的降血压肽单体,本文采用了离子交换层析法、凝胶层析和RP-HPLC对酶解液进行了的分离纯化,得到了五个降血压多肽单体。
关键词 玉米降血压肽 离子交换层析 凝胶层析 RP-HPLC
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硅胶基质弱阳离子交换剂的合成及蛋清中溶菌酶的分离 被引量:7
5
作者 李蓉 陈国亮 +2 位作者 雷建都 李宝璋 李华儒 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期517-522,共6页
用间接法合成了硅胶基质弱阳离子交换剂(XIDACE-WCX),详细研究了合成填料的色谱性能,并与商品柱(Shim-Pack WCX—1和Poly CATA)进行了比较。结果表明:合成柱比商品柱具有较高的分辨能力。通过考察合成填料的疏水性、蛋白质的保留值与等... 用间接法合成了硅胶基质弱阳离子交换剂(XIDACE-WCX),详细研究了合成填料的色谱性能,并与商品柱(Shim-Pack WCX—1和Poly CATA)进行了比较。结果表明:合成柱比商品柱具有较高的分辨能力。通过考察合成填料的疏水性、蛋白质的保留值与等电点(pI)的关系、流动相的pH值和盐浓度对蛋白质保留行为的影响,论证了合成填料的离子交换特征。利用合成的色谱填料从蛋清中分离出纯度较高的溶菌酶(在排阻色谱上仅显示一条谱峰),酶在柱上的活性回收率为107%。 展开更多
关键词 弱阳离子交换剂 蛋清 溶菌酶 纯化 分离 HPLC
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大鼠脑组织中一氧化氮合酶测定 被引量:13
6
作者 王成彬 田亚平 +2 位作者 沈文梅 汪德清 蒋赐恩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第6期548-551,共4页
在含有一氧化氮合酶(NOS)底物左族精氨酸(L-Arg),辅助因子还原性辅酶Ⅱ(NADPH)、四氢生物蝶呤(BH4)、黄素单核苷酸(FMN),黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)以及Ca2+、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀... 在含有一氧化氮合酶(NOS)底物左族精氨酸(L-Arg),辅助因子还原性辅酶Ⅱ(NADPH)、四氢生物蝶呤(BH4)、黄素单核苷酸(FMN),黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)以及Ca2+、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀浆离心上清液,组成酶反应体系.37℃温育80min,应用N-(1-萘基)-乙二胺、对氨基苯磺酸的重氮、偶氮反应测定酶反应体系中一定时间内NO代谢产物NO-2浓度变化,建立一种简便的NOS活性测定方法.反应体系最佳pH为7.4,Km=0.1mmol/L,体系内NO-2生成量与加入样品量之间有良好线性关系(r=0.998).此方法简单、方便、重复性好,批内CV为3.69%,批间CV为5.16%.10只健康大鼠脑组织中NOS活性为(39.61±7.64)nmol/(min·g) 展开更多
关键词 一氧化氮合酶 脑组织 测定
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醋酸纤维素膜固定化脲酶的研究 被引量:9
7
作者 王杰 宋锡瑾 +3 位作者 伍明 任仲皎 袁斌 雷灼霖 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1998年第7期1104-1106,共3页
酶固定膜反应器兼具有反应和分离两种功能,是酶工程领域中较活跃的研究课题[1~3].随着酶固定化技术和水平的提高,各种固定化酶生物反应器不断涌现,其中以采用固定化脲酶技术制作的人工肾最为成功[3].在国内,采用分子筛和... 酶固定膜反应器兼具有反应和分离两种功能,是酶工程领域中较活跃的研究课题[1~3].随着酶固定化技术和水平的提高,各种固定化酶生物反应器不断涌现,其中以采用固定化脲酶技术制作的人工肾最为成功[3].在国内,采用分子筛和聚乙烯醇高含水胶作载体固定化脲酶已... 展开更多
关键词 醋酸纤维素膜 固定化脲酶 脲酶固定化膜 人工肾
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α淀粉酶与糖化酶的共固定化研究 被引量:28
8
作者 郭桥 罗贵民 +2 位作者 孙启安 黄仲立 马林 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期259-263,共5页
以纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶,确定了共固定化的最适条件,研究了共固定化酶的性质,发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应,能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖。共固定化酶在30℃下的操作半... 以纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶,确定了共固定化的最适条件,研究了共固定化酶的性质,发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应,能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖。共固定化酶在30℃下的操作半寿期可达920小时。 展开更多
关键词 糖化酶 Α淀粉酶 共固定化酶
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豆壳过氧化物酶的分离纯化及其性质研究 被引量:45
9
作者 刘稳 方靖 高培基 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期577-582,共6页
从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-SephadexA-50离子交换层析,ConA-Sepharose4B亲合层析和Bio-GelP-60凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶(soybeanhulper-oxidase... 从豆壳抽提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-SephadexA-50离子交换层析,ConA-Sepharose4B亲合层析和Bio-GelP-60凝胶过滤,纯化了豆壳过氧化物酶(soybeanhulper-oxidase,ShP).纯化酶的比活力为7077U/mg,在SDS-PAGE上显示出一条蛋白质带.ShP分子量为38000,等电点为3.9;ShP为一含血红素的糖蛋白,含糖量为18.7%,光谱学分析揭示,在406nm处有一典型的Soret带,在510nm和640nm处有特征吸收峰.酶反应的最适pH在4.0附近,最适温度为45℃;在pH2.5~12.0之间较稳定,75℃,保温60min,酶活力残余68%,ShP是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.动力学分析求得ShP的表观Km(愈创木酚)为1.62mmol/L,表现Km(H2O2)为0.34mmol/L.在所测定的化学试剂中,N-3、CN-、Fe3+、Fe2+和Sn2+对酶有较强烈的抑制作用,而重金属离子Ag+、Hg2+、Pb2+、Cu2+。 展开更多
关键词 豆壳过氧化物酶 血红素 纯化与性质
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反胶团相转移法提纯酵母脂肪酶 被引量:6
10
作者 褚莹 纪建业 +2 位作者 马占芳 于艳春 吴子生 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第10期1695-1697,共3页
关键词 反胶团 相转移 酵母脂肪酶 脱氧胆酸 提纯
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核酶设计、合成与克隆的一种新方法 被引量:7
11
作者 赵西林 陈雄伟 +3 位作者 陈雅文 刘戈 孙宝勇 陈德风 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1993年第5期376-380,共5页
介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶... 介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶半切点,一步直接将核酶模板连接、聚合、克隆到体外转录载体上,大大简化了以往核酶克隆的繁琐操作,省时、省力,克隆效率也较高. 展开更多
关键词 核酶 分子设计 合成 克隆
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溶液中溶菌酶的荧光光谱研究 被引量:12
12
作者 鄢远 刘韬 黄坚锋 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第12期1214-1218,共5页
本文采用荧光分析法(荧光光谱、荧光偏振度)结合内源荧光探针色氨酸残基对溶菌酶及其在不同条件下的构象变化进行了研究.结果表明,利用荧光光谱可对溶菌酶溶液构象进行有效的分析,能够较直观地表征色氨酸残基在溶菌酶分子中的微环境及... 本文采用荧光分析法(荧光光谱、荧光偏振度)结合内源荧光探针色氨酸残基对溶菌酶及其在不同条件下的构象变化进行了研究.结果表明,利用荧光光谱可对溶菌酶溶液构象进行有效的分析,能够较直观地表征色氨酸残基在溶菌酶分子中的微环境及其在不同条件下构象的变化,得出了一些较有价值的结果. 展开更多
关键词 溶菌酶 荧光光谱 色氨酸残基 蛋白质溶液 构象
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单宁酶活力测定方法的研究 被引量:18
13
作者 王征 谢达平 +1 位作者 杨虹琦 谭周进 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第6期40-42,共3页
在紫外光区 2 70nm处 ,没食子酸丙酯在 0 μmol/L - 10 0 μmol/L浓度范围内与其吸光值成正比 ,利用此原理 ,建立了方便、灵敏、准确的单宁酶活力测定方法。
关键词 单宁酶 酶活力 黑曲霉 测定方法
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用终止剂改进超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法 被引量:170
14
作者 静天玉 赵晓瑜 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第1期84-86,共3页
以二硫苏糖醇(DTT)或L-抗坏血酸(VitC)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)... 以二硫苏糖醇(DTT)或L-抗坏血酸(VitC)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)或VitC(5%),约50μl,终止自氧化反应。终止后,反应体系的420nm光吸收在lh内保持恒定。终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近,一个酶活单位相当于纯SOD100μg/L。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 邻苯三酚自氧化 终止剂
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AS1.398中性蛋白酶的固定化研究 被引量:12
15
作者 隋德新 姜涌明 +4 位作者 赵国骏 马玉琏 施伟 姜嘉娴 严锦文 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第4期511-514,共4页
本文对枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶的固定化进行了研究。考查了温度,pH值、交联剂用量,以及载体与酶的比例等因素对AS1.398中性蛋白酶固定化的影响;确定了固定化AS1.398中性蛋白酶的一些催化特性:最适温度60℃,最适pH值8.0,操作半衰期88... 本文对枯草杆菌AS1.398中性蛋白酶的固定化进行了研究。考查了温度,pH值、交联剂用量,以及载体与酶的比例等因素对AS1.398中性蛋白酶固定化的影响;确定了固定化AS1.398中性蛋白酶的一些催化特性:最适温度60℃,最适pH值8.0,操作半衰期88天。固定化AS1.398中性蛋白酶活性回收为74%。 展开更多
关键词 中性蛋白酶 固定化
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采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化 被引量:7
16
作者 刘治江 贺淹才 +2 位作者 李红然 刘嘉 施腾鑫 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2010年第1期58-64,共7页
以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的... 以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变. 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌 几丁质酶C 分子定向进化 易错聚合酶链反应 包涵体
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蛋白水解酶活力测定新方法 被引量:27
17
作者 周慧 鲁治斌 +1 位作者 齐杰 李惟 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1994年第5期630-632,共3页
蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟(吉林大学分子生学系.长春130023)G.F.Bickerstaff(Dept.ofBiology,PaisleyUniv,Scotland,U.K)本文研究了一种测... 蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟(吉林大学分子生学系.长春130023)G.F.Bickerstaff(Dept.ofBiology,PaisleyUniv,Scotland,U.K)本文研究了一种测定蛋白水解酶(Proteinase... 展开更多
关键词 蛋白酶 活力 测定
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铜离子螯合亲和层析纯化人铜锌超氧化物歧化酶 被引量:7
18
作者 吕星 陈吉中 +2 位作者 李培峰 杨素红 方允中 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第3期259-262,共4页
用铜离子螯合亲和层析对人红细胞铜锌超氧化物歧化酶进行了纯化.3次实验的结果表明,此项层析具有重复使用率高和蛋白结合量大的显著优点.提纯的人铜锌超氧化物歧化酶的比活性为3037U每毫克蛋白,并经活性染色和SDS聚丙烯酰... 用铜离子螯合亲和层析对人红细胞铜锌超氧化物歧化酶进行了纯化.3次实验的结果表明,此项层析具有重复使用率高和蛋白结合量大的显著优点.提纯的人铜锌超氧化物歧化酶的比活性为3037U每毫克蛋白,并经活性染色和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳证实其纯度均一.纯化中,探索了用紫外260nm与280nm的A比值判断酶纯度的简便方法. 展开更多
关键词 螯合亲和层析 超氧物歧化酶
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球状苯基纤维素填料在低压疏水制备色谱分离天然菠萝酶中的应用 被引量:7
19
作者 朱云 朱和辉 朱建华 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期199-202,共4页
通过将苯环接技于球状大孔纤维素白球的方法,得到一类以大孔球状纤维素为基质的大型流水性工业色谱填料,并研究了其分离天然菠萝酶的色谱条件。色谱代化条件为:流动相100mL,含1.5mol/L(NH4)2SO4,0.1mol/LNaAc-HAc(pH4.8)... 通过将苯环接技于球状大孔纤维素白球的方法,得到一类以大孔球状纤维素为基质的大型流水性工业色谱填料,并研究了其分离天然菠萝酶的色谱条件。色谱代化条件为:流动相100mL,含1.5mol/L(NH4)2SO4,0.1mol/LNaAc-HAc(pH4.8)缓冲液;洗脱液3OmL.含67mmol/LNaOH,50mmol/LNa2CO3-NaHCO3缓冲液(pH10.28);流速1.0mL/min。在此条件下使用该填料10mL分离提纯天然菠萝酶,可得到大于120%的活性回收率。 展开更多
关键词 疏水性色谱 纤维素 菠萝酶 分离 固定相 HIC
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以γ-氧化铝固定尿酸氧化酶的尿酸传感器研究 被引量:9
20
作者 刘宝红 邓家祺 胡仁其 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第1期19-24,共6页
介绍了一种新型的酶生物传感器,以具有一定规整结构的γ-氧化铝(γ-Al2O3)固定 尿酸氧化酶制备了尿酸传感器,利用傅里叶变换红外光谱研究了γ-Al2O3与尿酸氧化酶之 间的相互作用;为了探讨吸附与γ-Al2O3间的相... 介绍了一种新型的酶生物传感器,以具有一定规整结构的γ-氧化铝(γ-Al2O3)固定 尿酸氧化酶制备了尿酸传感器,利用傅里叶变换红外光谱研究了γ-Al2O3与尿酸氧化酶之 间的相互作用;为了探讨吸附与γ-Al2O3间的相互作用,分别用N2的吸附-脱附等温线和质 量滴定法测定了γ-Al2O3的孔分布和等电点,解释了 pH对吸附的影响,并对电极的制备条 件和工作性能进行了考察,结果表明电极对尿酸在1.0×10-5~7.5×10-4mol/L范围内有着 灵敏快速的响应,检出下限为2.0×10-6mol/L。该实验对固定化酶反应机理的研究和应用 提供了理论基础。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 生物传感器 Γ-氧化铝 等电点
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