黄嘌呤氧化酶靶向小分子抑制剂的虚拟筛选

为了挖掘生物活性高、靶点明确的新型抗痛风药物先导化合物,以黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)为靶标虚拟筛选小分子抑制剂.从PDB数据库下载XOD蛋白晶体结构,经Schrodinger 2018中的“Protein prepara-tion wizard”模块预处理,基于XOD活性口袋与小分子配体作用方式特征构建了3个药效团,对FDA数据库和Chemdiv数据库进行分子对接筛选.结果发现:以非布索坦与XOD对接分数-35.790 kJ/mol为阈值,筛选得到低于该分数的化合物共206个.通过类药五原则以及ADMET分析,发现有8个化合物具有较好的成药性.将此8个化合物进行结合自由能计算,其中氟芬那酸、罗索沙星、化合物6(CAS:400076-03-1,苯并吡唑类化合物)和化合物7(CAS:866050-17-1,酞嗪类化合物)与阳性对照组非布索坦的作用方式相似,能与黄嘌呤氧化酶形成稳定性较强的复合物,可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂.

低温对水稻孕穗期叶片抗氧化酶系统的影响

为了研究低温冷害对改良后水稻的生理特性及结实率的影响,以冷敏型水稻天丰B(即CG1)、耐冷型水稻宜香1B(即CG2)和改良后天丰B(即CG3)为试验材料,于孕穗期17℃低温处理5 d,分析孕穗期低温处理对水稻功能叶片抗氧化酶系统以及产量的影响。结果表明,冷敏型CG1的结实率低,只有20%左右,其体内MDA和活性氧(ROS)含量增加,抗氧化酶系统中POD、SOD和CAT等酶活性明显较低,而CG3的结实率与耐冷型CG2的相当,达到60%以上,而且它们体内的抗氧化酶系统中POD、SOD和CAT等酶活性和基因表达水平均显著提高。这些结果说明CG3具有一定的耐冷性,且抗氧化酶系统在抵御低温中具有重要作用。

漆酶在环境保护中的应用研究进展

漆酶作为一种多酚氧化酶,在自然界分布十分广泛,且在有氧的条件下可对木质素、芳香化合物等物质进行降解,大多数情况下水是其反应后的唯一产物,在环境治理中起到重要作用。介绍了漆酶的分类、结构性质、催化机理,重点阐述了漆酶作为一种环境友好型的绿色催化剂,其在土壤、水体、大气污染物以及固体废弃物处理方面的具体应用,指出其有着非常广阔的应用前景,对于环境修复方面的实际作用还需要不断发现与探索。

MTHFR基因C677T位点多态性与PCOS患者胰岛素抵抗的关系

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2022年1月—2023年11月复旦大学附属妇产科医院PCOS患者145例(PCOS组)和健康体检女性87名(对照组)。检测所有研究对象MTHFR基因C677T位点多态性和空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平。另检测PCOS患者同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、叶酸、维生素B12(Vit B12)、维生素D(Vit D)水平。对PCOS患者行胰岛素释放试验(IRT)。计算胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素曲线下面积(AUCINS)。根据是否发生IR将健康体检女性和PCOS患者分别分为IR组和非IR组。结果健康体检女性中,IR组和非IR组之间MTHFR C677T位点基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者中,IR组CT、TT基因型分布和T等位基因频率均高于非IR组(P<0.05),2个组之间IRT结果和FINS、FPG、Hcy、TG、ISI、AUCINS差异均有统计学意义(P<0.05),其他指标2个组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者中,非IR组CT和TT基因型携带者TC水平高于CC基因型携带者(P<0.05),TT基因型携带者Hcy水平高于CC和CT基因型携带者(P<0.05);IR组各基因型携带者之间各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MTHFR C677T位点多态性与PCOS患者IR有关。在未发生IR的PCOS患者中,TT基因型患者Hcy和TC水平显著升高。

响应面法优化羟化酶催化酪醇合成羟基酪醇工艺

以pET-22b为载体,将基因HpaB、HpaC在E.coli BL21(DE3)中表达,得到高纯度的羟化酶HpaB、HpaC,并采用单因素实验和响应面法对羟化酶催化酪醇合成羟基酪醇的反应条件进行优化。确定最佳反应条件如下:温度为32℃、缓冲液为20 mmol·L^(-1)磷酸钾缓冲液(pH值7)、酪醇浓度为17.67 mmol·L^(-1)、HpaC加量为0.78 mg·mL^(-1)、NADH浓度为9.88 mmol·L^(-1)、FAD浓度为2.88μmol·L^(-1),在此条件下,酪醇转化率为99.99%,底物酪醇几乎完全转化为羟基酪醇。该研究为酶法催化合成羟基酪醇的工业化生产提供了理论基础。

乙胺双碲醚的合成及GPx酶学性质研究

作为人体中一种非常重要的抗氧化酶,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)在清除人体生理反应产生的多余过氧化物中起到了非常重要的作用。由于人工智能GPx酶的催化活性较低,设计并合成出了同时含有GPx活性中心碲和两个伯氨基的乙胺双碲醚分子,当pH=7时活性为1.6±0.02μmol·min^(-1)·μmol^(-1),相较于经典小分子GPx人工硒酶提高了3个数量级。

灵芝固态发酵中药渣产漆酶及其对偶氮染料的脱色

为提高灵芝(Ganoderma resinaceum)固态发酵产漆酶能力,实现中药渣资源再利用,以中药渣和麦麸为发酵的主要基质,在单因素试验的基础上,以漆酶酶活为考察指标,采用Plackett-Burman(PB)试验和正交试验设计优化固态发酵产漆酶条件,且探究所产漆酶对偶氮染料的脱色能力。结果表明:以质量分数12%的接种量将灵芝种子液接种到中药渣(粒径0.4 mm)与麦麸比例为6∶4、初始含水量质量分数60%、蔗糖质量分数2%、酵母粉质量分数0.6%、Mg^(2+)浓度3 mmol/L、初始pH5.5的固态发酵培养基中,发酵14 d后,漆酶酶活达到(56.13±1.20)U/g。以2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2’-Azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic Acid)Ammonium Salt,ABTS)为介体,漆酶粗酶液与亚甲基蓝、酸性橙7、氨基黑10B进行脱色处理10 h后,其脱色率分别可达46.7%、84.6%和61.1%。

稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立

目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。

酶法制备克唑替尼关键手性前体及工艺优化

利用羰基还原酶NsCRs19不对称催化制备克唑替尼关键手性前体(S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙醇。通过构建羰基还原酶葡萄糖脱氢酶双酶催化体系对2,6-二氯-3-氟苯乙酮进行不对称还原,确定了该催化体系最适反应条件,并对其反应体系进行优化。在温度为(40±2)℃、pH为(7.5±0.5)的条件下,生物酶质量分数约为6%反应24 h即可完全还原质量浓度为165 g/L(约0.8 mol/L)的2,6-二氯-3-氟苯乙酮,转化率>99.2%,收率>93.7%,手性纯度e.e.(s)>99.9%。以生物酶法不对称还原制备克唑替尼关键手性前体,缩短了工艺流程,节约了生产成本,避免了手性拆分,为克唑替尼的化学酶法合成提供了可靠的支持。

仿刺参过氧化氢酶的理化性质

利用重组工程菌BL21(DE3)/pET-28c-Aj-CAT外源表达了具有抗氧化活性的重组仿刺参过氧化氢酶(rAj-CAT)。重组rAj-CAT在405 nm处具有一个特征峰谱,且该峰谱不受Na_(2)S_(2)O_(4)的影响。典型的过氧化氢酶抑制剂如3-氨基-1,2,4-三唑、盐酸羟胺和叠氮化钠对rAj-CAT具有显著抑制作用。结果表明,此海参种属的过氧化氢酶属于典型的单功能过氧化氢酶。对重组rAj-CAT蛋白的最适酶活条件进行检测,确定rAj-CAT在较低温度范围(4~30℃)都具有降解H_(2)O_(2)的作用,最适酶活温度为10℃;rAj-CAT具有较宽的pH耐受范围,在pH 4.0~11.0都具有催化活性;rAj-CAT也能耐受多种金属离子和化学物质,包括Triton X-100、吐温20和EDTA;但DTT、β-ME、SDS、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶对rAj-CAT水解H_(2)O_(2)的活性具有较强的破坏作用。结果表明,海参种属的Aj-CAT是一种能够在较低温度时具有较高活性的过氧化氢酶,并且酶学性质稳定。

锰纳米酶比色法检测电化学制备过氧化氢

为了拓展纳米酶的应用,采用离子交换和高温热解法将均匀分散的锰原子掺杂到中空碳骨架中制备中空结构的锰纳米酶;提出一种基于锰纳米酶的比色法,用于检测电化学双电子氧还原原位产生的过氧化氢的浓度。结果表明,锰纳米酶具有优异的类过氧化物酶活性,可催化过氧化氢将无色3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺(TMB)氧化为蓝色氧化态TMB;当过氧化氢浓度为0~6 mmol/L时,体系的吸光度与过氧化氢浓度具有良好的多段线性关系,锰纳米酶比色法具有极低的检出限(0.45μmol/L)和优异的抗干扰性能。

基于柱芳烃与联吡啶构建多功能纳米胶囊

高分子胶囊有着优越的性质和功能,在食品安全、医药、催化等领域都有着重要的应用。共价自组装是近年来制备高分子胶囊的一种新方法,该方法通过构筑单元与连接链在溶液中一步横向交联形成结构规整的分子胶囊。共价自组装方法制备胶囊一个突出的优点是组分的功能性选择,多种排列组合的可能极大地拓展了高分子胶囊的应用范围。选用柱芳烃这种大环分子作为构筑基元,并在其侧面桥连亚甲基部位修饰溴,与带有联吡啶结构的氨基柔性链交联,构建了一种尺寸在500nm左右、集主客体响应和贵金属拓展性于一体的多功能纳米胶囊。

酸枣叶缩合单宁的分离鉴定及其对黑色素生成的抑制机制

目的:研究酸枣叶缩合单宁的结构特征及其对酪氨酸酶的效应和黑色素生成的抑制机制。方法:利用Sephadex LH-20凝胶柱色谱技术分离制备酸枣叶缩合单宁纯化物,采用硫醇降解结合高效液相色谱-电喷雾电离质谱(Thiolysis-HPLC-ESI-MS)解析酸枣叶缩合单宁的结构单元组成,运用酶动力学、紫外光谱、荧光猝灭等方法系统研究酸枣叶缩合单宁对酪氨酸酶的抑制作用机理,应用CCK-8法、多巴氧化法、NaOH裂解法和实时荧光定量PCR检测酸枣叶缩合单宁对小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)的增殖、酪氨酸酶活性、黑色素合成及其相关基因表达水平的影响。结果:构成酸枣叶缩合单宁的主要结构单元是(表)儿茶素和(表)棓儿茶素;酸枣叶缩合单宁具有较强的酪氨酸酶单酚酶和二酚酶抑制活性,是二酚酶可逆的混合型抑制剂;酸枣叶缩合单宁可有效抑制B16F10细胞的增殖、酪氨酸酶活性、黑色素生成量以及酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、小眼畸形相关转录因子(MITF)等基因的表达。结论:通过在酶水平和细胞水平的综合分析,阐明酸枣叶缩合单宁对B16F10细胞黑色素合成的分子抑制机制,为后期酸枣叶缩合单宁开发为新的美白化妆品添加剂和果蔬保鲜剂提供理论依据。

醇脱氢酶的研究进展及其催化增值生物基呋喃化合物前景展望

醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)广泛存在于生物体内,可应用于多种有机物选择性氧化还原。近年来,随着对酶的催化机理、结构认知、分子改造和反应系统构建及强化等方面研究的逐渐深入,ADH在生物基平台化合物的高选择性催化氧化还原方面展现出巨大潜力。本文综述了ADH分子设计和定向改造的前沿技术和进展,面向常见的辅因子依赖性ADH催化过程中的辅因子高成本及稳定性差等局限,聚焦酶反应过程中的辅因子再生强化技术,梳理了适用于ADH催化系统的化学驱动、酶驱动和光电驱动辅因子再生路径,并从单酶催化体系开发、多酶协同催化系统挖掘、全细胞催化技术发展与应用等多个角度概述了ADH在催化生物基呋喃化合物方向的最新研究进展。随着对ADH应用潜力的进一步挖掘,未来ADH有望成为生物基呋喃增值工业化进程中的重要组成部分,为能源生产的绿色发展提供助力。

海南地区3~14岁人群乳酸脱氢酶参考区间分析

目的建立海南地区3~14岁人群乳酸脱氢酶(LDH)参考区间。方法选取2020年12月—2021年9月海南省妇女儿童医学中心行健康体检的3~14岁人群36945名,检测血清LDH水平。按年龄和性别进行分组比较。采用百分位数法建立3~14岁人群LDH的参考区间。比较建立的参考区间与成人LDH参考区间的差异。结果3~14岁人群不同年龄段LDH水平差异有统计学意义(P<0.001)。6~14岁年龄段不同性别少年儿童LDH水平差异有统计学意义(P<0.05)。初步建立不同年龄、性别的LDH参考区间。建立的3~14岁人群LDH参考区间与成人参考区间相比,差异有统计学意义(P<0.001)。结论初步建立了海南地区3~14岁人群的LDH参考区间。现行的成人LDH参考区间不适用于3~14岁人群。

鸟苷酸环化酶参与血红素氧化酶1对抗心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的研究血红素氧化酶1(HO-1)在对抗心肌缺血/再灌注损伤中的作用,并探讨鸟苷酸环化酶(GC)是否参与其作用机制。方法采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,观察心功能和酶学等指标。结果(1)HO-1的诱导剂高铁血红素可明显抑制缺血/再灌注心脏左室舒张末压(LV-EDP)增高,左室舒张压(LVDP)和最大左室收缩、舒张速率(±dP/dtmax)的下降;减少复氧期乳酸脱氢酶(LDH)释放,缩小心肌梗死面积(P<0.01)。(2)HO-1的抑制剂可加重缺血/再灌注心脏LVDP和±dP/dtmax下降,LDH释放和梗死面积明显高于单纯缺血/再灌注组(P<0.05)。(3)GC的抑制剂亚甲蓝可部分取消高铁血红素降低缺血/再灌注心脏LVEDP,增加LVDP和±dP/dtmax的作用,使LDH的释放和梗死面积明显增加(P<0.05)。结论诱导HO-1增加可保护缺血/再灌注心肌,其作用可能通过激动鸟苷酸环化酶途径来完成。

真菌漆酶的酶活测定方法评价

目前真菌漆酶酶活的测定方法多样,没有统一的标准,致使不同研究之间的漆酶酶活无法进行比较分析,也造成漆酶产品在酶活质量意义上的混乱。因此,对测定真菌漆酶酶活的各种不同的分光光度法进行了综述和比较分析,认为采用ABTS法作为测定漆酶酶活的方法较具合理性和科学性,建议作为漆酶酶活测定的统一方法。

微量元素硒、锰、氟对SOD活性的影响

目的 探讨微量元素硒、锰、氟对SOD活性的影响。方法 采用VitC阻断法测定了不同浓度Se、Mn、F对SOD活性的影响。结果 ①Se浓度由 0 μg L增加到 40 0 μg L时 ,SOD活性由 5 10 0U mg上升到 5 40 0U mg ;Se浓度继续增加到 60 0 μg L ,SOD活性下降至 5 14 0U mg ;②Mn浓度由 0 μg L增加到 40 0 μg L ,SOD活性由 5 10 0U mg上升到 5 90 0U mg ;Mn浓度继续增加 5 0 0 μg L ,SOD活性下降 5 2 0 0U mg ;③F浓度由 0 μg L增加到 10 0 μg L ,SOD活性由 5 10 0U mg上升至 5 2 80U mg ;继续增加F浓度到 2 0 0 μg L ,SOD活性下降为 5 170U mg ;再增加F浓度至 40 0 μg L ,60 0 μg L ,80 0 μg L ,SOD活性基本维持在 5 2 0 0～ 5 180U mg之间。结论 微量元素Se、Mn、F与抗氧化物酶SOD活性具有密切关系 ,低浓度Se、Mn、F对SOD活性起激活效应 ,高浓度Se、Mn。

蜜环菌胞外漆酶酶活力的分光光度法测定

采用分光光度法测定蜜环菌 (Armillaria mellea)胞外漆酶 (L accase)的活力 ,分别以 2 ,2’-连氮 -二 (3-乙基苯并噻唑 - 6 -磺酸 ) (简称 ABTS)、丁香醛连氮、愈创木酚和邻联甲苯胺为底物 ,比较了这 4种底物对漆酸的敏感性 ,探讨了酶反应时间、温度、缓冲液及其 p H值和底物与酶的用量等条件对漆酶催化反应的影响 .实验结果表明 。