长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析

用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对长白山眉蝮蛇蛇毒所含4种主要酶:磷脂酶A_2、精氨酸酯酶、纤溶酶及L-氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,结果表明WALDI-TO-FMS具有灵敏度高、分辨能力强、分析时间短及样品用量少等优点.用MALDI-TOFMS法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷、快速且重现性好,是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所无法比拟的.

蚯蚓纤溶酶的成分分析

蚯蚓纤溶酶（ｅａｒｔｈｗｏｒｍｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｓ，ＥＦＥ）是从蚯蚓体内提取的一类纤维蛋白水解酶，是一种新的溶栓药．利用亲和层析技术，自蚯蚓匀浆液一步提取蚯蚓纤溶酶，并对该酶的成分进行了分析．实验表明，蚯蚓纤溶酶是一组非均一的糖蛋白，含糖量为５％左右，以中性已糖为主；等电点（ｐＩ）在４．０以下；富含Ａｓｐ，而Ｍｅｔ、Ｔｒｐ和Ｌｙｓ含量很少；ｌｍｇ蚯蚓纤溶酶相当于２５０～３００尿激酶单位．

长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶制品的生化分析

对长白白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的理化及酶学性质进行系统研究． 结果表明， 该酶为一分子量为３８ ０００， 等电点为４５０ 并对温度有很高稳定性的糖蛋白， 该酶的最适ｐ Ｈ 值为８０，其活力可被 Ｄ Ｆ Ｐ 和 Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ抑制．

钙蛋白酶抑制蛋白功能结构域Ⅳ在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清的制备

为了研究钙蛋白酶系统在细胞发育及其它生理过程的功能 .应用 PCR从鼠钙蛋白酶抑制蛋白 ( calpastatin) c DNA中扩增了保守的具有功能的结构域 ( 40 4 bp) ,克隆于 p GEX- KG载体 .重组质粒 p GEX- Calp4在大肠杆菌中经 IPTG诱导可表达分子量约 4 5 k D融合蛋白 GST- Galp4 .诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽 - Sepharose4 B亲和层析柱得到纯化的 GST- Calp4融合蛋白 ,纯度达电泳纯 .纯化的 GST- Calp4免疫兔 8周后 ,抗血清的效价达 1∶ 64 .Western- blot分析表明制备的抗血清确实可以与肌细胞中分子量为 1 4 0 k D左右蛋白 (亦即完整 calpastatin)发生特异的免疫交叉反应 。

固定化木瓜蛋白酶的制备及性质

用硫酸铵分级沉淀法从木瓜粉提取液中分离木瓜蛋白酶，将其偶联在对氨基苯磺酰乙基（ＡＢＳＥ）－交联琼脂上，制得固定化木瓜蛋白酶。实验结果表明：木瓜蛋白酶与ＡＢＳＥ－交联琼脂的最佳结合量是每克干交联琼脂１４．０μｍｏｌ／ｓ，固定化酶的最适反应ｐＨ为８．０，最适反应温度为７５℃，Ｋｍ（ａｐｐ）为６７．６ｍｍｏｌ／Ｌ。固定化酶对尿素的稳定性较高，用６ｍｍｏｌ／Ｌ脲处理过夜能保存８２％的活力，而游离酶在同样条件下将失去全部活性。

壳聚精固定胰蛋白酶的研究

以自制壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂将胰蛋白酶固定化。5％戊二醛在30℃下处理载体8h，加10ml酶液（0．3mg／ml，pH7．0）固定12h以上，活力回收率达67％－75％。固定化酶的表观米氏常数（酪蛋白）k'm=22．22mg／ml，而游离酶k'm=4.17mg／ml；固定化酶最适温度为80℃，比游离酶提高了30℃；固定化最适pH值为7．5，而游离酶为8．0；固定化酶的贮存稳定性很好，二个多月重复使用，酶活力未见明显下降。

邻{2-[α-(2-羟基-5-磺基苯偶氮)-亚苄基]肼基}苯甲酸与胃蛋白酶的作用机理

采用UV光谱法研究了在 pH 2 1 5的酸性溶液中 ,邻 {2 [α ( 2 羟基 5 磺基苯偶氮 ) 亚苄基 ]肼基 }苯甲酸 (ZCN)与胃蛋白酶 (Pepsin)相互作用的反应机理及基本条件 ,认为它们之间主要靠分子间的静电引力结合 .研究了酸度、温度、时间、离子强度、不同类型蛋白质等对该反应体系的影响 .测得ZCN与Pepsin复合物的表观摩尔吸光系数ε =3 1 6× 1 0 5 L/mol·cm ,两者的最大结合数为 1 0 0 .探讨了适应该反应的结合模式 ,由实验数据整理后认为基本符合Scatchard模型 .

大鼠血纤溶酶原的纯化和鉴定

以大鼠血清为原料，采用硫酸按盐析法，Lysine－Sepharose4B、Red－SepharoseCL6B和SephadexG150层析法，分离提纯了大鼠血纤溶酶原（Plasminogen，PGn）。利用尿激酶依赖的酶谱分析法鉴定其酶原的生物活性，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酸胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）对其纯度和分子量分析。结果表明纯化得到的为90kDa的单一组分的纤维蛋白溶酶原。这种纯化方法的建立为进一步大量制备PGn奠定了基础。

麻蝇幼虫肠道蛋白酶BGP的分离纯化及性质

棕尾别麻蝇幼虫肠液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，Ｘ光片显影，呈现两条蛋白酶活性带．ＩＥＦ后，两条蛋白酶活性带的等电点分别为ｐＨ７．７和６．８．麻蝇幼虫肠液经５５％～７５％硫酸铵沉淀，以及连续两次制备等电聚焦，分离纯化出等电点约为ｐＨ７．７，分子量约为３５ｋＤ的蛋白酶ＢＧＰ．该酶能分解酪蛋白和类胰蛋白酶专一底物Ｂｚ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－ＡｒｇＮＡ，不能分解弹性蛋白酶专一底物ｅｌａｓｔｉｎ－ＣｏｎｇｏＲｅｄ和类胰凝乳蛋白酶专一底物Ｓｕｃ（Ａｌａ）２Ｐｒｏ－ＰｈｅＮＡ．ＳＢＢＩ，Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ和ＰＭＳＦ能强烈抑制其活性．专一底物和抑制剂的结果表明，ＢＧＰ是一种类胰蛋白酶．其最适反应温度为５０℃，最适作用ｐＨ为８．５．不耐高温，５０℃保温３０ｍｉｎ活性急剧下降．Ｈｇ２＋，Ｚｎ２＋和Ｃｕ２＋能抑制酶活性．Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋对酶无激活作用，ＥＤＴＡ无抑制作用．

α-天冬氨酰二肽酶基因工程菌的固定化及其应用

报道 α天冬氨酰二肽酶基因工程菌的固定化及其细胞性质， 并用于 Ａｓｐａｒｔａｍ ｅ的合成．

木瓜蛋白酶微胶囊化的研究

采用βＣＤ（环状糊精）作为包囊剂，经喷雾干燥制得木瓜蛋白酶微胶囊酶制剂，研究微胶囊化的条件及喷雾干燥条件，并用扫描电镜测定了其结构．由于βＣＤ微胶囊的作用，使木瓜蛋白酶减少了环境中不利因素对酶活力的影响，赋予木瓜蛋白酶新的性能，使其应用范围更广．

碱性蛋白酶交联酶晶体的制备及稳定性

研究了用透析平衡法制备碱性蛋白酶晶体的过程，在硫酸铵饱和度为２５％的条件下获得了符合要求的碱性蛋白酶晶体，然后采用戊二醛进行交联，制备出了交联酶晶体，并对其在高酸碱度、高温、有机溶剂或有机溶液中的稳定性进行了研究．实验结果表明，交联酶晶体有较高的稳定性．

胰蛋白酶固定化新工艺研究

我们以脱乙酰壳聚精为载体，明胶包埋，戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶的固定化条件和固定化胰蛋白酶的性质进行了研究．本文报道的新工艺，是一种制备固定化胰蛋酶的理想方法．它兼有絮凝法迅速方便，包埋法成型容易和交联法强度大等优点．本文还就交联剂用量、明胶用量、ＰＨ值以及载体与酶的比例对固定化胰蛋白酶的影响进行了比较．在所选择的固定化条件下，固定化酶的活性回收率可达５６％以上．固定化酶的最适温度为６８℃，最适ＰＨ７．９，Ｋｍ值升高，热稳定性、ＰＨ贮存稳定性以及在乙醇溶液中的抗变性亦明显高于可溶性胰蛋白酶．在柱式反应器内，以２．５％酪蛋白为底物时操作半衰期为４６天左右。

脱水胰凝乳蛋白酶制备方法的改进

对脱水胰凝乳蛋白酶（ＡｎＣｈｔ）的制备方法进行改进．在粗品ＡｎＣｈｔ亲和层析纯化前再进行一次ＰＭＳＦ化学修饰，降低ＡｎＣｈｔ中残存的蛋白水解酶活力．分析表明，用该方法制得的ＡｎＣｈｔ与抑制剂ＢＰＴＩ结合的化学计量及强度均接近于理论值，并且其催化活力几乎全部丧失，表明纯度很高。

蛋白酪氨酸激酶的酶联免疫吸附测定方法

通过对多种影响因素的摸索，建立了蛋白酪氨酸激酶（ＰＴＫ）的固相ＥＬＩＳＡ测定方法，并对该方法进行了改进和标准化处理。研究结果表明ＥＬＩＳＡ法具有较好的可重复性、特异性与灵敏度，操作简便安全，是一种切实可行的好方法。

SOPC的合成及其在色氨酸酶活力测定中的应用

以邻硝基苯胺为起始原料，经邻硝基苯胺的重氮化、Ｌ－半胱氨酸与邻硝基苯重氮盐的取代反应等步骤制备ＳＯＰＣ，通过活性炭吸附、氨水洗脱和硅胶柱层析纯化，所得产品在熔点、晶形、紫外和红外吸收等方面与文献报道相一致．将合成的ＳＯＰＣ应用于８ 株工程菌和１ 株宿主菌的色氨酸酶活力测定，结果表明工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高，其中ＷＷ－５３ 号比宿主菌高１５ 倍．

分离尿激酶的亲和色谱填料的制备

合成了分别以 Sepharose和聚甲基丙烯酸环氧丙酯为基质、对氨基苯甲脒为配基的分离尿激酶的两种亲和色谱填料 ,并用于尿激酶粗品的直接纯化 ,活性回收率分别为 1 0 8.3 %和 43 .4% ,比活提高倍数分别为 9.0 6倍和 3 6.9倍。

用二氧化碳电极测定霉菌537蛋白酶的活性

在霉菌５３７蛋白酶的作用下，酪蛋白发生水解，生成酪氨酸和谷氨酸等组成该蛋白的氨基酸。加入Ｌ－谷氨酸脱羧酶使谷氨酸发生脱羧反应，会释放出ＣＯ２，后者可用ＣＯ２电极进行测定，从而间接地算出５３７蛋白酶的活性。在蛋白酶活性为２０００￣１００００单位范围内，电位变化值与活性呈现良好的线性关系。

猪精浆中,二肽基肽酶Ⅱ的提取、纯化和N-末端氨基酸序列分析

本文采用ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、Ｓｅｐｈａｃｏｙｌｓ－３００ＨＲ、ＭｔｒｅｓＧｅｌＲｅｄＡ、Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｚｉｎｅ－ＣｈｅｌａｔｅＣｅｌｌｕｌｆｉｎｅ，Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｕＰｅｒｏｓｉｉｎｔｈｅＦＰＬＣ柱层析的方法，从猪精浆中将二肽基肽酶Ⅱ提纯到１６００倍。经聚丙烯酸胺凝胺电泳分离鉴定后，得到了单一的一条区带。采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ时，在用β－ＭＥ存在条件下，其分子量为６１ＫＤ。