过量碘对大鼠血清TC和TG水平的影响

目的观察长期过量碘摄入对大鼠血清TC和TG水平的影响,并对其在评价过量碘危害中的意义进行探讨。方法将60只Wistar大鼠按体重随机分为6组:A组正常对照组,给予去离子水;B～F组为过量碘组,碘剂量分别为1800、3600、7200、14000和28000μgL,喂饲以KIO3配制成不同浓度的高碘水。3个月后,观察甲状腺病理变化,测定尿碘水平、血清甲状腺激素水平和血脂水平。结果各过量碘组大鼠甲状腺未出现明显病理组织学改变。各过量碘组大鼠的尿碘水平随着碘剂量的升高显著升高。TT4水平呈剂量依赖性的降低,在7200μgL组开始与对照组相比有显著性差异。TT3水平各组间无显著性差异。血清TC水平与碘剂量呈显著正相关,在3600μgL组就显著高于正常对照组。TG水平虽有升高,但各组间无显著性差异。血脂与甲状腺激素和尿碘水平的相关性分析表明,血清TC水平与尿碘水平呈显著正相关,与TT4水平呈显著负相关。结论长期过量碘摄入会升高大鼠血脂水平,血脂可以与尿碘、血甲状腺激素一起作为监测过量碘摄入的生物标志物。

重组人甲状旁腺激素1-34的氨基酸组成分析

分析重组人甲状旁腺激素 1-3 4的氨基酸组成 ,为该品种的结构鉴定提供依据。水解条件含 1%苯酚的6mol L盐酸 ,10 5℃水解 2 4h ;衍生方法异硫氰酸苯酯 (PITC)柱前衍生法 ;氨基酸测定色谱条件色谱柱为PhenomenexprodigyODS 10 0A。 (4 .6mm× 2 5cm ,5 μm) ;流动相A为 0 .1mol L醋酸钠 (pH6.5 ) -乙腈 (93 :7) ,B为水 -乙腈 (1:4) ;二元梯度洗脱 ;检测波长为 2 5 4nm ;流速为 1ml min ;柱温为 40℃。结果 :实验值与理论值一致 ,偏差小于 10 %。本法准确、可靠、重现性好 ,可用于该产品的质量控制。

人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达及鉴定

化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet。生物活性试验证明重组hPTH具有激活腺苷酸环化酶、增加骨质量和骨密度等作用。

甲状旁腺激素构效关系的研究进展

甲状旁腺激素(PTH)是生物体内调节钙、磷代谢最为重要的肽类激素之一,其氨基端1-34片段具有全分子PTH与受体结合的能力及生物活性,被广泛用于研究PTH的结构与功能。PTH二级结构中富含α-螺旋,该螺旋结构在PTH与受体相互作用中起重要作用,其中羧基端负责与受体结合,氨基端负责生理活性。现从甲状旁腺激素的结构、与受体的相互作用和构效关系等角度出发,综述了甲状旁腺激素近年来的研究状况,为开发新型骨质疏松症治疗药物提供理论依据。

人甲状旁腺素(1-34)的合成与聚乙二醇化修饰

目的合成人甲状旁腺素(1 34) [hPTH(1-34) ]并进行聚乙二醇化修饰。方法应用固相多肽合成方法合成并经高效液相色谱纯化得hPTH(1-34) ,Cys-hPTH(1- 34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 。Cys hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 在水溶液(pH 7～8)中分别与平均相对分子质量为5 0 0 0的单甲氧基马来酰亚胺基聚乙二醇(mPEG50 0 0 MAL)反应,经高效液相色谱纯化得Cys(mPEG50 0 0 MAL)- hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys(mPEG50 0 0- MAL) -NH2 。结果hPTH(1-34) ,Cys(mPEG50 0 0 MAL) hPTH(1 34)和hPTH(1 34) Cys(mPEG50 0 0 MAL) NH2 的质谱和氨基酸组成分析结果均与理论值一致。hPTH(1-34) -Cys(mPEG50 0 0-MAL) NH2 保持了较好的体外活性,Cys(mPEG50 0 0- MAL) hPTH(1-34)保持了较好的体内活性。结论采用一种简便的方法成功实现了对hPTH(1-34)

重组人甲状旁腺激素效价测定方法的研究

采用酶标法、放免法、化学发光法对 rh PTH效价进行测定,并进行了比较性研究。结果表明,三种方法间无显著性差异。酶标法简单快捷、安全,更适合作为常规重组人甲状旁腺激素生物学活性的测定。

甲状旁腺素对成骨样细胞增殖的调节作用

甲状旁腺素（ＰＴＨ）是调节钙磷代谢的经典激素，有报道ＰＴＨ对其靶细胞－成骨细胞有促增殖分化作用。经多层次、多水平的实验研究证实，ＰＴＨ对成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８确有促增殖作用。（１）细胞计数、ＭＴＴ［３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａ－ｚｏｌ－ｚ－ｙｉ）２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］测定及ＳＲＢ（ｓｏｄｉｕｍｒｈｏｄａｍｉｎｅＢ，ＳＲＢ）染色均显示经ＰＴＨ（１０－９ｍｏｌ／Ｌ）处理的细胞，其数目明显增加；（２）３Ｈ－ＴｄＲ参入增加；（３）与增殖相关的原癌基因（ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｋｉ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ）的表达增强；（４）成骨细胞特征性蛋白－碱性磷酸酶活性降低．这些结果不仅表明该激素具有非经典样作用。

严重产后出血并发急性肾损伤患者的甲状旁腺激素变化的临床意义

目的初步探讨严重产后出血并发急性肾损伤患者的甲状旁腺激素变化的临床意义。方法采用前瞻性研究,选取2014年6月-2016年6月该院严重产后出血并发急性肾损伤患者相关资料[年龄、总出血量、总去甲肾上腺素(NA)的用量、肌酐(Cr)、离子钙(i Ca^(2+))、离子磷(P)、急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分及甲状旁腺激素(PTH)]进行统计学分析。结果共收集符合条件患者80例,分为并发急性肾损伤(AKI)Ⅰ级组患者23例,AKIⅡ级组患者34例,AKIⅢ级组患者23例,3组在入重症加强护理病房(ICU)时各项指标比较,其中,NA总用量、i Ca^(2+)和P比较,差异无统计学意义(P>0.05),而年龄、Cr、出血量、APACHEⅡ评分及PTH比较,差异有统计学意义(P=0.00)。3组治疗前后的Cr、APACHEⅡ评分、i Ca^(2+)、P和PTH比较,差异有统计学意义(P=0.00)。3组在好转后转出ICU时比较,Cr、APACHEⅡ评分和PTH比较差异有统计学意义(P<0.05),i Ca^(2+)和P差异无统计学意义(P>0.05)。PTH和Cr、APACHEⅡ评分呈正相关,与i Ca^(2+)无相关。结论甲状旁腺激素在严重产后出血的急性肾损伤患者中的变化与病情严重程度有关,和i Ca^(2+)关系不大。

甲状旁腺激素与骨质疏松及其他疾病关系的临床研究

甲状旁腺激素(PTH)是由甲状旁腺主细胞合成、分泌的由84个氨基酸组成的单链多肽[1].PTH为生命所必需,是调节钙、磷代谢、维持机体钙平衡的主要激素,靶细胞为成骨细胞及肾小管细胞.有研究表明,中枢神经系统可能是PTH的另一靶器官[2],此外,PTH对心脏及调节平滑肌的作用也有研究.PTH在生物学及医学方面越来越受到人们的关注.

人甲状旁腺激素调节骨保护素及其配体基因表达的PKA、PKC信号传导通路研究

目的探讨PTH调节成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的信号传导通路。方法采用原代培养的胎鼠颅盖骨成骨细胞,在细胞培养5 d和6 d后,分别加入抑制PKC和PKA传导通路的Calphostin-C 500 nmol/L24 h和H-89 30μmol/L 4 h。在细胞培养5 d后,加入刺激PKC传导通路的PMA10-7mol/L24 h后,分别加入和不加入hPTH(1-34)100 ng/ml,继续培养2 h和6 h分别收集细胞,采用RT-PCR方法半定量检测OPG和RANKL基因的表达变化。结果PKA通路抑制剂H-89 30μmol/L能显著改变100 ng/ml hPTH(1-34)导致的OPG和RANKL基因的表达趋势,表现为上调OPG基因和下调RANKL基因(35%和59%)。而PKC通路激动剂和抑制剂对100 ng/ml hPTH(1-34)导致的OPG和RANKL基因的表达趋势无影响。结论hPTH持续刺激上调RANKL基因,下调OPG基因的表达,主要是通过PKA通路介导,在此过程中,PKC通路无作用。

甲状旁腺素、胰岛素样生长因子-Ⅰ对骨特征性标志蛋白的影响

为了阐明甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ，ＰＴＨ）、胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ，ＩＧＦ－Ⅰ）在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时对其分化状况的影响，研究了ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ对骨特征性标志蛋白碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌ－ｃｉｎ）ｍＲＮＡ表达及骨胶原蛋白（ｃｏｌａｇｅｎ）合成的影响．结果表明，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可抑制ＡＬＰ活性，ＰＴＨ的抑制作用强于ＩＧＦ－Ⅰ，抑制作用具有时间剂量依赖性；ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可诱导骨钙素ｍＲＮＡ表达增加；ＰＴＨ能够促进３Ｈ－脯氨酸参入新生小鼠颅骨组织，既ＰＴＨ能够骨胶原蛋白合成增加．这些结果提示，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时也促进其分化，表明在成骨细胞的生发成熟过程中，增殖、分化现象相辅相成，相伴而行．

重组人甲状旁腺激素肽(1-34)在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化

人工合成人甲状旁腺激素1～34肽段(PTH134)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH134,hPTH134肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH134一致。生物学活性研究表明,hPTH134在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用。

Polo样激酶3针对P73蛋白的磷酸化位点分析

目的:探讨P73蛋白上存在的能够被polo样激酶3(polo-like kinases 3,Plk3)磷酸化的结构域或位点,并分析Plk3对P73介导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:免疫共沉淀法检测COS-7细胞中Plk3与P73蛋白之间的相互作用,荧光免疫染色法检测Plk3与P73蛋白在细胞中的定位。制备不同的P73缺失突变体GST融合蛋白,体外点突变法构建GST-P73(1～130)点突变的P73(T86A)(第86位苏氨酸点突变为丙氨酸)质粒,体外磷酸化实验分析P73中被Plk3磷酸化的结构域或位点。通过检测PARP蛋白的裂解分析Plk3对P73介导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。结果:Plk3与P73蛋白之间存在相互作用,Plk3与P73蛋白共定位于COS-7细胞核中。制备获得不同的P73缺失突变体GST融合蛋白,Plk3在P73蛋白N端第63～113位氨基酸残基之间磷酸化P73蛋白。GST-P73(1～130)融合蛋白第86位苏氨酸点突变为丙氨酸(T86A)之后,不影响GST-P73(1～130)蛋白的磷酸化状态。Plk3可抑制P73介导的HeLa细胞凋亡。结论:Plk3通过与P73蛋白结合,诱导P73蛋白N端第63～113位氨基酸磷酸化,但第86位苏氨酸并非Plk3的特异作用位点;此外Plk3抑制P73介导的HeLa细胞凋亡。

不同季节牧草钙磷含量对放牧绵羊血清降钙素的影响

研究了不同季节牧草钙、磷含量对放牧绵羊血清降钙素、碱性磷酸酶、血清钙、无机磷、血清钙磷比和血清钙磷乘积的影响,发现这些血清指标随季节变化明显。血清降钙素夏季时的含量为(184.627±117.224)ng/L,极显著的低于秋季时的含量(571.317±254.337)ng/L(P<0.01),但是与冬春季的含量(345.583±311.591)ng/L差异不显著(P>0.05),并且冬春季血清降钙素含量与秋季含量差异也不显著。从相关分析得出,降钙素与牧草钙,磷和钙磷比呈负相关,相关系数为-0.147,-0.234和-0.106,但是相关性不强。该地区在3季内,牧草能够满足放牧绵羊对钙的需要,但是不能满足对磷的需要(除夏季外),因此,引起钙、磷从骨骼中动员,使得血清降钙素、碱性磷酸酶等血液指标发生变化。应为该地区加强补饲,避免由钙磷缺乏引起的生产力下降。

人甲状旁腺激素结构与功能研究进展

甲状旁腺激素 (PTH)分子由 84个氨基酸残基组成。二级结构中富含α 螺旋 ,该螺旋结构在与受体相互作用中起重要作用。探索PTH分子结构与功能间的关系 ,有助于制药工业的发展 ,为临床治疗提供借鉴。

PTHrP受体胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

ＰＴＨｒＰ（甲状旁腺激素相关蛋白，Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）与多种肿瘤的生物学行为有关，尤其对肿瘤的骨转移起重要作用。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常值得研究的课题。从肾癌组织中提取ＲＮＡ，采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）方法获得ＰＴＨｒＰ受体Ｎ端胞外区５４３碱基对的带信号肽的ｃＤＮＡ片段。将其核苷酸序列与国外发表的资料相比，基因中第２６２位核苷酸由Ｔ变为Ｃ，相应密码子由ＴＡＣ变为ＣＡＣ，导致氨基酸变异，即由酪氨酸变为组氨酸。将获得的受体基因克隆到原核表达载体ｐＥＴ３ａ，在大肠杆菌得到高效表达，经ＥＬＩＳＡ证实表达产物可与ＰＴＨｒＰ特异性结合。体外生物学活性检测表明表达产物可阻断ＰＴＨｒＰ的生物学活性。

鸡甲状旁腺素基因质粒对蛋鸡生产性能、蛋壳质量及血液激素水平的影响(英文)

试验选用56周龄新扬州鸡产蛋鸡150只,随机分为3个处理,每个处理5个重复,各重复10只。研究经腿肌注射0、200和400μg鸡甲状旁腺素基因质粒(pCEP4-PTH)对蛋鸡生产性能、蛋壳质量和血液部分激素的影响。试验结果表明,pCEP4-PTH基因质粒可改善蛋鸡生产性能;200μg注射量可显著改善蛋壳强度(P<0.05),400μg注射量对蛋壳质量影响不显著;pCEP4-PTH基因质粒可在蛋鸡体内良好表达,甲状旁腺素(PTH)水平均显著升高(P<0.05),且注射400μg时达到极显著水平(P<0.01),注射400μg pCEP4-PTH基因质粒具有促进内源降钙素(CT)和雌激素(E2)分泌的作用(P<0.05),因而不利于其生物学效应的发挥,两试验组骨钙素(BGP)与对照组差异不显著,提示生产性能和蛋壳质量的改善未对骨骼造成不良影响。pCEP4-PTH基因质粒可改善蛋鸡生产性能和蛋壳质量,且不影响骨骼质量。

HPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)的结构与功能的关系

对各种结构研究及检测方法所得hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)的空间结构进行综合整理,探讨其结构与功能的关系及其应用意义。分别以N端,C端,连接区为着眼点,对hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)在溶液中的构象及其晶体结构进行综述,讨论了特定氨基酸对该多肽的激动剂活性以及受体结合活性的影响,并对这些影响在该多肽结构改造上的意义进行了展望 hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)是由负责生理活性的N端和负责受体结合的C端以及结构随环境而改变的连接区组成的。对hPTH(1-34)及hPTHrP(1-34)结构知识的深入了解必将对理论研究及临床实践产生重要意义。

人甲状旁腺素的基因表达及活性的初步研究

从人甲状旁腺瘤组织中分离到ｍＲＮＡ，逆转成ｃＤＮＡ后，设计带有突变碱基的引物，通过聚合酶链式反应，扩增ｈＰＴＨ基因，使Ｎ端前５氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷（Ａ）．将该基因克隆到表达载体ＰＥＴＩＣ上，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达，实验证实ｈＰＴＨ的表达量占菌体蛋白总量的１１％；细胞粗步处理产物经腺苷环化酶的生物鉴定实验证实，重组ｈＰＴＨ具有生物活性，粗产物５００倍稀释后，ｈＰＴＨ的放免活性为２０６．５ｎｇ／Ｌ。