睾酮对新生期大鼠支持细胞和精原细胞Adamts16表达的影响

[目的]研究睾酮对新生期大鼠支持细胞和精原细胞中血小板反应蛋白解整合素金属肽酶16(a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs 16,Adamts16)基因表达的影响,以及Adamts16基因与大鼠隐睾的关系。[方法]利用RT-qPCR技术检测不同浓度睾酮(10-6、10-7、10-8、10-9 mol/L)培养大鼠支持细胞和精原细胞6、12、24 h后Adamts16基因的mRNA相对表达量,确定睾酮诱导支持细胞和精原细胞Adamts16基因mRNA表达的最佳剂量和最佳时间。应用HE染色法观察出生2、4、8 d野生型和Adamts16基因敲除型大鼠的睾丸位置。[结果]用10-6 mol/L睾酮诱导大鼠支持细胞6 h时Adamts16基因的mRNA相对表达量最高。用10-7 mol/L睾酮诱导大鼠精原细胞24 h时Adamts16基因mRNA相对表达量最高。与野生型大鼠相比,Adamts16基因敲除大鼠睾丸下降速度减缓。[结论]睾酮可促进新生期大鼠睾丸支持细胞和精原细胞Adamts16基因的mRNA表达;Adamts16基因缺失会引起大鼠隐睾症。

雄性小熊猫粪便中睾酮水平的变化与繁殖周期的关系

1999年 12月至 2 0 0 0年 9月 ,使用放射免疫分析法 ,测定了成都动物园和成都大熊猫繁育研究基地的 4只雄性小熊猫粪样中睾酮水平变化情况 ,同时对其行为进行了观察。研究结果表明 ,雄性粪样中睾酮水平在繁殖期(12月～ 3月 )显著高于非繁殖期 (4月～ 9月 ) (P <0 0 1) ,且睾酮水平变化与繁殖行为密切相关。在非繁殖期 ,雄性小熊猫的睾酮水平处于基础的较低水平时 ,其繁殖行为如蹭阴、舔阴、舔标记物和咩叫等几乎没有发生或很少发生 ;而在繁殖期 ,雄性小熊猫的睾酮水平明显升高 ,这些繁殖行为频繁发生。以上结果说明 。

吸入二氧化硅纳米颗粒和微米颗粒对雄性大鼠精子及其功能的影响

目的比较雄性大鼠吸入纳米二氧化硅(nm-SiO2)与微米二氧化硅(μm-SiO2)对其生精功能的影响并探讨作用机理。方法45只雄性Wistar大鼠按体重随机分为5组,分别为nm-SiO2100mg/m3和300mg/m3组,μm-SiO2100mg/m3和300mg/m3组和对照组。动物隔天在装有风扇扬尘的静式染毒柜中吸入染毒2h,对照组不扬尘,只吸入空气。65天后,用HE染色法观察大鼠睾丸组织的病理改变;显微镜下观察精子数量、活动度和畸形率;用试剂盒检测大鼠睾丸组织中乳酸脱氢酶同工酶-C4(LDH-C4)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量和血清中MDA、SOD;ELISA法测定血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。结果nm-SiO2可引起大鼠睾丸组织病理改变,病变程度明显重于同剂量水平的μm-SiO2;nm-SiO2致大鼠精子数量、LDH-C4活力下降和MDA生成量增加程度显著高于同剂量μm-SiO2(P<0·05);nm-SiO2可引起大鼠精子活动度、睾丸组织SDH活力和血清8-OHdG水平下降,精子畸形率升高(P<0·05),但与同剂量μm-SiO2比较差异无显著性(P>0·05);各实验组血清中MDA含量和SOD活力与对照值比较,差异均无显著性(P>0·05);各同剂量水平纳米和微米组之间差异无显著性(P>0·05)。结论nm-SiO2和μm-SiO2对雄性大鼠生精功能影响存在差异,nm-SiO2致生殖损伤能力强于同剂量水平的μm-SiO2。

雄激素受体在大鼠睾丸发育过程中的表达及雄激素对其表达的调节作用

目的 研究发育不同阶段及二甲磺酸乙烷 (EDS)干预的雄性SD大鼠睾丸内雄激素受体 (Androgenreceptor,AR)的分布、发育模式及雄激素调控。 方法 采用免疫组织化学ABC法 ,并应用图像分析测定AR的视物平均光密度 ,以其表示核内AR相对含量。结果 特异性AR免疫染色见于睾丸间质细胞、肌样细胞、支持细胞、精原细胞、血管壁平滑肌细胞及内皮细胞。间质细胞中AR相对含量随大鼠年龄而变化 :2 1d龄居中 ,35d龄最高 ,90～ 1 2 0d龄最低 ,各组间均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。肌样细胞在 3个年龄组大鼠均有很强的AR表达。应用EDS消除成年大鼠内源性睾酮后 ,睾丸内所有AR阳性细胞的免疫染色均显著减弱 ,外源性睾酮替代治疗后免疫染色程度可恢复至对照组水平。结论 雄激素可促进青春期大鼠间质细胞的功能与分化 ;肌样细胞在精子发生过程中有重要作用 ;睾丸内AR的表达受内源性睾酮的调控。

生殖激素水平和睾丸体积对非梗阻性无精症患者精子存在的预测价值

目的探讨非梗阻性无精症(non-obstructive azoospermia,NOA)患者生殖激素水平、睾丸体积等参数对睾丸内是否存在精子的预测价值,以及可用于预测经皮睾丸精子抽吸术(testicular sperm aspiration,TESA)结果的切点值。方法将我中心男科门诊就诊的133例NOA患者按TESA的结果分为有精子组(n=33)和无精子组(n=100),测定生殖激素水平、睾丸体积、精浆果糖、中性-ɑ糖苷酶、染色体、AZF等。结果有精子组和无精子组左侧睾丸体积分别为(9.12±2.25)、(6.25±2.63)m L,右侧睾丸体积分别为(9.23±2.02)、(6.47±2.48)m L,促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)分别为(9.82±2.09)、(22.62±15.00)m IU/m L,总睾酮(total testosterone,TT)分别为(5.19±0.68)、(4.15±1.82)ng/m L,总睾酮/黄体生成素(T/LH)分别为:0.61±0.19、0.57±0.35,总睾酮/雌激素(T/E2)分别为:162.40±16.66和141.40±93.40。无精子组血清FSH显著高于有精子组,优选的FSH水平切点值为13.31 m IU/m L时,其敏感度为74.1%,特异性为96.2%。FSH水平ROC曲线的AUC为0.850,表明其诊断准确性中等。结论就单一因素而言,FSH水平对于NOA患者预测睾丸内是否有精子发生具有相当重要的价值,并且明显优于睾丸体积;两者的联合应用对非梗阻性无精子症患者预测其睾丸内精子存在更有意义。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响

目的先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化。结果不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/Lvs(12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00vs1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05)。10-9mol/L的an-nexin5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P>0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/Lvs(10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/Lvs(17.46±0.31)nmol/L](P<0.01)。结论在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一。

雄激素对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元的影响

目的探讨雄激素对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的影响。方法7月龄雄性SAMP8小鼠30只,随机分为假手术组、去势组及去势+雄激素补充治疗组。十一酸睾酮(TU)剂量为37.4mg/(kg.15d)。雄激素补充治疗45d后,通过Morris水迷宫观察小鼠学习记忆能力;用苏木素伊红染色,Aβ免疫组织化学及图像分析观察海马CA1区神经元的变化。结果1.Morris水迷宫中,去势组定位航行试验潜伏期明显长于其他组(P<0.05),探索实验跨越平台次数减少(P<0.05)。TU补充治疗能改善学习记忆能力,与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.去势组海马CA1区弥漫性空泡变性,细胞排列疏松、紊乱,核深染、固缩;Aβ阳性神经元染色深,其数量及吸光度(A)明显高于其他组(P<0.05)。结论去势后,雄激素缺乏可导致学习记忆能力下降,海马神经元严重损伤,雄激素补充治疗可减轻神经元损伤,改善学习和记忆能力。

FSH对体外培养间质细胞睾酮生物合成的影响

以酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞为实验材料,研究了FSH对间质细胞睾酮合成的影响。实验结果表明:(1)随着培养时间的延长,间质细胞的分泌功能逐渐开始下降;(2)FSH(20ng/ml)对于d2和d4的间质细胞hCG的结合率,细胞内cAMP浓度均无明显影响;(3)FSH(20ng/ml)对于d2期细胞胆固醇和羟胆固醇的转化也不没有明显的影响。这表明,无论间质细胞处于何种时期,FSH不能通过调节细胞膜上的受体数量调节睾酮的合成,也不能通过影响胆固醇的转运调节间质细胞的功能。

雄激素受体的作用机制

主要概述了雄激素受体的作用机制，特别对影响雄激素受体特异性的因素进行探讨．雄激素受体（ＡＲ）属于甾体激素受体超家族，能通过配体依赖方式与特异的ＤＮＡ序列结合。

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。

少精子症患者血清、精浆中游离睾酮水平的测定及意义

目的 :通过测定少精子症患者血清、精浆中游离睾酮 (FT)水平 ,分析血清、精浆FT与少精子症的关系。 方法 :正常对照组 (n =4 4 )、少精子症组 (n =4 4 )男性于上午 8:0 0～ 10 :0 0留取血标本 ;正常对照组 (n =30 )、少精子症组 (n =37)同时留取精液。男性精液常规分析判断精子密度 ,放射免疫分析法测定血清、精浆中FT水平。 结果 :少精子症患者血清中FT浓度为 [(94 .88± 4 2 .0 4 )pmol/L],与正常对照组 [(97.5 0± 4 6 .96 )pmol/L]相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但少精子症患者精浆中FT浓度 [(0 .5 2± 0 .4 4 ) pmol/L]显著低于正常对照组 [(2 .0 1±0 .32 )pmol/L],P <0 .0 1。 结论 :精浆中FT的测定较早反映睾丸的功能 ,有利于少精子症患者的早期诊断和治疗。

雄激素对损伤的血管内皮细胞功能的影响

目的 :观察雄激素对球囊损伤的血管内皮细胞功能的影响。方法 :12只雄性家兔随机等分为替代组和单纯去势组 ,均于去势术后 2周行右侧髂动脉内皮剥脱术 ,替代组同时给予十一酸睾酮。观察去势前、脱内皮术后1周、2周血浆一氧化氮 (NO)、内皮素 1(ET 1)水平的变化 ;脱内皮术后 2周将动物处死 ,取损伤血管段 ,应用免疫组织化学法观察血管细胞粘附分子 1(VCAM 1)的表达和应用HE染色观察血管病理形态的变化。结果 :与单纯去势组相比 ,替代组脱内皮术后 1周、2周血浆NO水平 (μmol L)明显降低 [1周时 :(46 .70± 12 .6 5 )vs(75 .6 2± 16 .0 4 ) ,2周时 :(6 5 .0 3± 16 .2 9)vs(12 5 .4 9± 2 2 .4 5 ) ,P均 <0 .0 1];血浆ET 1水平 (pg ml)明显升高 [1周时 :(14 5 .2 1± 11.4 0 )vs(118.6 6± 12 .82 ) ,2周时 :(111.16± 13.0 1)vs(81.2 8± 7.80 ) ,P <0 .0 0 1或 0 .0 1];脱内皮术后 2周损伤血管组织VCAM 1表达明显增强 [(0 .346 5± 0 .0 0 84 )vs(0 .310 9± 0 .0 0 5 6 ) ,P <0 .0 0 1];损伤血管内膜面积 (mm2 )和内膜 中膜面积比值明显增大 [(1.6 5± 0 .39)vs(0 .6 5± 0 .18) ,(0 .92± 0 .2 0 )vs(0 .38± 0 .0 7) ,P均 <0 .0 1]。结论 :雄性兔去势后补充该实验剂量的睾酮使血清睾酮水平升高可?

大鼠心肌及动脉壁雄激素受体的探讨

采用免疫组化ABC间接法对30例大鼠的心脏及动脉进行了雄激素受体的检测.结果显示:心肌雄激素受体阳性例数为73%(22/30);主动脉阳性例数为64%(16/25);股动脉阳性例数为92%(22/24);心肌中冠状动脉及其分支和前列腺组织中小动脉均为阳性.结果表明:在大鼠心肌和动脉壁存在着雄性激素受体,提示雄激素可能对心血管系统起调节作用.

猪精液抑制素的提取与纯化及其生物活性的测定

新鲜猪精液经乙醇沉淀，丙酮清洗，得抑制素粗提物，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤，收集蛋白质洗脱峰。采用小鼠ｈＣＧ卵巢增重抑制法（改良斯蒂尔曼—波莱生物测定法）对其进行生物活性测定，粗品１０００μｇ剂量组对性成熟前雌性小鼠卵巢增重的抑制作用极显著（Ｐ＜０．０１），第二峰下降部分２００μｇ组的抑制效果显著（Ｐ＜０．０２）。表明从猪精液中可提取到具有生物活性的抑制素制品。

阿尔茨海默病患者血浆脱氢表雄酮水平的研究

目的 探讨阿尔茨海默病患者血浆脱氢表雄酮 (DHEA)水平的变化。 方法 采用放射免疫法测定 48例阿尔茨海默病患者血浆DHEA的水平 ,并与 44例正常老年人 (对照组 )进行比较。 结果 阿尔茨海默病患者血浆DHEA的平均水平是 ( 3 342± 1 438)ng·ml-1,而对照组为 ( 6 6 6 4± 1 6 2 4)ng·ml-1,2组间比较有显著性差异 (P <0 0 5 )。 结论 阿尔茨海默病的发生可能与其血浆DHEA水平的下降有关 ,DHEA可作为阿尔茨海默病的一项诊断指标。

双氢睾酮对快速老化小鼠海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1的影响

目的探讨双氢睾酮(DHT)对快速老化小鼠(SAMP8)海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响。方法 6月龄雄性SAMP8小鼠21只随机分为假手术组、去势组及去势+DHT补充治疗组,每组7只。DHT剂量为1mg/(kg.d),皮下注射21d后,通过Golgi染色观察海马CA1区顶树突树突棘的变化;免疫组织化学及图像分析检测突触素和NMDAR1表达的改变。结果 1.Golgi染色,去势组海马CA1区顶树突树突棘个数明显减少;DHT补充治疗后,树突棘个数明显增多。2.去势组海马CA1区突触素和NMDAR1的表达明显减少,平均吸光度值明显低于其他组(P<0.05)。DHT补充治疗能明显增加突触素和NMDAR1的表达。结论 DHT可调节海马CA1区突触可塑性,使树突棘密度增多。DHT对突触可塑性的影响可能与其调节锥体细胞的NMDAR1有关。

荧光标记反相高效液相色谱法测定蚕蛹体内痕量前列腺素的组成

利用荧光标记法在反相高效液相色谱上对蚕蛹体内痕量前列腺素的分离、鉴定进行了研究，并对不同蛹期蛹体中前列腺素的组成和分布进行了测定。７种前列腺素（ＰＧＡ１，ＰＧＡ２，ＰＧＢ２，ＰＧＥ１，ＰＧＥ２，ＰＧＦ１α，ＰＧＦ２α）在所选择的实验条件下都能得到很好的分离，色谱柱为Ｃ８键合柱（φ６．０ ｍｍ ×１５０ ｍｍ），流动相为甲醇／水＝７０／３０，流速为１．５ ｍＬ／ｍｉｎ，荧光试剂为４－溴甲基－７－甲氧基香豆素；荧光检测波长为Ｅｘ＝３２５ｎｍ，Ｅｍ＝３９７ｎｍ，最小检测限为 １０－１０ｇ／ｍＬ．

睾酮对兔主动脉内皮细胞NO／EDRF产生的调控

为进一步明确雄性激素对老年男性冠心病的有益作用与一氧化氮（ＮＯ）／内皮衍生的松驰因子（ＥＤＲＦ）的产生有关，我们观察了睾酮对兔主动脉及培养的兔主动脉内皮细胞ＮＯ／ＥＤＲＦ产生的调控作用。采用对兔胚胎肺－６（ＲＦＬ－６）成纤维细胞ｃＧＭＰ形成的刺激作用检测ＮＯ／ＥＤＲＦ的产生。结果表明，雄性激素能刺激兔主动脉及兔主动脉内皮细胞产生ＮＯ／ＥＤＲＦ。提示对雄性激素依赖的ＥＤＲＦ产生引起的血管扩张可能是雄性激素缓解老年男性冠心病患者心绞痛症状及改善心肌缺血的机理之一。

膀胱尿道逆行造影对犬前列腺增生的诊断

膀胱尿道逆行造影是应用造影剂从尿道口注入尿道和膀胱,使得尿道和膀胱显影,从而观察其形态、位置以及与周围器官组织关系。前列腺增生是公犬的常见病,增生的前列腺挤压尿道,使其发生狭窄。尿道逆行造影后,在前列腺尿道部位可见造影剂的充盈缺损。其影像清晰直观,结合临床症状,容易得出诊断意见。