一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2。该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用。根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种。菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121℃pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性。结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值。

放线菌Ⅲ-61和A-21对蔬菜枯萎病和灰霉病的控制作用

为了明确拮抗性放线菌Ⅲ-61和 A-21在植物病害生物防治中的实用价值,并为其后续的生防制剂的研发提供科学依据,对其在蔬菜枯萎病和灰霉病上的抗病活性进行了研究.其活菌体的抑菌活性检测采用平板对峙法;菌体代谢物的活性测定利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备无菌发酵液,然后用滤纸片扩散法测定抑菌圈,用生长速率法测定对菌落扩展的抑制,用稀释药液凹玻片静置培养法测定对孢子萌发的抑制;温室防病试验采用盆栽接种法.结果显示,两菌株的平板菌落对黄瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑菌带宽达17.5～20.9 mm;27 ℃,120 r/min摇瓶培养6 d的发酵液抑菌效果最好,其稀释倍数≤5的无菌滤液处理后经120 h对病原菌菌丝生长的抑制率仍达76.5%～100%,对分生孢子萌发的抑制率为100%;100倍稀释液对孢子萌发后的芽管具有致畸作用,使其顶端膨大或呈粗栉齿状而不再继续伸长;平板对峙培养中受抑病原菌菌落边缘的菌丝细胞壁崩解,原生质体外泄,表现出溶菌现象;其4倍稀释液对黄瓜枯萎病的温室盆栽防效分别为 65.15%和60.61%,对番茄和辣椒灰霉病的防效为62.49%～89.76%.此研究结果表明这2个菌株具有很好的开发应用前景.

来自海洋的链霉菌抑菌活性与其培养条件的关系

研究培养条件对来自海洋的12株链霉菌抑菌活性的影响。结果表明，用海水（含3．5％NaCl）制备的高氏1号培养基（pH72）、22℃培养时，能表现抑菌活性的菌株数最多；但减少培养基的营养成分、改变氮源、NaCl浓度、pH和培养温度，部分菌株可表现新的抑菌活性，或使原有的抑菌活性有较大提高；新表现或提高的抑菌活性绝大部分都是针对革兰氏阳性菌和白色假丝酵母。本文结果提示在海洋放线菌抗生素产生菌的筛选中，应注意培养条件的选择。

一株深海热液口超嗜热古菌的分类鉴定及高温酶活性研究

对一株分离自深海热液口古菌HJ21进行了分类鉴定及高温酶活性的研究。该菌株是极端嗜热的厌氧球菌，直径为1．0～1．2μm。菌株最适生长温度88℃；菌株生长pH为5．0—9．0，最适pH为6．5～7．0；菌株生长NaCI质量浓度为10～50g·L^-1，最适为20g·L^-1。根据其形态特征、生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析结果，确定HJ21菌株为热球菌属（Thermococcus）。该菌株能产生高热稳定的高温α-淀粉酶、普鲁兰酶、α-葡萄糖苷酶和蛋白酶，这些酶的最适作用温度分别为95、95、100和100℃，α-淀粉酶、普鲁兰酶和α-葡萄糖苷酶在90℃的半衰期分别为5、5和2h；蛋白酶在100℃保温2．5h后仍具有84％的酶活性。

大黄鱼结节病病原菌—诺卡氏菌的鉴定及其系统发育分析

一株分离自浙江台州、舟山海水网箱养殖患结节病大黄鱼(Larimichthys crocea)的病原菌,经生理生化试验及形态结构观察显示,该菌株革兰氏阳性,好氧,具有弱抗酸性,菌体呈长或短杆状,或细长分枝状,过氧化氢酶阳性、氧化酶阴性,还原硝酸盐,不水解酪素、黄嘌呤、酪氨酸、淀粉和明胶,能以柠檬酸盐为唯一碳源生长。对其16S rRNA基因进行PCR扩增、测序和系统发育分析,结果表明,该菌株与诺卡氏菌属的菌株亲缘关系最近,与鱼诺卡氏菌(Nocardia seri-oleaJCM 3360T)的16S rRNA基因序列相似性达99.9%。据此鉴定结果认为,该菌株为鱼诺卡氏菌(Nocardia seri-olea)。

嗜盐放线菌的研究进展

嗜盐放线菌是极端微生物的重要组成部分 ,也是一类极具应用前景的微生物资源。就嗜盐菌的分类标准、嗜盐放线菌的分离、分布及系统学研究的历史、现状及其发展趋势、应用前景进行了概述。同时还讨论了嗜盐放线菌的分离及其生理学。

1株抗根结线虫红树林放线菌的筛选与鉴定

从红树林底泥中分离筛选具有抗线虫活性的放线菌,并对活性菌株进行分类鉴定。采用稀释平板法分离放线菌,采用24孔板液体筛选模型筛选具有抗线虫活性的菌株,并对活性菌株进行形态学和生理生化特征研究,测定其16S rDNA序列并进行系统发育分析。筛选得到1株具有杀线虫活性的菌株,编号为HA11090,该菌株发酵液在稀释20倍和40倍后,抗根结线虫校正死亡率分别为70.5%和65.0%。菌株HA11090的16S rDNA序列与Saccharopolyspora hirsuta subsp.kobensis和Saccharopolyspora jiangxiensis的相似性最高,分别为99.35%和99.27%,三者在系统发育树上聚为一个分支,形态和生理生化特征分析显示,菌株HA11090与Saccharopolyspora jiangxiensis基本一致,而与S.hirsuta subsp.kobensis差异较大。鉴定菌株HA11090为Saccharopolyspora jiangxiensis,其发酵液具有较强的抗根结线虫活性,值得进一步研究。

土壤放线菌分离方法研究

研究了土壤放线菌的分离方法,结果表明:培养基中加入150mg/L重铬酸钾,既有利于放线菌的生长,又能抑制真菌和细菌的生长;土样在28℃或室温风干10～20d后,制成10%土壤悬浮液,40～50℃、pH7条件下,加6%酵母膏(或6%蛋白胨)和0.05%SD(S5mmol/L磷酸缓冲液),振荡10～20min,灭菌水稀释成1%后,与含250mg/L重铬酸钾的高氏1号琼脂培养基制成平板,最有利于放线菌的分离。

海洋链霉菌Streptomyces lusitanus SCSIO LR32中芳酰胺类代谢产物的研究

采用硅胶柱色谱和半制备反相高效液相色谱分离方法,对南海海洋放线菌Streptomyces lusitanus SCSIOLR32的次级代谢产物进行了研究,分离得到四个酰胺类化合物,经MS1、H和13 C NMR波谱分析鉴定为二甲基甲苯2,4-二氨基甲酸甲酯(1),甲苯2,4-二氨基甲酸乙酯(2),甲苯2,6-二氨基甲酸甲酯(3)和甲苯2,6-二氨基甲酸乙酯(4)。运用X-单晶衍射确定了1的结构式。其中化合物2和4是首次从自然界中分离得到。采用16S分子生物学方法鉴定该菌株为链霉菌属放线菌。

产胞外木聚糖酶放线菌的分离与筛选

报道了产胞外木聚糖酶放线菌的筛选方法。实验表明，PH6.0±0．5可用作一般放线菌木聚糖酶活力测定的酸碱度。分离并筛选了一株产胞外木聚糖酶活力高的链霉菌（Streptomycessp．Strz－6），酶活力达9．77IU／ml，酶最适作用温度和酸碱度分别为55℃和pH6．5；Na+、K+、Ca2+等离子对木聚糖酶有激活作用，而Fe3+、Zn2+、Cu2+等离子明显抑制酶的活性。

一株拮抗番茄溃疡病菌的海洋放线菌的分类鉴定及活性测定

从大连海域采集的海泥样品中分离得到1株放线菌菌株PH33,根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,鉴定该菌株为小链霉菌(Streptomyces parvus)。采用琼脂块法和牛津杯法测定了菌株PH33对番茄溃疡病菌的拮抗能力。结果表明:抑菌活性物质在100℃水浴加热、pH 2条件下的抑菌活性均不变,pH 12条件下抑菌活性稍有下降;紫外线照射不影响其抗菌活性。说明该菌株在预防和控制番茄溃疡病的发生及危害方面有潜在的应用价值。

玉米茎腐病拮抗放线菌-1的鉴定及其部分生物学特性

放线菌YH-1是对玉米茎腐病有较强拮抗作用的菌株。为了明确该菌株的分类地位,根据其形态观察、培养特征、生理生化特性、细胞壁组分和16 S rDNA序列比对分析,鉴定该菌株为弗氏链霉菌YH-1。生物学特性结果表明：菌株YH-1在pH值3-10范围内均能生长,较适生长pH为7-8,较适生长温度为28-30℃,能广泛利用各种碳、氮源。

应用ARDRA技术研究Frankia菌多样性

应用原核生物 16SrDNA特异性引物rD1和fD1,对分自 4个分类接种群的 12株纯培养Frankia菌总DNA进行扩增 ,得到 1条长约 15 0 0bp的扩增产物。选用 2种内切酶HinfI ,MspI对扩增产物进行酶切 ,得到稳定的酶切图谱。对图谱的分析结果表明 。

16S rRNA二级结构的研究进展及其在系统分类中的应用

16S rRNA作为研究系统进化的生物大分子极受重视,是系统分类中必不可少的一个指标。然而,在进行系统发育分析时通常的序列联配方法有明显的局限性,即无法摆脱一级结构的束缚。20世纪80年代以来,一些研究者把目光投向了16S rRNA二级结构的分析研究,并且已经取得了相当不错的进展。研究表明,16S rRNA二级结构可能作为一个新的分类指标,成为系统分类的一个重要补充。

39株内生放线菌次级代谢产物的合成潜能

为了解药用植物内生放线菌次级代谢产物合成潜能,采用2种不同的发酵培养基对39株分离自5种药用植物根部的内生放线菌进行发酵,利用甲醇抽提发酵液,然后对抽提液进行13株病原指示菌的抗菌活性测定.结果显示32株(82%)供试菌的发酵抽提液至少对1种病原指示菌表现出抑制活性.为进一步评价供试菌株的次级代谢产物合成潜能,对所有供试菌株的基因组DNA进行了聚酮合酶(PKS)基因与非核糖体肽合成酶(NRPS)基因的扩增及检测.结果表明:所有供试菌株至少能扩增出1种次级代谢产物合成基因,其比例为PKS Ⅰ型(1)(59%)),PKS Ⅰ型(2)(62%),PKS Ⅱ型(82%),NRPS(1)(100%),NRPS(2)(100%),表明大多数药用植物内生放线菌具有合成聚酮类和非核糖体肽类化合物的潜能,在适宜的培养条件下可能产生这些种类的活性物质,有待进一步开发.

氨甲酰-妥布霉素产生菌的高产菌株筛选

以黑暗链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅｎｅｂｒａｒｉｕｓ１６３为出发菌株，应用磁场、磁场复合吖啶橙、耐受氨甲酰妥布霉素、磁场复合耐受氨甲酰妥布霉素筛选得到５株高产菌株，经摇瓶发酵复筛后表明。

带TrpC启动子的质粒pYG715/Vgb对顶头孢霉的转化

分别以来自于构巢曲霉和酿酒酵母的启动子ＴｒｐＣ和ＴＥＦ１来构建质粒ｐＹＧ７１５／ＴｒｐＣ和ｐＺＲ３３３并转化头孢菌素Ｃ工业生产菌种顶头孢霉，结果发现只有ｐＹＧ７１５／ＴｒｐＣ产生转化子。

抗病原真菌放线菌的筛选及其生化特性

从杨凌郊区采集的(土娄)土土样中共分离得到19株放线菌,定名为L-01-L-19。研究了这19株放线 菌对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum、辣椒疫霉Phytophthora capsici、南瓜枯萎病菌Fusarium bulbigenum、苹 果干腐病菌Bolyosphoma berengeriana和苹果轮纹病菌Macrophoma kawatsukai 5种作物病原真菌的抑制活性。结 果表明,菌株L-19和L-13对病原真菌抑制效果明显。L-19对5种病原真菌的抑菌圈直径都在10 mm以上,最大 可达15 mm;L-13对辣椒疫霉和南瓜枯萎病菌的抑菌圈直径分别为17 mm和15 mm。通过对供试放线菌生化特性 的研究发现,供试放线菌的淀粉水解和明胶液化能力较强,63．2％的菌株可使明胶全部或大部分液化,73．7％菌株 的淀粉水解圈与菌落直径的比值大于3;牛奶凝固、胨化和纤维索分解能力较弱,只有10．5％的菌株可使牛奶全部 凝固,26．3％的菌株可使牛奶全部胨化和纤维素全部分解。分类结果表明供试放线菌大多属链霉菌属(Streptomyces)。