牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗缪勒氏管激素Ⅱ型受体基因(amhr2)表达特征分析及功能初探

抗缪勒氏管激素Ⅱ型受体(anti-Müllerian hormone receptorⅡ,Amhr2)是抗缪勒氏管激素(anti-Müllerian hormone,Amh)的特异受体。amhr2基因在鱼类性腺分化和发育中发挥重要作用,更决定了有的鱼种的性别,然而,相关功能研究较为有限。本研究旨在明晰amhr2在我国重要海水养殖鱼类—牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺分化和发育过程中的表达特征,并初步探究其功能。首先,克隆了牙鲆amhr2-CDS序列,共1536bp,编码511个氨基酸。系统发育分析显示牙鲆Amhr2近C端较为保守,与其他硬骨鱼类聚为一枝,并与上游sp1以及下游的prr13和PCBP2在基因组中共定位。蛋白结构分析显示,牙鲆Amhr2包含信号肽、跨膜结构域和保守的酪氨酸蛋白激酶结构域。进而,利用实时荧光定量PCR(q PCR)分析表明,牙鲆amhr2主要表达于性腺,且在精巢中的表达极显著高于卵巢(P<0.01),其在I-V期精巢中持续高表达,而在卵巢中仅在I期高表达,后显著下降(P<0.05)。性腺分化期基因的表达,是对雌核发育组(对照组,20±0.5℃,100%雌性)与雌核发育高温诱导组(HT组,28±0.5℃,100%雄性)鱼苗进行检测的,amhr2在对照组全长(totallength,TL)2cm的实验鱼性腺中表达最高,后逐渐下降;而HT组实验鱼性腺中的表达呈现先上升后下降的趋势,并在精巢开始分化的6cm TL时表达最高。利用Hela细胞进行亚细胞定位分析发现,Amhr2与其配体Amh均定位于细胞质。同时,通过原核表达重组牙鲆Amh,并用其孵育离体性腺组织,q PCR分析显示精巢中amhr2的表达没有显著变化,但卵巢中表达显著上升(P<0.05)。进一步通过双荧光素酶报告分析表明,Amh和Amhr2共转染能够显著抑制雌激素合成的关键芳香化酶基因cyp19a的表达(P<0.01)。综上所述,牙鲆amhr2主要表达于精巢,但在不同性腺发育时期表达不同,且其可能与Amh共同影响cyp19a的转录,对雄性表型形成的启动和性腺发育起作用。

丝鳍圆天竺鲷的繁殖习性、胚胎发育和胚后发育观察

本文以丝鳍圆天竺鲷(Sphaeramia nematoptera)为研究对象,观察记录了其繁殖习性以及胚胎发育和胚后发育的过程。研究结果表明:丝鳍圆天竺鲷的繁殖活动由雌鱼主导,在凌晨1点至3点交配,产卵受精后由雄性口孵,产卵间隔期为11~18d,无季节性。雌鱼单次产卵3126~4882粒,受精卵近圆球形,卵径(720±10)μm,内有数颗油球;在水温(27.0±0.5)℃条件下,受精卵经过卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期到出膜需187h。丝鳍圆天竺鲷胚后发育分为仔鱼期、稚鱼期、幼鱼期和成鱼期,初孵仔鱼全长(2.8±0.1)mm,口裂高度(0.202±18)mm,孵化后第二天仔鱼开口摄食;孵化后24d鳍条形成,身体出现两条黑色条带,结束浮游阶段,进入稚鱼期;孵化后50d鳞片完全形成,体色斑纹等外形特点与成鱼相同,进入幼鱼期;孵化后360d性腺发育成熟,具备生殖能力。

工作犬基因与主要行为性状关联性研究进展

工作犬和相应工作用途的匹配性与其行为性状密切相关,犬的行为性状受到遗传与环境因素的双重影响,且遗传因素对犬的行为性状起到决定性作用,是犬种繁育的重点内容。已有研究发现一些犬基因的多态位点,如MAOB、COMT、TH、5-HTR2C、DRD2、GLT-1和GLAST等与犬的特定性情及行为性状显著相关,但仍有已被发现基因的具体功能及对犬行为性状的具体影响机制有待进一步研究。综述对已有犬基因与犬主要工作性状方面的研究进行了总结,并整合了分散性的研究论点,以期为后续从业人员的理论研究及进一步机制研究提供参考。

浙江舟山獐种群遗传多样性分析——以舟山林场为例

舟山为獐主要分布地区,多年来致力于獐种群保护工作。为掌握舟山林场獐种群的遗传多样性现状,为獐种群的健康状况提供依据,实验依据微卫星分子标记技术对其进行种群遗传多样性评估。结果表明:8个高多态性的微卫星位点中出现了2个纯和的位点;其余6个位点观测杂合度与期望杂合度分别在0.966~1.000和0.613~0.871,多态信息含量在0.530~0.848,平均近交系数在0.17~0.45。该獐种群的遗传多样性还处于较高水平,但出现了2个纯合子位点开始影响种质资源和种群稳定性,建议舟山林场引进新种群个体促进基因交流,维持种群遗传多样性。

全基因组重测序筛选弓背青鳉三亚群体性别遗传标记

【目的】开发弓背青鳉(Oryzias curvinotus)三亚群体(下称“三亚青鳉”)遗传性别鉴定分子标记,为进一步挖掘其性别决定基因奠定基础。【方法】用染色体商(Chromosome quotient,CQ)法比较雌雄两性个体的全基因组重测序覆盖度,筛选潜在的性别特异性序列区域(CQ<0.1)并设计引物,通过PCR扩增验证引物区分三亚青鳉群体及其子代性别的适用性。【结果】经CQ分析筛选,CQ<0.1的特异性区域279个,设计引物279对。随机挑选的60对引物中,29对标记引物在三亚青鳉群体雄鱼中扩增得一个DNA条带,雌鱼无条带,均可鉴定三亚青鳉遗传性别。从29对引物中随机挑选2对引物(命名为Marker1和Marker2)进一步验证,引物Marker1、Marker2在雄鱼中扩增产物分别为791、556 bp,两对引物对三亚青鳉子代群体的扩增结果与亲本一致。用两对性别特异性标记对三亚群体的F2代全同胞家系94个个体进行扩增,结果发现F2群体自然性别比约1∶1。【结论】性别特异性引物Marker1和Marker2均可对三亚青鳉群体进行遗传性别鉴定,在三亚青鳉野生亲本及其子代中均有稳定性和通用性,可用于弓背青鳉三亚群体遗传性别鉴定。

大刺鳅基因组中微卫星分布特征分析

【目的】通过查找和分析大刺鳅基因组中微卫星序列的分布规律及特征,为开展大刺鳅种质资源评估和分子标记辅助育种提供理论基础。【方法】基于大刺鳅基因组序列数据,采用MISA挖掘微卫星信息,利用生物信息学方法分析大刺鳅基因组中微卫星序列的分布规律及组成特征。【结果】从大刺鳅基因组中共筛选获得19020个微卫星,其中16025个为完全型微卫星;分布于2号染色体上的微卫星数目最多,24号染色体上的微卫星数目最少,分别占微卫星总数的10.26%和1.94%;单核苷酸为数目最多的微卫星,六核苷酸的最少。在完全型微卫星中,数目最多的前4种基元类型依次是A/T、AC/GT、G/C和AG/CT,分别占微卫星总数的37.82%、29.57%、6.88%和6.77%。微卫星基元重复次数的分布范围在5~104次,主要发生在重复5~6次和10~11次。微卫星长度区间为10~192 bp,主要分布在10~36 bp,占其总数的92.46%;微卫星数目最多的长度为12 bp,占其总数的15.22%。Pearson相关分析结果表明,大刺鳅微卫星长度与其数目呈极显著负相关(P<0.01)。GO功能注释分析结果发现,微卫星的基因主要富集到生物学过程、分子功能和细胞组分3个类群,富集最显著的条目为细胞核。【结论】利用基因组数据筛选大刺鳅基因组中微卫星可用性高且具有较高的多态性潜能,可为高效开发微卫星分子标记提供遗传学数据。

种业振兴背景下畜牧专业学位研究生培养模式改革与实践--以家禽种业人才培养为例

为构建种业振兴背景下畜牧专业学位研究生培养新模式,文章从家禽种业人才培养分析入手,对培养目标定位、专业基础知识以及创新实践能力等共性突出问题进行改革,提出了“知识构建+价值塑造+兴趣驱动”人才培养理念,建立了“案例教学+大师讲学+自主学习”精英人才教学模式,形成了“需求+问题”导向的校企联合培养及协同创新机制。并最终构建了以种业需求为导向,以产教融合为牵引的畜牧专业学位家禽种业精英型研究生培养模式,显著提升了专业学位研究生专业素质、跨专业(领域)知识和系统思考能力。

缩骨鲫Cyt b基因和控制区序列克隆及系统进化分析

研究通过Sanger测序法对天然雌核发育的缩骨鲫(Carassius auratus var. Suogu)线粒体DNA的Cyt b基因和控制区进行扩增和测序,并与已发表的其他鲫属鱼类的Cyt b基因进行系统进化分析,探讨缩骨鲫与其他鲫属鱼类的系统进化关系。结果表明:缩骨鲫线粒体DNA中Cyt b基因和控制区全序列分别长1 141和924 bp;其中,Cyt b基因的碱基含量为29.1%(T)、27.9%(C)、28.7%(A)和14.3%(G),控制区序列的碱基含量为32.6%(T)、20.7%(C)、32.6%(A)和14.1%(G);2种序列中G+C含量均明显低于A+T含量,且G含量偏低,显示了与其他脊椎动物线粒体核苷酸碱基含量相似的特征;控制区序列可以分为终止序列区、中央保守区和保守序列区3个区域,均识别到了对应的保守序列;基于邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建缩骨鲫与其他鲫属鱼类Cyt b基因的系统进化树表明,缩骨鲫与红鲫和淇河鲫的亲缘关系最近,而缩骨鲫与野鲫、淇河鲫和红鲫分布在同一个姐妹支系,进一步说明缩骨鲫可能起源于野鲫,是野鲫的一个地方种群。

蒙古羊双羔性状基因ADAMTS-1作用机制研究

【目的】以产单、双胎蒙古羊为动物模型初步探究双羔主效基因含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)的作用机制,为蒙古羊高效繁育及其相关研究提供理论依据。【方法】选取具有产单、双胎记录的雌性蒙古羊各12只,采用自然发情方式,通过阴道黏膜涂片和公羊爬跨确定雌性蒙古羊的发情期和间情期,分别取产双羔发情期(DE)、产双羔间情期(DD)、产单羔发情期(SE)、产单羔间情期(SD)蒙古羊卵巢,利用HE染色的方式观察卵巢有腔卵泡形态差异。取蒙古羊卵巢颗粒细胞进行培养,运用免疫荧光技术确定ADAMTS-1表达位置。通过实时荧光定量PCR技术检测ADAMTS-1、孕酮受体(PGR)、丝裂原活蛋白激酶4(MAPK4)、雄激素受体(AR)、丝氨酸蛋白酶抑制剂2(SERPINE2)、多功能蛋白聚糖蛋白聚糖(Versican)在不同组别中的mRNA相对表达水平,并通过Western blotting技术检测ADAMTS-1前体蛋白(pro-ADAMTS-1)和成熟蛋白(MP-ADAMTS-1)在不同组别中的蛋白相对表达水平。【结果】通过HE染色结果可以确定产单、双胎蒙古羊卵巢组织内有腔卵泡形态无表观差异,运用免疫荧光方法检测到ADAMTS-1在蒙古羊卵巢颗粒细胞上表达。通过荧光定量PCR及Western blotting结果可知,DE组蒙古羊中ADAMTS-1在卵巢组织中基因及蛋白表达量显著高于其他3组(P<0.05),而在SE与SD组无显著差异(P>0.05);SE组蒙古羊卵巢组织内AR和PGR基因表达量最高,且显著高于其他3组(P<0.05),DE组显著高于DD组(P<0.05),且在同一发情阶段产单羔蒙古羊卵巢组织内AR、PGR基因表达量显著高于产双羔蒙古羊卵巢组织;SE组蒙古羊卵巢内MAPK 4基因表达量最高,且显著高于其他3组(P<0.05),其他3组间无显著差异(P>0.05);DD组蒙古羊卵巢组织内Versican、SERPINE2基因表达量最高,且显著高于DE和SD组(P<0.05);SE组这两个因子显著高于SD组(P<0.05)。【结论】ADAMTS-1于蒙古羊卵巢颗粒细胞中稳定表达,ADAMTS-1对蒙古羊双羔性状的排卵机制具有重要的正向调控作用,而其他多种激素受体以及胞内关键信号基因也与卵巢内卵泡的发育、排出密切相关。

基于cyt b基因序列的我国西部地区马麝遗传多样性

为了解我国西部地区马麝Moschus chrysogaster的遗传多样性及其系统发育关系,对来自四川省、甘肃省、西藏自治区及重庆市的88份组织样品的cyt b基因序列进行分析。研究发现,马麝cyt b基因序列长1032 bp,共定义了54个单倍型。A+T的平均含量为59.9%,存在明显的A、T偏倚;平均单倍型多样性和平均核苷酸多样性水平都较高,分别为0.9741和0.02488。基于单倍型和遗传距离分别构建的邻接树结果一致,各支系的聚类不存在明显的地理界限,各种群均无扩张现象。我国西部地区马麝的遗传多样性水平总体较高,但张掖市和阿坝县种群的遗传多样性水平略低。本文为马麝的遗传多样性研究与种质资源保护提供了分子基础资料。

四川牦牛PRSS2基因遗传多态性及其与肉品质性状的关联性分析

为了探讨丝氨酸蛋白酶2 (serine protease 2,PRSS2)基因的遗传多态性及其与四川牦牛肉品质性状的相关性,试验采用DNA直接测序法对93头四川牦牛PRSS2基因的遗传多态性进行研究,并使用Haploview 4.2软件对PRSS2基因的多态性位点进行连锁不平衡分析,探讨PRSS2基因单倍型组合个体与肉品质性状的相关性。结果表明:在四川牦牛PRSS2基因中一共发现了6个SNPs位点,分别为I3-151 G>A、I3-328 C>T、E4-53 C>T、E4-110 C>T、I4-87 A>T、I4-127 C>T,其中I3-328 C>T、E4-110 C>T位点与剪切力相关、I4-87 A>T位点与蒸煮损失和pH24 h值相关;I4-127 C>T位点与pH45 min值相关;H4H4单倍型组合个体的红度(a*)显著高于H1H4单倍型组合个体(P<0.05);H1H3和H2H3单倍型组合个体的蒸煮损失显著低于H2H4和H3H3单倍型组合个体(P<0.05);H2H4、H1H2、H1H4和H3H3单倍型组合个体的剪切力显著高于H1H1和H1H3单倍型组合个体(P<0.05)。说明四川牦牛PRSS2基因中存在6个SNPs位点,H4H4、H1H3、H2H3和H1H1单倍型组合可作为筛选牦牛肉肉色、系水力和嫩度的最优单倍型组合。

大兴安岭南麓东北马鹿种群遗传多样性分析

由于人类活动干扰及自然环境变化,东北马鹿(Cervus elaphus xanthopygus)的生存面临诸多问题。为掌握东北马鹿遗传多样性现状,进而为马鹿种群的健康状况提供评估依据,利用线粒体Cyt b基因和微卫星2种分子标记对内蒙古大兴安岭南麓高格斯台罕乌拉国家级自然保护区内的东北马鹿进行种群遗传多样性评估。结果表明:246份新鲜马鹿粪便隶属于182只个体;微卫星标记表明平均期望杂合度为(0.729±0.016),平均观测杂合度为(0.768±0.029),线粒体标记表明单倍型多样性为(0.347±0.035),核苷酸多样性为(0.248±0.025)%,种群存在较高比例的稀有单倍型(33.33%)。该地区马鹿种群遗传多样性处于中等偏低水平,未来可能存在单倍型丢失的风险。因此,为避免出现遗传多样性下降的风险,建议该地区加强对马鹿种群的管理与保护,并促进与邻近区域马鹿个体的基因交流。

红鲫(♀)×湘江野鲤(♂)F_2和F_3的染色体研究

采用血细胞培养制片法和肾脏细胞直接制片法对红鲫 (♀ )×湘江野鲤 (♂ )杂交种F2 和F3 代的染色体数目和核型进行了比较分析 ,得出F2 代染色体数目为 10 0条 ,染色体组型为 :2 2m +34sm +2 2st +2 2t ,NF =156;F3代染色体数目为 4n =2 0 0 ,染色体组型为 :4 4m +68sm +44st +44t ,NF =312。为证明红鲫×湘江野鲤杂交后代由异源二倍体转变为异源四倍体发生于F2 与F3代之间提供了直接证据。

猪的肉质性状基因定位研究进展

随着生活水平的提高，猪肉的肉质问题已引起消费者和生产者的重视。遗传因素是改善肉质品质的关键。对猪的肉质性状进行数量性状位点(QTL)定位是当前国际畜禽遗传育种的一个热点。本文较全面地介绍了有关肉质基因定位的情况，包括基本明确的主效基因：氟烷基因和酸肉基因；肌内脂肪的统计分析、候选基因及基因扫描定位结果：以及肌纤维、嫩度、多汁性、失水率、pH值和肉色的定位。同时论讨了肉质检验和基因定位面临的问题。

运用微卫星DNA标记分析我国野生鹌鹑遗传多样性

运用微卫星DNA标记对我国境内分布的两种野生鹌鹑(野生日本鸣鹑、野生普通鹌鹑)和家鹑群体的遗传多样性进行分析。通过计算反映群体变异的多态信息含量(PIC)、固定指数、平均杂合度、基因分化系数等相关指标,结果表明:野生普通鹌鹑群体遗传多样性更为丰富,每个座位平均检测出4.67个等位基因,群体多态信息含量和平均杂合度亦为最高,分别为0.5732和0.6621;家鹑最低,分别为0.5467和0.5933;野生日本鸣鹑介于两者之间;在3个鹌鹑群体中,野生日本鸣鹑与家鹑群体遗传多样性差异程度较小。以标准遗传距离为基础的模糊聚类分析发现:家鹑与野生日本鸣鹑群体模糊等价矩阵系数为0.937,而与野生普通鹌鹑的系数为0.738,这也表明家鹑与野生日本鸣鹑有更近的亲缘关系,进一步从分子水平上证实家鹑起源于野生日本鸣鹑。

动物肌肉生长发育调控的功能基因研究进展

成肌细胞的增殖和分化是受生肌决定因子 (MyoD)调控 ,生肌决定因子包括 4个基因 ,MyoDl(myf3)、Myogenin(MyoG)、Myf5、Myf 6 (herculin或MRF4 )。MyoD家族基因属于碱性螺旋 环 螺旋 (bHLH)转录因子 ,它能激活肌肉生成的特定基因。肌细胞生长抑制素 (MSTN ,Myostatin ,又称GDF 8) ,属于转化生长因子超家族 ,它通过负向控制肌细胞的生长发育 ,GDF 8基因缺失的小鼠表现出比正常小鼠具有“双肌现象”。

鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。

猪雌激素受体(ESR)位点RFLPs的分析

本文利用猪雌激素受体基因的１８ｋｂｃＤＮＡ为探针与ＰｖｕⅡ酶切的二花脸、梅山、长白、杜洛克、大约克及大二猪的基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，结果发现，二花脸有２５ｋｂ和３７ｋｂ的特异带，大约克、长白、杜洛克有４３ｋｂ特异带。由此结果进一步将高产仔数的主效基因或与之紧密相连锁的遗传标记首次定位于２５ｋｂ的特异片段上。

雌核发育银鲫的遗传多样性及其育种意义

雌核发育银鲫的遗传多样性及其育种意义桂建芳朱蓝菲魏雪虹樊连春周莉杨仲安杨书婷梁绍昌魏丽华（中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉４３００７２）ＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇＩｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＧ...

猪主要经济性状候选基因的研究进展

随着人类基因组计划的完成和动物基因组计划的进行 ,许多控制动物经济性状的主基因逐渐被发现 ,并显示出巨大的应用前景。本文概述了影响猪繁殖、肉质、生长发育等主要经济性状的主基因的基因大小、基因定位和基因效应等 。