红螯螯虾雌雄间性个体性腺转录组特征分析

为研究红螯螯虾雌雄间性个体与正常个体之间的差异,对红螯螯虾雌雄间性个体和正常个体的精巢和卵巢运用Illumina Novaseq 6000进行转录组测序,同时借助生物信息学开展功能基因预测和基因表达对比分析。通过测序和组装,共获得83.79 Gb质控碱基,各样品质控碱基均达到6.29 Gb以上,Q30碱基百分比在94.25%以上,组装得到的Unigene个数为53077,转录本个数为73588。基因/转录本与6大数据库比对上的比例为18.17%~36.07%。基因表达分析结果表明:样本间共表达的Unigene数为3543个,不同个体卵巢的表达量相关系数最大,不同个体精巢的表达量相关系数次之,卵巢和精巢之间表达量相关系数最小;正常个体的卵巢和精巢与不同雌性间性个体的精巢和卵巢的基因表达量存在差异,累计差异表达的基因有310个。研究认为,红螯螯虾雌雄间性个体不仅在外部形态上与正常个体存在差异,在性腺的转录水平上也存在着差异,且不同类型的雌雄间性个体与正常个体之间的差异程度不同。

吡啶硫酮铜胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺能量利用、脂质过氧化指标和基因表达的影响

目的 研究吡啶硫酮铜(Cu PT)对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肝胰腺能量利用、脂质过氧化相关指标和抗氧化、凋亡相关基因表达量的影响。方法 设置空白对照组、DMSO溶剂对照组(0.128 m L·L~(-1))和2个Cu PT处理组(64μg·L~(-1)和128μg·L~(-1)),每组3个平行,在200 L水体中暴露48 h,分别于胁迫0 h、3 h、12 h、24 h和48 h取肝胰腺进行测定。结果 随着Cu PT暴露浓度的增加及胁迫时间的延长,凡纳滨对虾肝胰腺中的糖原、乳酸含量显著下降(P<0.05),丙二醛含量显著升高(P<0.05);锰超氧化物歧化酶基因、谷胱甘肽过氧化物酶基因、过氧化氢酶基因和凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶3基因和肿瘤抑制基因的表达水平也发生了显著变化(P<0.05)。结论 CuPT可能影响凡纳滨对虾正常能量供应,并使机体出现脂质过氧化,还会影响机体内抗氧化应激以及凋亡相关基因的表达水平。

湖北武湖日本沼虾的生长特性

从1998年9月至1999年9月对人工养殖湖泊——武湖日本沼虾生长特性作了研究. 以月龄来研究日本沼虾的生长,研究结果表明日本沼虾在7-1月份(1-7月龄)呈等速生长,在2-6月份(8-12月龄)呈异速生长.日本沼虾体重(W)与体长(L)呈幂函数相关,但在7-1月份时其b值接近于3,而在2-6月份时其b值明显小于3,其关系式如下: 1-7月龄:W♂=0. 0148L3. 2419(r=0. 9978,n=390),W♀=0. 0206L3. 0117(r=0. 9968,n=372); 8-12月龄:W♂=0. 0857L2. 1788(r=0.9854,n=188),W♀=0. 1450L1. 8165(r=0. 9974,n=278). 1-7月龄雄虾的生长规律符合Von Bertalanffy方程,雌虾的生长规律符合Logistic方程;8-12月龄雌雄虾的生长规律都符合Logistic方程.

中国海五种群三疣梭子蟹的形态差异分析

运用三种多元分析方法,即聚类分析、主成分分析和判别分析,通过测量三疣梭子蟹23个形态学性状参数,对中国海大连海区、东营海区、连云港海区、舟山海区和湛江海区5个种群三疣梭子蟹的形态差异进行了比较研究。聚类分析结果表明,连云港种群和东营种群形态最为相似(形态距离0.07),大连种群与东营种群、大连种群(dl)与舟山种群(zs)的趋异程度逐渐增加,形态距离分别为0.08和0.09,而湛江种群的趋异程度最大,与其余4种群的形态距离达0.15以上。主成分分析构建了3个主成分,其贡献率:主成分1为27.39%,主成分2为15.23%,主成分3为10.27%,累积贡献率为52.89%。在第1主成分中,比例性状ICM/CL、BCW/CL、PWC/CL和SW/CL的影响比较大。判别分析结果表明,5个海区种群之间的形态差异极显著(P<0.01),通过建立5个地理种群的判别函数,结果判别准确率P1为63.64%～94.44%,P2为67.74%～92.86%,综合判别率为82.24%,因此,该判别方程具有较高的判别效果。

中国对虾16SrRNA基因序列多态性的研究

利用PCR技术扩增获得中国对虾 (Penaeuschinensis)线粒体DNA的 16SrRNA基因片段 ,通过测定该基因片段的序列 ,分析了取自我国烟台、长岛、青岛近海和宁波养殖的 17只中国对虾遗传多态性。结果发现 ,不同地理种群存在丰富的DNA序列多态性 ,17只个体具有 17种基因型 ,在扩增的长为 5 2 3bp的基因片段中 ,共检测到 3 7个多态性核苷酸位点 ( 7 0 7% )。UPGMA法构建的分子系统树表明不同地理种群中国对虾存在一定程度的遗传分化 ,长岛群体与烟台群体遗传关系较近 ,宁波群体次之 ,青岛群体为相对独立的一支。

贝类免疫学研究新进展

综述了贝类免疫在细胞学和分子生物学研究方面取得的新进展,阐述了贝类血细胞中与免疫有关的结构和功能、血细胞的培养和凋亡;分别介绍了抗菌肽、蛋白酶抑制剂、类免疫球蛋白等贝类免疫应答因子的作用;论述了与免疫功能有关的基因研究,包括免疫基因的筛选、克隆和表达、基因的转移、重组和基因疫苗;初步探讨了贝类的免疫应答和免疫调节的分子生物学机理.为贝类的免疫生物学基础理论的研究提供资料.

海水和淡水养殖凡纳滨对虾呈味物质的比较分析

对使用同种饲料喂养的海水和淡水养殖凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)进行了感官评价、一般成分和呈味物质分析。海水养殖对虾感官评价总体得分高于淡水养殖对虾,海水养殖对虾在鲜味、甜味上优于淡水养殖对虾,而淡水养殖对虾带有明显的土腥味(P<0.01)。海水养殖对虾的灰分高于淡水养殖对虾,粗蛋白、水分及有机酸含量两类对虾差异不大。通过分析氨基酸、核苷酸、甜菜碱和有机酸等呈味物质,发现主要是谷氨酸、AMP、IMP、甜菜碱这几种物质对两类对虾的口味差异起着重要作用,其他成分作用不明显。

锯缘青蟹精巢发育的组织学观察

组织学观察表明 ,锯缘青蟹 (Scyllaserrata)精巢发育周期可以分为精原细胞期、精母细胞期、精子细胞期、精子期和休止期 5个时期。在划分精巢发育期的基础上 ,结合生精小管直径和成熟节段比例这 2个指标 ,可以较准确地反映锯缘青蟹精巢的发育状况。而成熟节段比例可以作为锯缘青蟹精巢发育的表征指标。

三疣梭子蟹形态性状对体重影响的分析

通过对鸭绿江口、莱州湾、海州湾和舟山4个采样地点的三疣梭子蟹Portunus tritubercula-tus12项形态性状的测量,采用相关分析和通径分析方法,计算了以形态性状为自变量对体重作依变量的相关系数、通径系数、决定系数及相关指数,定量分析了形态性状对体重的影响效果。结果表明,三疣梭子蟹12个形态性状均与体重的相关系数达到极显著水平(P<0.01);通径分析揭示了多元分析中多个自变量与依变量的真实关系。全甲宽、甲长、体高、第1侧齿间距、第2侧齿间距、大螯不动指长对体重的通径系数达到显著水平。所选形态性状与体重的复相关指数为R2=0.8826,说明影响体重的主要自变量指标已经找到;多元回归分析建立了全甲宽(X1)、甲长(X2)、体高(X4)、第一侧齿间距(X5)、大螯不动指长(X7)对体重(Y)的回归方程,为三疣梭子蟹育种提供理论依据。

氨氮对克氏原螯虾幼虾的急性毒性研究

采用常规生物急性毒性试验法,研究了氨氮对克氏原螯虾(Procambarus clarkia)幼虾的急性毒性。结果表明,克氏原螯虾幼虾对氨氮有较强的耐受力;在pH7.8、水温20℃条件下氨氮对克氏原螯虾幼虾的24、48、72、96 h的半数致死浓度分别为167.54、121.48、96.96、79.4 mg/L,安全浓度为7.94 mg/L;非离子氨对克氏原螯虾幼虾的24、48、72、96 h的半数致死浓度分别为4.04、2.93、2.34、1.91 mg/L,安全浓度为0.191 mg/L。

WSSV感染对克氏原螯虾血细胞吞噬和肝胰腺磷酸酶活性的影响

分析了克氏原螯虾Procambarus clarkia人工感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)后,其血细胞吞噬(Phagocytosis)活性,肝胰腺酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性的变化规律,其目的是为WSSV感染与螯虾的免疫防御反应等研究提供依据。分析结果显示,随着WSSV感染克氏原螯虾时间的延长,血细胞吞噬活性、肝胰腺酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性也随之改变,其中血细胞吞噬活性的变化规律性比较明显,可作为WSSV感染的敏感指标,也可以用作间接指示克氏原螯虾健康状况的指标。而在不同的感染时间,克氏原螯虾肝胰腺ACP与AKP的活性波动较大,无明显的规律可循,难以作为WSSV感染的敏感指标。

内蒙古赤峰地区青铜时代古马线粒体DNA分析

为了探索中国家马的起源,对内蒙古赤峰地区大山前和井沟子遗址青铜时代9匹古马进行了线粒体DNA(mtDNA)研究,分别扩增并测序了线粒体16S rRNA基因和mtDNA控制区(D-loop)片段.结合东亚、中亚、近东、欧洲等地家马的mtDNA序列进行系统发育网络分析(phylo-genetic network).对极端保守的16S rRNA基因分析表明赤峰地区的埋藏环境适合古DNA的保存.系统发育网络显示9匹古马并没有聚集在一个聚簇中,而是分散在具有一定地理分布倾向的现代家马聚簇中.研究发现赤峰地区古马的母系遗传呈现高度多样性,对现代家马mtDNA基因池的形成具有重要的贡献,从一个侧面反映了中国家马起源的复杂性.

中华绒螯蟹幼蟹标准代谢的研究

对中华绒螯蟹幼蟹的耗氧率、CO2 排出率及NH3-N排泄率进行了测定 ,并研究了幼蟹的能耗率及能源物质的供能比。结果表明 ,体重 ( 2 70± 1 4 0 )g的幼蟹 ,在水温 ( 2 0± 0 5 )℃时 ,耗氧率、CO2 排出率和NH3-N排泄率分别为 ( 0 4 14± 0 0 91)mg·g-1·h-1、( 0 4 76± 0 12 5 )mg·g-1·h-1和 ( 4 179± 1 171) μg·g-1·h-1;标准代谢的蛋白质、碳水化合物和脂肪提供的能量比为 7 3∶3 8 8∶5 3 9。其耗氧率 (R0 )受水中溶氧水平的影响 ,并与体重(W )呈负相关 (R0 =0 84 0 3W-0 72 6 5)。

芽孢杆菌合生素在对虾集约化养殖中的应用

将芽孢杆菌合生素作为饲料添加剂应用于凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的集约化养殖中,试验组A、B的合生素添加量分别为0·3%和0·5%。结果发现,试验组与对照组相比对虾的单位产量显著提高(P<0·05),其中A组增产35·18%,B组增产42·31%,饲料系数则明显降低(P<0·05)。在对虾的成活率和增重率方面,A组分别提高了15·57%和53·34%,B组则分别提高24·02%和49·28%。以对虾的肥满度(体重/体长×100)作为衡量对虾品质的一项指标,发现A组和B组比对照组分别提高了41·60%和42·48%。由于芽孢杆菌合生素的使用,两试验组的排换水量和渔药使用量比对照组均有所减少,进而降低了养殖风险和生产成本。但两试验组之间的对虾产量、饵料系数、成活率、增重率、肥满度和生产成本等各项指标均无显著差异(P>0·05)。

南海北部野生斑节对虾卵巢解剖结构及组织学的研究

运用解剖学、组织学观察,研究了南海北部野生斑节对虾卵巢结构及组织学,结果表明,(1)卵巢的解剖结构:卵巢可分为1对前叶、8对侧叶、1对向后延伸的尾叶,成熟卵巢8对侧叶以第2对侧叶最大,第6对侧叶末端可见一半透明小管穿过所对应的胸腔体壁通到同侧第3对步足基部的产卵孔。(2)卵巢的组织学结构:卵巢由卵巢壁、中央卵管和卵室组成;卵巢壁由外向内依次由上皮层、疏松结缔组织、基膜和分化上皮构成;中央卵管分化出大量卵原细胞;卵室内含有不同发育阶段的卵母细胞。

日本蟳的性腺发育和生殖周期

对日本蟳(Charybdis japonica)的性腺发育、生殖周期、繁殖习性和性比等进行了研究。根据其性腺的组织学和外部形态特征,将卵巢发育分为6个发育期:形成期、小生长期、大生长期、成熟期、排放期和恢复期;将精巢发育分为5个发育期:形成期、生长期、成熟期、排放期和恢复期。根据成熟系数的周年变化规律并结合性腺组织切片的观察结果,认为在连云港海区的日本蟳性腺发育为1年1个周期,繁殖期为5～9月,交配产卵盛期在5月中旬～6月下旬(水温17.5～23.5℃)。日本蟳为分批产卵类型,但第二批卵的数量远少于第一批卵。雌、雄性腺发育基本同步,雄性发育略快,雌雄比约为1∶1。

嗜酸小球菌对凡纳滨对虾体液免疫因子的影响

在饲料中添加不同剂量的嗜酸小球菌投喂凡纳滨对虾,并在投喂后的20、40和60d,分别测定凡纳滨对虾血清中的一氧化氮合酶(NOS)、溶菌活力(Bacteriolytic activity)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP),并分析了这5种酶之间的相关性。结果显示,嗜酸小球菌能有效提高凡纳滨对虾体内的NOS、溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP的活性;NOS与溶菌活力存在显著正相关性(P<0.05),与SOD存在显著负相关性,溶菌活力与AKP存在显著负相关性。表明在饲料中添加适量的嗜酸小球菌(剂量10mg/kg)可使凡纳滨对虾体液免疫因子活力到达较高的水平;凡纳滨对虾血清中一氧化氮合酶对于嗜酸小球菌的添加量较为敏感,可作为评价嗜酸小球菌使用效果的指标之一。

基于SSR标记的克氏原螯虾种质资源遗传多样性研究

选用10对克氏原螯虾微卫星引物对桐庐（TL）、太湖（TH）、湖北（HB）、江西（Jx）、洪泽湖（HZH）、崇明（cM）、广西（Gx）、海盐（HY）8个克氏原螯虾群体的遗传多样性状况和遗传结构进行研究。结果发现，8个克氏原螯虾群体的平均观测杂合度值为0．5257～0．7400，平均期望杂合度值在0．6238～0．7434之间，平均多态信息含量在0．4209～0．6840之间。其中广西（GX）群体遗传多样性最高，太湖（TH）群体遗传多样性最低。采用MEGA4．0计算各地理种群间的遗传距离，遗传距离最远的是崇明（CM）和江西（JX）群体，遗传距离最近的是湖北（HB）和太湖（TH）群体。结果显示，这8个地理种群资源遗传多样性较高。

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)成熟蟹、抱卵蟹、流产蟹肝胰腺脂肪酸组成的比较研究

采用气相色谱仪测定中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)不同生理阶段 (成熟、抱卵、流产 )肝胰腺内的脂肪酸组成。结果表明 ,中华绒螯蟹肝胰腺中含有 2 2种脂肪酸 ,其中饱和脂肪酸(SFA) 5种 ,单烯酸 (MUFA) 5种 ,多烯酸 (PUFA ) 12种 ;MUFA的含量最高 ,占 5 2 4 7%—5 8 5 6 % ,SFA次之 ,为 2 3 17%— 2 9 2 0 % ,PUFA的含量较低 ,为 8 92 %— 2 1 11%。SFA、MUFA、PUFA的含量和Cn 3/Cn 6 值在不同生理阶段的中华绒螯蟹肝胰腺中差异极显著 ,油酸 (C18∶1)、棕榈酸 (C16∶0 )、棕榈油酸 (C16∶1)是肝胰腺中的主要脂肪酸 ,其含量分别为 35 2 1%—4 0 4 9%、17 97%— 2 1 97%和 11 6 9%— 14 90 % ,不同生理阶段的中华绒螯蟹肝胰腺中各脂肪酸的百分含量差异显著。比较研究温州本地抱卵蟹和太湖抱卵蟹肝胰腺中的脂肪酸 ,发现脂肪酸中SFA、MUFA、PUFA的含量和Cn 3/Cn 6 值差异极显著 ,除C14∶1、C18∶1、C2 0∶1及C2 0∶5外 ,其它脂肪酸的百分含量存在极显著的差异。