人类SR蛋白超家族新成员——SFRS12(SRrp508)的基因克隆和特性分析

采用生物信息学方法克隆出全长 3811bp的人类RC5 0 8cDNA片段 ,经核酸和蛋白质分析为人类新基因 (Gen Bank登记号 :AF4 5 90 94 ) ,利用RT PCR方法从人类胰脏组织中扩增出包含编码 5 0 8个氨基酸残基最大开放读码框架 (ORF)的 16 80bpcDNA片段 ,经核酸测序证明与电子克隆结果完全一致。该基因具有启动子和TATA box,ORF前同一相位有多个终子码 ,后有加尾信号 ,显示为客观存在基因。该基因含有 12个外显子 (96～ 2 0 93bp)和 11个内含子 (14 0～ 5 15 3bp) ,定位于人类 5号染色体 5q11.2～q12 .1,无任何连锁基因存在。该基因ORF 342～ 186 8(15 2 7)横跨10个外显子 ,所编码 5 0 8氨基酸蛋白的全长序列与大鼠丝氨酸 精氨酸二肽富含性 (SR)剪切调控蛋白 86 (SRrp86 )高度同源 ,在核酸和蛋白水平的同源性分别为 84 %和 86 % ,与其他已知蛋白无论在核酸水平还是在氨基酸水平几乎均无整体的同源性。结果表明 ,所克隆的 5 0 8氨基酸蛋白才是大鼠SRrp86的人类同源物 ,从而修正了Barnard(2 0 0 0 )所指出的人类同源物为人类精氨酸富含性核蛋白 5 4 (p5 4 )这一论断 ,并提示它是日益增长的SR蛋白超家族的又一个新成员。该基因组织表达谱广泛 ,有可能具有转录因子活性 ,暂命名为SR相关剪切调控蛋白 5 0 8(SRrp5 0

交河故城古车师人的线粒体DNA分析

从距今 2 0 0 0～ 2 5 0 0年左右的交河故城古代人骨中提取古 DNA,用 4对重叠引物对线粒体基因组的调控区 (3 63 bp)进行了扩增及测序 .线粒体基因组编码区的扩增片段用于限制性片段多样性分析 .结果显示4个个体中具有 3个 DNA序列 ,其中来自不同墓穴的两个个体的序列相同 ,说明这两者间有密切的母系遗传关系 .系统发育分析表明古车师的这 4个个体分散分布在现代新疆维吾尔人的序列之中 .从这些结果可以初步得出结论 ,即古车师人群并不是一个同源群体 ,在早期铁器时代 。

佤族舌运动类型的遗传学研究

2005年10月在云南省耿马县四排山乡调查了佤族252例中学生(男135例,女117例)的舌运动类型(卷舌、叠舌、翻舌、尖舌、三叶舌).研究结果表明:1)5种舌运动类型的出现率男女性别间均无显著差异;2)佤族5项舌运动类型中卷舌基因与尖舌基因、三叶舌基因间存在互作关系;3)翻舌基因与叠舌基因间存在互作关系,翻舌基因与三叶舌基因间也存在互作关系;4)佤族与内蒙古的汉族、蒙古族和朝鲜族以及与贵州布依族等群体比较,除与布依族的三叶舌出现率存在显著差异外,其他4种舌运动类型与布依族的出现率接近,佤族与其他三个民族舌运动类型出现率除三叶舌外均存在极显著差异.

古代契丹与现代达斡尔遗传关系分析

对23个契丹人骨样本线粒体第一高可变区(364 bp)进行了扩增和测序,得到22个不同序列.构建了契丹、达斡尔及对比人群的系统发育树,结果表明,契丹与外蒙的遗传关系最近,与达斡尔的遗传关系也较近;契丹与达斡尔的序列在突变位点和突变率上存在较大差异.表明虽然契丹与达斡尔之间存在较近的亲缘关系,但达斡尔不一定是契丹的直接后裔.

分子人类学与现代人的起源

1953年Watson＆Crick对于DNA双螺旋结构模型的提出及对其遗传机理的解释,标志着现代分子生物学的诞生。其后短短50年的时间里,分子生物学在各个学科之间广泛渗透,相互促进,不断深入和发展。在以研究人类的起源和进化为首要任务的人类学领域,由于现代分子生物学理论和方法的应用,诞生了分子人类学这一全新的结合型分支学科,为人类学的发展提供了科学可信的研究方法和具发展前景的研究方向。系统地介绍了分子人类学的发展历史、研究方法及原理;另外,结合分子人类学在古人类学研究中的应用,讨论了关于现代人起源的"非洲起源说"和"多地区连续演化说"。

茶洞话群体的Y染色体遗传结构及其父系起源研究

我国广西的桂东北地区大约有20,000人使用茶洞话,该群体的族源问题一直存在争议。本文为调查茶洞话群体的Y染色体遗传结构,探讨其父系起源,对临桂县使用茶洞话的21名无关男性个体的Y-STR和Y-SNP进行了检测分型,并对该群体与周边民族的遗传关系进行了研究分析。结果显示:茶洞话群体的17个Y-STR位点具有丰富的遗传多态性,适用于群体遗传学和法医学研究;Y染色体高频单倍群为O2*-P31和O2a1*-M95,表明茶洞话群体具有显著的百越民族系统侗傣族群的遗传背景;N-J树和主成分分析显示茶洞话群体与仫佬族的父系遗传关系较之与毛南族和汉族更亲近。本研究结果为茶洞话群体的族源研究提供了遗传学证据。

坛紫菜琼胶生产工艺的研究

用高温稀碱法提取坛紫菜琼胶的工艺,并以琼胶的产率、硫酸根含量及琼胶强度为技术指标,探讨了碱处理质量分数、温度和时间3个因素对各指标的影响。试验结果表明,较合适的提取条件是碱浓度4%,温度80℃,处理3 h。在该条件下,能得到较理想的提取产率。

我国西北地区49例Hb G Coushatta的分布——东北亚古代游牧民族的遗传标志

本文报道49例Hb G Coushatta在我国西北部的分布情况。新疆和甘肃的发生率为0.57‰和0.43‰,高于陕西的发生率0.07‰。维吾尔、哈萨克、柯尔克孜和回族的发生率为0.66‰—1.74‰,高于汉族的发生率0.45‰。Hb G Coushatta基因流呈由北向南和向西漂移和特点,结合国内外有关资料进行分析,这种变异体起源于东北亚地区,为古代游牧民族的遗传标志。

吐尔基山辽代贵族墓葬人骨遗骸线粒体DNA多态性分析

目的:利用分子生物学方法确定吐尔基山辽墓主人的身份及其与契丹贵族的关系。方法:对吐尔基山辽墓出土的人骨遗骸进行mtDNA研究,使用4对套叠引物对线粒体第一高可变区(360 bp)进行扩增和测序,利用契丹贵族人群的相关序列,对所得序列进行分子系统学分析。结果:与剑桥序列进行比对,共有5个突变位点;系统发育分析结果表明,吐尔基辽与契丹贵族人群遗传距离最近,且在契丹贵族的2个家族中与耶律羽之家族的亲缘关系相对较近,验证了吐尔基山辽墓主人的贵族身份。此外,与其他已报道人群数据进行比较表明,吐尔基山辽墓主人与现代外蒙古人群遗传距离最近,其5个突变位点均为蒙古人的突变热点。结论:吐尔基山辽墓样本应属于北亚蒙古人种。

河北汉族人群D17S30位点扩增片段长度多态性

目的探讨河北省汉族人群Ｄ１７Ｓ３０位点的基因频率分布，为法医的基因认定提供依据。方法用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对河北汉族人群２０１名无关个体Ｄ１７Ｓ３０位点进行扩增，扩增产物采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及溴化乙锭染色，依据扩增片段长度确定各等位基因，分别使用ＰＯＭＳ软件和自编软件，进行统计学分析和遗传多态性分析，并对１０个家系资料进行了分析。结果共检出１２种等位基因，４５种基因型，基因型分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律（χ２＝１０．６８７２，Ｐ＝０．７１０４，ｄｆ＝１４）。观测杂合度ｈｏ为７５．１２％，ＤＰ、ＥＰＰ和ＰＩＣ值分别为０．９６１１、０．７２８０和０．８４９３。该位点呈共显性遗传。结论Ｄ１７Ｓ３０位点在河北汉族人群中的基因频率分布具有良好的多态性，适用于该人群的个人识别和亲子鉴定。

中国4个民族mtDNAD环多态性研究

本文利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR- RFL P)方法 ,检测了 36名汉族、 30名达斡尔族、 32名鄂伦春族、 30名鄂温克族随机选择正常个体 mt DNA D环 465bp DNA片段多态性并加以比较。结果表明 ,mt DNA D环该片段的 RFLP分析共产生 2 7种限制性类型 ,计算出 4个民族的 mt DNA D环平均核苷酸歧异频率 ,并对 4个民族的亲缘关系进行了聚类分析。

人三叶因子3在毕赤酵母中表达条件的研究

为提高人三叶因子 3 (HumanTrefoilfactor 3 ,hTFF3 )在毕赤酵母中的表达量 ,研究了转化子生长的培养条件 ,包括不同碳源对转化子生长的影响和接种量、甲醇浓度、pH值、摇瓶转速及不同诱导时间对人三叶因子 3表达的影响。结果表明转化子在生长阶段加入葡萄糖生长旺盛 ,培养 14h后OD6 0 0 就可达到 5 0。在 10 0mL生长培养基上的菌液以 1∶1接入诱导培养基时蛋白表达量最高 ;转化子在 1%的甲醇、pH6 0、摇瓶转速 2 4 0r min的条件下诱导4 8h ,菌体密度OD6 0 0 为 15 ,目的蛋白表达量达到 2 0mg L。用 5L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 2 %甲醇 3 2h诱导 ,最终菌体密度OD6 0 0 达到 12 0 ,每升发酵液中含目的蛋白 10 0mg。

线粒体全基因组揭示嫩江流域史前人群遗传结构的动态变化

嫩江流域是中国东北地区古代先民的重要栖息地之一。自新石器时代开始这里的先民一直以渔猎经济为主要生活方式,直到新石器时代晚期至早期青铜时代才开始兼营畜牧业和少量的种植业。嫩江流域青铜时代的生业模式的转变是否伴随着外来人群的融合与替代一直是考古研究的热点。为了探讨嫩江流域新石器时代与青铜铁器时代人群的构成是否改变,我们对嫩江流域新石器时代至青铜铁器时代的24个个体进行了线粒体全基因组分析。分析结果表明:嫩江流域青铜铁器时代人群与新石器时代人群具有一定遗传连续性的同时,晚期人群与西辽河地区古代人群有着更近的遗传联系,表明西辽河地区古代居民对嫩江流域青铜铁器时代人群具有部分遗传贡献。结合考古学文化、古气候学数据以及语言学证据,我们推测距今4000-3000年间,西辽河地区古代居民曾迁入到嫩江流域,并留下遗传印记。

藏族和夏尔巴人15个常染色体STRs的遗传多态性

为了探究生活在西藏自治区的藏族人和夏尔巴人的亲缘关系,选取西藏日喀则地区的藏族人225例和夏尔巴人181例,对他们的15个常染色体遗传标记短串联重复序列(short tandem repeat,STRs)进行基因分型,将二者与一些高原人群及世界其他人群进行比对.采用Cervus3.0、Arlequin3.5、Structure2.3.4、R3.0.3、Distruct1.1等统计分析软件,对高原人群的遗传多态性进行分析.在藏族人群中共检测出141个等位基因,频率分布在0.0022~0.6222之间;在夏尔巴人群中共检测出139个等位基因,频率分布在0.0028~0.5691之间.15个位点中,藏族人群的TPOX、D3S1358、TH01位点和夏尔巴人群的D18S51、FGA位点的多态性不高,其余位点均属于高度多态性遗传标记.在STRs遗传结构上,藏族人和夏尔巴人与东亚人群最为接近,与非洲人和欧洲白人相似程度较低.由此认为,藏族人和夏尔巴人都属于东亚人群的一员,高原人群与东亚人群有着共同的遗传结构.

西藏藏族DYS287位点多态性研究

目的以西藏拉萨、那曲地区藏族男性个体为研究对象,研究两地区男性Y染色体DYS287位点多态性。方法利用PCR结合琼脂糖凝胶电泳检测方法对105例藏族男性样本(其中拉萨41例,那曲64例)DYS287位点多态性进行分析。结果两地区人群均发现Alu插入阳性个体(即YAP阳性个体),拉萨、那曲YAP阳性率分别为41.5%和62.5%。结论DYS287位点是一个重要、稳定的遗传标记,YAP阳性率在不同地区的同一民族中存在差异,这可能是人群间基因交流的结果。

MEPE／OF45蛋白的抗体制备与细胞内定位研究

目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠并得到抗体,利用抗体进行免疫荧光染色方法检测MEPE/OF45蛋白在细胞内定位情况。结果得到特异性较高的抗体,并观察到MEPE/OF45蛋白在辐射敏感细胞与抗辐射细胞内定位不同。结论MEPE/OF45蛋白不同辐射敏感型的细胞中定位不同,说明MEPE/OF45蛋白参与细胞辐射后DNA损伤修复过程。

一个人类锌指蛋白家族新基因ZFP28的克隆及表达

Krｐｐｌｅ型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子 .初步克隆了一个新的人类kr櫣ｐｐｌｅ型锌指蛋白基因 ,经国际基因命名委员会批准命名为ZFP2 8.此基因长 4 0 76个碱基 ,含 8个外显子 ,在基因组DNA上长 1 8kb .它编码的蛋白质全长 868个氨基酸 ,含 1个信号肽 ,2个KRAB框和 1 4个C2H2型的锌指 .NorthernBolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达 ,在肺和肝中的表达水平最强 .其结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子 .

西藏藏族mtDNA COⅡ/tRNA^(Lys)基因间区9-bp缺失多态性

目的通过对西藏拉萨和那曲两地区藏族群体线粒体DNA COⅡ/tRNALys基因间(Ⅴ区)的研究,了解Ⅴ区9-bp短串联重复序列的多态性。方法应用PCR法扩增163例(拉萨82例,那曲81例)藏族青少年标本后琼脂糖凝胶电泳进行检测,并对突变样本测序分析。结果共有9例缺失型(占5.52%),其中拉萨藏族中有4例(4.88%),那曲藏族中有5例(6.17%),其余为标准型,未发现3型和长型多态。结论研究结果表明西藏两地区藏族人群中只存在mtDNAⅤ区的标准型和缺失型两种多态性,而且其缺失率经两样本率的χ2检验证明差别不大。

人脑蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1基因克隆与原核表达

从人脑组织中提取mRNA,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,筛选阳性克隆进行验证,将测序正确的质粒转化到E.coli Transetta感受态细胞中表达SHP-1.进一步对SHP-1表达的诱导温度和IPTG浓度等条件进行优化.结果显示,所克隆的SHP-1基因片断经PCR鉴定和测序分析,与目标基因完全相符.通过蛋白表达条件的优化,发现20℃,0.4mmol/L IPTG对表达菌株进行诱导时,SHP-1可溶性蛋白表达量最大.