上海市普陀区食品中单核细胞增生李斯特氏菌的监测与分析

目的了解上海市普陀区食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)的污染状况、分子分型特征及耐药性。方法选取2021—2023年从上海市普陀区各采购渠道所采集的8类食品,共计504件,对其LM阳性率进行检测,对分离鉴定所得的阳性菌株进行分子分型,并进行药物敏感性试验。结果504件样品中,共有22件样品检出LM,总检出率为4.4%,其中调理肉制品检出率最高(9.1%)。22株LM获得18个带型,带型相似度为42.11%~100.00%。22株LM对头孢西丁均耐药,部分菌株对克林霉素、苯唑西林、氨苄西林、红霉素、四环素耐药,耐药率分别为27.3%、18.2%、4.5%、4.5%、4.5%,多重耐药率为36.4%。结论上海市普陀区的肉与肉制品受LM污染最为严重,其中菌株PFGE带型呈多样性,且多重耐药比例较高。

常见细菌性食源性疾病研究进展

细菌性食源性疾病在全球范围内非常普遍,并对公共卫生和个人健康造成了影响。常见的3种食源性病原菌分为沙门氏菌、大肠杆菌和志贺氏菌,本文针对其形态特征和食源性致病机制,以及诊断细菌性食源性疾病的方法、有关细菌性食源性疾病治疗方案等进行综述,以期为临床实践和预防措施的制定提供理论依据。

2022年昆明市学生餐中微生物污染现状分析及其菌种鉴定

为了解2022年昆明市学生餐中微生物污染现状,按照国家食品安全标准对昆明市的学生餐开展监测,利用统计软件SPSS 27.0对监测结果进行数据统计分析,采用RiboPrinter■全自动微生物基因指纹鉴定系统对检出的污染菌进一步鉴定分析。结果显示,对36家集体用餐配送企业的385批次盒饭开展检验,不合格26批次,总体不合格率为6.8%,其中,菌落总数不合格率4.2%,大肠埃希氏菌不合格率3.4%,金黄色葡萄球菌、沙门氏菌全部合格。污染菌纯化分离后得到68株菌株,进一步鉴定出51株菌株,包括19种细菌属,主要为芽孢杆菌属23株,占比33.8%;葡萄球菌属6株,占比8.8%;肺炎克雷伯氏菌5株,占比7.3%;大肠埃希氏菌属6株,占比8.8%;少动鞘氨醇单胞菌3株,占比4.4%;克氏库克菌、藤黄微球菌各2株,占比2.9%;不动杆菌、黄色氢噬胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌各1株,占比1.5%。由此可见,2022年昆明市学生餐食品安全总体状况良好,未发现高风险致病菌,但集体用餐配送企业应对条件致病菌引起重视,必须严格控制卫生条件,预防学生群体食源性疾病的发生。

细菌性食物中毒病原学及微生物检验分析

目的:分析细菌性食物中毒病原学及微生物检验情况。方法:选取2017年1月—2021年12月苏州工业园区疑似食物中毒事件中流行病学调查的286例细菌性食物中毒患者作为研究对象。分析患者的临床特征、病因菌检出情况、细菌血清型分布情况。结果:286例患者食物中毒后的临床特征以恶心呕吐最为常见,其次为发热和腹痛。分析286例患者病原菌检出情况,以副溶血性弧菌最为常见,其次为致泻性大肠埃希杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌。结论:对细菌性食物中毒患者实施微生物检验,能判断血清类型、病原菌菌属,不仅能为患者后期治疗提供依据,还能对污染源进行控制。

自感染性腹泻样品中分离的副溶血性弧菌菌株特征分析

目的:了解南通市副溶血性弧菌的流行及耐药性状况,为制定食源性疾病防治措施提供基础资料。方法:采集2018—2022年南通市区3家哨点医院食源性腹泻患者的粪便样品,进行副溶血性弧菌分离鉴定、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型及药敏试验,并对感染性腹泻病例涉及的食品分类、食品加工及包装方式、进食场所分布情况进行分析。结果:2040份粪便样品中副溶性弧菌阳性样品有80份,阳性率为3.92%。副溶血性弧菌人群普遍易感,以>30~40岁组居多,季节分布特征为夏秋季出现感染高峰。不耐热溶血素(thermolabile hemolysin,TLH)、耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)及耐热相关溶血素(TDH-related hemolysin,TRH)核酸定性检测结果显示,毒力基因型分布集中在TLH+TDH+TRH-型。依据带型完全相同的菌株为同一个PFGE型别,除3条带降解外,其余77株分为76个型别,总体条带相似度为38.3%。副溶血性弧菌对头孢唑啉的耐药率最高,达100%。食源性疾病监测与溯源系统显示主要可疑暴露食品为水产动物及其制品、混合食品和肉与肉制品,高发场所主要为家庭、街头食品及饭店(酒店)。结论:副溶血性弧菌仍是南通市食源性疾病的重要病原菌,流行季节以夏秋季为主。故针对本市食源性疾病暴发流行病学特征,应加强对餐饮服务业的食品安全风险监测,提高监测预警能力,降低食源性疾病事件的发生。

细菌性食物中毒的微生物学检验探究

随着居民生活水平的提高,食品安全问题愈发受到人们关注。文章基于细菌性食物中毒与微生物学检验的理论,对选取的样本进行PCR扩增方法检测并分析结果,指出了微生物学检验在防控细菌性食物中毒方面的应用,并论证了微生物学检验可以对食品安全问题进行更好的控制,希望通过该研究有效提高人们的生活质量。

一起由金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌引起食物中毒的实验室检测分析

目的:通过实验室微生物检测查清山东省淄博市淄川区一起学校食物中毒事件的原因,为相似的食源性疾病暴发事件提供处置依据。方法:采集可疑食品及其包装袋8份、病例呕吐物2份至实验室进行常见致病菌检测,用实时荧光PCR方法测定增菌液中的金黄色葡萄球菌肠毒素类型。结果:1份面包屑检出金黄色葡萄球菌,1份吃剩的鸡腿检出蜡样芽胞杆菌,其余样品未检出可疑致病菌。结论:根据采集样品实验室微生物检测结果,结合现场流行病学调查以及中毒病例临床症状综合分析,此事件因食物保存不当,导致金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌滋生,食入引起食物中毒。

南京市雨花台区腹泻患者沙门氏菌检出情况及其特征

目的探讨南京市雨花台区腹泻患者沙门氏菌检出情况及其特征。方法选取1327例疑似细菌性腹泻患者为对象,采集其粪便进行细菌培养及分离鉴定。结果1327例腹泻患者样本中,检出60例(4.52%)沙门氏菌感染,其中单一感染48例,混合感染12例。不同季节沙门氏菌感染腹泻的检出率差异显著(P<0.05)。沙门氏菌感染的主要症状为腹泻、伴有脐周阵发性疼痛及恶心等。混合感染组的呕吐、腹痛、恶心占比均高于单一感染组(P<0.05)。结论南京市雨花台区沙门氏菌感染多在秋季发病,应结合疾病高发季加强对老年人、农村地区人群的健康教育及行为干预,以减少沙门氏菌感染的发生。

非编码小RNA对食源性致病菌的调控机制

细菌性食物中毒属食品安全问题,其主要由食源性致病菌所致。在食品加工及贮藏阶段,细菌为了适应残酷的生存环境,进化出复杂的调控机制。如:通过改变自身基因的表达水平而提高存活率。细菌体内大量存在的非编码小分子RNA(sRNA),在调控中起重要作用。sRNA能够通过多种方式促进或抑制蛋白的合成,这与细菌的生理机制表达、环境胁迫的耐受性等密切相关。因环境改变而诱导sRNA转录,进行调节的细菌,在生理与抗性上会产生显著性改变。可能导致细菌的抗性增强,难以被消灭,同时还会提高自身毒性而威胁人体的生命健康。本文主要综述sRNA对食源性致病菌致病性的影响,以及环境改变而受到胁迫时的调控方式,揭示细菌sRNA在生物适应性进化及生命活动中的作用。

赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.

大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立

目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析。结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好。检测大肠杆菌O157的最低检出浓度为1×105cfu/ml。方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测。结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。

食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒素检测

[目的]对3个可疑食物中毒样品进行金黄色葡萄球菌及肠毒素检测。[方法]按照GB/T4789.10-2003进行金黄色葡萄球菌检测,同时设计4对引物,分别扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc基因)和相关肠毒素基因(SEA、SEB、SECs),建立一种快速检测金葡菌和肠毒素的方法。[结果]3个样品通过增菌接种,均检出有完全溶血环、G+葡萄球菌,血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌;Baird-Parker直接计数菌落结果分别为:9.6×107cfu/g、1.5×105cfu/g、1.7×108cfu/g;PCR检测3个样品均扩增出了金黄色葡萄球菌nuc基因(279bp)和肠毒素A(SEA)基因(288bp)。[结论]3个样品中均检出含有葡萄球菌肠毒素A的金黄色葡萄球菌,是引起该次食物中毒的主要原因。

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布

目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检测方法。从生牛奶中分离的29株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SED和SEG-SEJ基因,没有检测到SEE基因。毒素基因携带率为65.5%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占37.9%。有SEA基因的占51.7%,含其它传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占17.2%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI和SEJ的菌株占41.4%。结论:建立的PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素基因的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,而且携带新发现的肠毒素基因的较多。

T-2毒素对胎儿软骨细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响及硒的保护作用

目的探讨T-2毒素对软骨细胞凋亡的作用,和对凋亡调控蛋白Bcl-2与Bax表达的影响,以及微量元素硒对软骨细胞的保护作用.方法采用电镜,Annexin V/PI法检测T-2毒素致人软骨细胞凋亡的情况,采用流式细胞仪检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变;不同浓度(1～20μg/L)的T-2毒素均可以引起软骨细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加,且在一定范围内呈浓度依赖性,T-2毒素浓度为20μg/L时早期凋亡率最高达5.60%,晚期凋亡率最高达8.61%.生理浓度的微量元素硒可部分减弱T-2毒素引起的凋亡;不同浓度(1～20μg/L)的 T-2毒素都能引起Bcl-2和Bax表达水平提高,浓度为10～20μg/L时,Bax/Bcl-2比值升高;硒能部分对抗T-2毒素引起的Bcl-2和Bax 表达的提高,使Bax/Bcl-2比值下降,以降低凋亡率.结论 T-2毒素在浓度为1～20μg/L时,可以引起软骨细胞凋亡;T-2毒素引起的软骨细胞凋亡与软骨细胞内Bax/Bcl-2比值升高有关,硒对T-2毒素引起的软骨细胞凋亡有一定保护作用.

改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌

目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。

荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立

针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。

细菌性食物中毒流行趋势及预防对策

细菌性食物中毒是一种常见的食源性疾病,由进食被细菌或其毒素污染的食物引起。细菌性食物中毒在全球范围内均有发生,严重威胁人类健康。随着全球气候变化、食品贸易的发展和人们生活水平的提高,细菌性食物中毒的流行趋势不断变化,新的病原菌不断出现,耐药菌株增多,给疾病防控带来了新的挑战。因此,本文针对细菌性食物中毒流行趋势及预防对策进行探讨。

细菌性痢疾流行特点及志贺菌耐药性研究

目的研究近年来肠道门诊细菌性痢疾流行概况及志贺菌耐药特点,为细菌性痢疾临床治疗和预防控制提供依据。方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养,可疑菌株经VITEK-32细菌鉴定仪及血清凝集鉴定到群,K-B法检测抗菌药物的耐药性,纸片确认试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),三维试验检测AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)。结果 279例细菌性痢疾感染患者主要以宋内志贺菌(201株,占72.4%)和福氏志贺菌(76株,占27.2%)感染为主,且患者主要集中在0～11岁年龄段,占总感染率的71.3%(199/279),高发季节为7-11月。药敏结果显示,志贺菌对氨苄西林、哌拉西林和复方新诺明的耐药率较高,均>60%;对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率较低,均<40%,未发现耐哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南的志贺菌。151株志贺菌纸片确认试验为产ESBLs阳性菌株,占54.1%(151/279);未发现AmpC酶阳性者。结论我院肠道门诊细菌性痢疾以感染宋内志贺菌和福氏志贺菌的婴幼儿为主,且宋内志贺菌有增高趋势,2种志贺菌对部分种类的抗菌药物药敏性差别较大,临床医师应根据菌群鉴定及药物敏感试验结果合理选择抗菌药物。

沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR快速检测体系的初步探讨

目的建立能在12小时内同时快速检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR体系。方法碱性蛋白胨水(BPW)非选择性增菌6h;100℃10min制备DNA模板;根据大肠杆菌O157∶H7的uidA基因、志贺菌的ipaH基因及沙门菌的invA基因序列设计各菌引物,进行PCR扩增及电泳检测。同时优化反应体系,测定体系灵敏度和特异性。结果该多重PCR体系能在12h内同时检测3种目的菌;灵敏度为10～30cfuml;通过对23株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论初步探讨出能在12h内快速、灵敏、特异地同时测定沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157∶H7的多重PCR体系。