HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

GHS-R 1a敲除对小鼠下丘脑小胶质细胞表达的影响

目的探讨生长激素促分泌受体1a(GHS-R 1a)敲除对小鼠下丘脑小胶质细胞表达的影响。方法选取12只6月龄GHS-R 1a^(-/-)雄性小鼠设为GHS-R1a^(-/-)组,12只同月龄野生型(WT)雄性小鼠设为WT组。采用高架十字迷宫(EPM)实验测试两组小鼠的焦虑水平,采用组织免疫荧光技术检测两组小鼠下丘脑小胶质细胞数量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测两组小鼠下丘脑离子钙结合接头分子1(Iba 1)、小胶质细胞活化蛋白CD 68和髓系细胞触发受体2(Trem 2)基因的表达水平。结果两组小鼠EPM实验结果无显著差异(P>0.05);组织免疫荧光技术检测结果显示,GHS-R1a^(-/-)组小鼠下丘脑中小胶质细胞数量显著多于WT组小鼠(t=4.61,P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,GHS-R1a^(-/-)组小鼠下丘脑Iba 1和Trem 2 mRNA表达水平显著高于WT组小鼠(t=3.63、3.01,P<0.05),CD68 mRNA水平表达显著低于WT组小鼠(t=3.79,P<0.05)。结论GHS-R 1a基因敲除不影响小鼠的焦虑水平,但会导致小鼠下丘脑中小胶质细胞数量增加;GHS-R 1a可能在抑制小胶质细胞增殖及吞噬功能、促进小胶质细胞活化的过程中发挥调节作用。

蓝斑在刺激视上核镇痛中的作用

应用核团微量注射、放射免疫测定（ＲＩＡ）和高压液相（ＨＰＬＣ）观察了刺激视上核（ＳＯＮ）对蓝斑（ＬＣ）灌流液中催产素（ＯＴ）、精氨酸加压素（ＡＶＰ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）的含量的变化以及蓝斑注射ＯＴ和ＡＶＰ的拮抗剂对痛阈（ＰＴ）的影响。结果表明：刺激ＳＯＮ后３０到９０ｍｉｎ，ＬＣ灌流液中ＯＴ的含量，３０ｍｉｎＡＶＰ的含量，６０ｍｉｎ５－ＨＴ的含量明显增加，而ＮＥ的含量在３０和６０ｍｉｎ时明显降低。注射ＡＶＰ的Ｖ１拮抗剂到ＬＣ对注射Ｌ－谷氨酸到ＳＯＮ引起的镇痛作用无影响，Ｖ２拮抗剂可部分抑制和ＯＴ拮抗剂可翻转刺激ＳＯＮ引起的镇痛作用。以上结果提示刺激ＳＯＮ引起的镇痛作用可能是由于ＳＯＮ释放的ＯＴ通过作用于ＬＣ内的ＯＴ和Ｖ２受体使ＬＣ内的５－ＨＴ增加和ＮＥ降低而产生的。

大鼠下丘脑离体脑薄片视上核神经元的全细胞记录

在大鼠下丘脑薄片标本上对52例视上核神经元进行了全细胞膜片箝记录。膜被动及主动电生理参数测量如下：静息电位，59±8mV；输入阻抗，535±129MΩ；时间常数，32±9ms；动作电位幅度，99±11mV；超射值，37±13mV（n＝39）。大多数神经元在接受去极化刺激时出现明显的慢后超极化电位或电流。我们发现，在电压箱状态下几乎所有的视上核神经元均接受兴奋性和／或抑制性突触传λ（n=13）。药理学实验表明，兴奋性突触后电流是由non－NMDA亚型谷氨酸受体介导，而抑制性突触后电流由GABAA受体介导。

大鼠严重创伤后早期下丘脑c-fos和CRH mRNA的表达

目的 探讨严重创伤后下丘脑c fos蛋白和CRHmRNA表达变化的关系。方法 以大鼠右肺中部重度撞击伤加右股骨中段骨折为模型 ,采用Western印迹和RT PCR方法观察大鼠下丘脑组织内c fos蛋白和CRHmRNA表达变化。结果 伤后下丘脑c fos含量 3 0min达高峰 ,以后迅速下降 ;CRHmRNA表达的变化明显迟于c fos的变化 ,创伤后下丘脑CRHmRNA含量于 2h增加最为明显 ,然后持续增加 ,12h达最高。结论 严重创伤后早期下丘脑迅速增加的c

大鼠下丘脑神经元培养的新方法

目的通过对大鼠下丘脑神经元培养方法的改进研究,寻找更佳的下丘脑神经元培养方法。方法基于目前常用的Neurobasal+B27+GlumaxⅠ的神经元培养体系,采用多重过滤替代原来的取上清过滤的方法处理神经元,并对换液方式作出相应调整。以NF-200对细胞进行免疫组织化学染色鉴定。通过观察比较培养下丘脑神经元的细胞密度、神经元轴突长度和胞体面积等指标,对培养方法作出评价。结果2种培养方法均获得良好的培养效果,改进的方法在细胞密度,3、7、10、12 d 4个时间点均优于原培养方法;神经元轴突长度和胞体面积方面,新方法只在3 d时优于原方法,至7 d时二者差异已不明显。结论新方法具有稳定的可重复性,可应用于神经元的培养实验。

尾核P物质对胃运动的抑制效应系通过黑质、迷走背核经迷走神经所介导

本工作观察损毁下丘脑外侧区、黑质、迷走背核及其传出神经对尾核微量注射Ｐ物质（ｓｕｂ－ｓｔａｎｃｅＰ；ＳＰ）引起的胃肌电快波和胃运动抑制效应的影响。实验结果：该抑制效应不依赖于下丘脑外侧区的完整，但可被损毁黑质、迷走背核或迷走神经所消除。用利血平耗竭交感神经递质则不影响该效应。这些结果表明：尾核ＳＰ的抑胃效应系通过黑质、迷走背核经迷走神经所传出。

血管紧张素Ⅱ对大鼠下丘脑内血管升压素基因转录的影响

实验在雄性ＳＤ大鼠中进行，用核酸斑点杂交技术观察下丘脑组织中血管升压素（ＡＶＰ）基因转录水平变化，用异羟基洋地黄毒甙（ＤＩＧ）标记的２６个碱基长寡聚核苷酸作为检测探针。实验中观察到，用渗透压微泵向大鼠侧脑室内连续注射微量血管紧张素Ⅱ（０．２ｎｍｏｌ／ｈ）２ｄ后，可引起动物饮水量显著增加，下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平升高，但无统计学显著意义。将实验动物每日饮水量限制在与对照动物相同的每日饮水量之后，侧脑室内注射ＡＮＧⅡ可导致下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平显著升高。另外，给动物饮用２％ＮａＣｌ溶液或禁水后，也观察到下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平升高。脑室内连续注射ＡＮＧⅡ受体拮抗剂Ｄｕｐ７５３（０．９ｎｍｏｌ／ｈ，６ｄ），或腹腔内注射血管紧张素转化酶抑制剂巯甲丙脯酸（Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ５ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）），不能阻断高渗刺激或禁水引起的下丘脑ＡＶＰ基因转录水平升高效应。上述实验结果表明，脑室内给予ＡＮＧⅡ可以使ＡＶＰ基因转录水平升高，在限制饮水的情况下，ＡＮＧⅡ的这种效应更为显著。另外，禁水引起的ＡＶＰ基因转录水平升高效应，看来并不需要内源性ＡＮＧⅡ参与。

兴奋下丘脑弓状核神经元降低大鼠血浆唾液酸水平的作用

实验采用下丘脑弓状核（ＡＲＣ）区微量注射和紫外分光光度测定法，研究ＡＲＣ区注射不同浓度谷氨酸钠（ＧｌＵ）对大鼠血浆唾液酸（ＳＡ）水平的影响。结果表明：（１）ＡＲＣ区注射Ｇｌｕ后，血浆ＳＡ水平较对照组明显降低（Ｐ＜０．０１），而且随Ｇｌｕ浓度的增加，血浆ＳＡ水平降低所需的时间逐渐缩短；（２）例脑室注射阿朴吗啡后，ＡＲＣ区注射测射Ｇｌｕ，血浆ＳＡ水平明显降低（Ｐ＜０．０１），而且降低发生时间较对照组提前；（３）例脑室注射螺哌啶酮后，ＡＲＣ区注射Ｇｌｕ，血浆ＳＡ水平无明显变化（Ｐ＞０．０５）。这提示下丘脑ＡＲＣ区神经元兴奋导致血浆ＳＡ水平降低可能与下丘脑ＡＲＣ区的多巴胺能神经元兴奋释放多巴胺（ＤＡ）有关，且通过ＤＡ－Ｄ２受体起作用。

谷氨酸单钠对新生期大鼠下丘脑内侧基底部神经元的神经毒性作用

通过对新生期大鼠皮下注射谷氨酸单钠(MSG),观察对下丘脑內侧基底部神经元的影响?峁砻?MSG可毁损下丘脑弓状核、腹内侧核、具有明显的神经毒性作用,其毒性作用可能随着作用剂量的加大或时间的延长而增大。未见到MSG对下丘脑背内侧核神经元的损伤作用。

下丘脑室旁核加压素能神经元参与电针刺激对实验性内脏痛的抑制

本实验采用内脏痛的实验模型,探讨室旁核中的加压素在针刺抑制内脏痛中的作用。实验结果如下:(1)大鼠在在射酒石酸锑钾(0.1％,10ml/kg,i.p.)后,出现可定量的扭体反应,能作为观察内脏痛的客观指标。(2)电针对内脏痛有抑制效应,即具有镇痛作用。(3)电刺激室旁核,能加强电针对内脏痛的抑制效应,损毁室旁核,则此抑制效应基本消失。(4)脑室注射加压素抗血清(14μl)或加压素拮抗剂[d(CH_2)_5Tyr(Me)-AVP,500ng/5μl]都能明显减弱电针的抑制效应。(5)腹腔注射加压素拮抗剂(10μg/kg),不能翻转电针的抑制效应。上述实验结果表明,下丘脑室旁核的加压素能神经元参与了电针刺激对实验性内脏痛的抑制。

大鼠下丘脑室旁核和室周核生长抑素神经元与加压素或神经降压素的共存——PAP与胶体金双标记免疫电镜观察

本研究以包埋前PAP标记生长抑素(SRIF)结合包埋后胶体金标记加压素(VP)或神经降压素(NT)的双标记电镜技术,观察了大鼠下丘脑SRIF与VP、NT共同分布的室周核(Pv)和室旁核内侧小细胞区(PVNmp),以探讨SRIF与VP或NT阳性标记结构之间是否有直接的形态联系。结果表明,在PVNmp内有部分SRIF阳性细胞同时也被VP标记,并可在室管膜细胞之间发现两者共存的树突。在PVN内SRIF、VP共存的轴突与共存的胞体或阴性的树突上形成突触联系。在Pv和PVNmp内还发现了SRIF、NT共同标记的细胞体或纤维。除了上述两种共存的神经元外,大部分的阳性标记为不共存的结构。两种共存的神经元都参与局部核团功能的调节,其中SRIF与VP共存的神经元可能还参与脑脊液相关的某种调节作用。

束缚应激大鼠下丘脑谷氨酸受体变化和行为绝望状态的关系研究

目的:研究束缚应激和糖皮质激素对大鼠下丘脑谷氨酸α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid,AMPA)受体Glu R2亚基及谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体NR2B亚基的影响,并分析谷氨酸受体与行为绝望状态的关系及CP-154526干预作用。方法:将30只雄性大鼠随机分成3组:应激组(10只大鼠,每天给予束缚应激1次,连续21 d)、CP-154526治疗组(10只大鼠,每天给予束缚应激1次和每日腹腔内注射CP-154526,连续21 d)、对照组(10只大鼠,不予以束缚处理和CP-154526干预)。采用每日束缚3 h,连续21 d的方法建立抑郁症模型,通过悬尾实验和强迫游泳实验监测行为学变化,酶联免疫吸附实验检测血浆糖皮质激素(glucocorticoid,GC)浓度,免疫组化法观测下丘脑AMPA受体Glu R2亚基及NMDA受体NR2B亚基表达,并分析上述结果之间的相关性。结果:悬尾实验中,对照组、应激组、CP-154526治疗组不动时间分别为(118.40±27.36)s、(191.00±28.84)s、(141.60±23.89)s,应激组大鼠悬尾不动时间多于对照组(P=0.001)和CP-154526治疗组(P=0.013);强迫游泳实验中,对照组、应激组、CP-154526治疗组游泳不动时间分别为(87.20±14.49)s、(145.80±17.45)s、(106.60±14.01)s,应激组游泳不动时间多于对照组(P=0.000)和CP-154526治疗组(P=0.002);对照组、应激组、CP-154526治疗组血浆GC水平分别为(52.61±6.11)μg/L、(194.33±23.30)μg/L、(64.17±19.59)μg/L,应激组血浆GC浓度明显高于对照组(P=0.000)和CP-154526治疗组(P=0.000);在免疫组化实验中,对照组、应激组、CP-154526治疗组Glu R2亚基表达的平均光密度分别为0.227±0.031、0.079±0.011、0.169±0.020,应激组大鼠下丘脑Glu R2亚基平均光密度低于对照组(P=0.000),同时亦明显低于CP-154526治疗组(P=0.000);CP-154526治疗组大鼠下丘脑Glu R2亚基平均光密度低于对照组(P=0.000);对照组、应激组、CP-154526治疗组NR2B亚基表达的平均光密度分别为0.159±0.021、0.266±0.054、0.168±0.018,应激组大鼠下丘脑NR2B亚基平均光密度高于对照组(P=0.000),同时亦高于CP-154526治疗组(P=0.000)。悬尾不动时间和强迫游泳不动时间与血浆GC浓度和NR2B亚基表达呈正相关(r=0.721,P=0.006;r=0.589,P=0.153;r=0.486,P=0.004;r=0.868,P=0.000),和Glu R2亚基表达呈负相关(r=-0.721,P=0.014;r=-0.812,P=0.012)。结论 :慢性应激后血浆GC浓度上升,下丘脑谷氨酸受体发生继发变化。NMDA受体NR2B亚基增加,而AMPA受体Glu R2亚基减少,并与行为绝望状态相关。CP-154526可以改善慢性应激大鼠的行为绝望状态。

中枢去甲肾上腺素能系统对大鼠颈动脉窦反射的影响

孤离颈动脉窦,向侧脑室(LCV)注射6-羟多巴胺(6-OHDA,200μg)和电解损毁蓝斑(LC),建立窦内压(ISP)-平均动脉压(MAP)关系曲线,与对照组比较,研究中枢去甲肾上腺素能系统对ISP调节MAP的影响。通过Logistic曲线方程符合所有ISP-MAP曲线,曲线的特征是由两个参数即曲线斜率的反演点坐标和MAP变动范围决定的,MAP变动范围同斜率因子的变化率有关,并受ISP的控制。结果如下:(1)注射6-OHDA后,ISP-MAP曲线斜率变化率显著低于对照组,窦内压控制的平均动脉压变动范围明显缩小,而曲线斜率反演点的横坐标(即ISP的位置)无改变。(2)与对照组相比,电解损毁LC后,引起ISP-MAP曲线相似于注射6-OHDA后的变化,但不如后者显著。结果提示:中枢去甲肾上腺素能神经系统可易化颈动脉窦反射。

大鼠急性颅脑伤后下丘脑生长抑素神经元的变化

应用免疫细胞化学和图像分析等技术，观察大鼠急性颅脑伤后室旁核生长抑素（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）神经元的变化。结果表明，损伤初期（伤后即刻，１ｈ）ＳＳ神经元数目和免疫反应面积均明显减少（Ｐ＜０．０１）；伤后３ｈ和６ｈＳＳ含量逐渐增加，恢复至正常水平（Ｐ＞０．０５）。该结果从形态学上提示，下丘脑室旁核ＳＳ可能参与了急性颅脑伤的病理生理过程。

多克隆免疫激发剂LPS免疫激发大鼠引起下丘脑和脑干核团c-fos表达

为了解参与机体免疫调控过程的中枢神经核团，对雄性ＳＤ大鼠侧脑室及腹腔注射多克隆免疫激发剂ＬＰＳ，应用即刻早期表达基因ｃ－ｆｏｓ免疫组织化学法，观察大鼠脑内Ｆｏｓ表达。侧脑室注射ＬＰＳ１０ｎｇ，３ｈ后见下丘脑室旁核内侧部对应ＣＲＦ神经元分布区有密集的Ｆｏｓ阳性染色；外侧及腹侧部相当于ＯＸＴ细胞所在部位的脑干、脊髓投射区有Ｆｏｓ表达细胞；前大细胞亚核亦有Ｆｏｓ染色细胞。视上核、杏仁中央核也观察到较为密集的Ｆｏｓ阳性细胞。腹腔注射ＬＰＳ１００μｇ后０．５ｈ，于侧脑室注射表达Ｆｏｓ的部位见有阳性着色细胞，３ｈ达高峰，随后逐渐降至对照组水平。腹腔注射ＬＰＳ剂量反应曲线显示，５．０μｇ即可引起Ｆｏｓ表达，１００μｇＦｏｓ表达细胞数达高峰。腹腔注射１００μｇ，３ｈ后，下丘脑内Ｆｏｓ表达与侧脑室注射者相似。且在孤束核有密集的Ｆｏｓ表达细胞，经ＴＨ抗体复染，４０％的Ｆｏｓ阳性细胞被双标。结果表明：ＬＰＳ可激活脑内多个神经核团，提示大脑对免疫功能的调控是多部位的协调作用。孤束核参与免疫激发信息的上传；下丘脑室旁核在大脑调控信息下传至免疫器官中起重要作用，其不同亚核分别向垂体前叶、后叶、脑干及脊髓的投射，似可组成３条通路：即下丘?

高原低氧对大鼠下丘脑谷氨酸、天门冬氨酸和NOS的影响

目的 :观察高原低氧大鼠下丘脑谷氨酸 (Glu)、天门冬氨酸 (Asp)和一氧化氮合酶 (NOS)的变化。方法 :应用氨基酸测定和NADPH -d组化法 ,检测高原低氧模型大鼠下丘脑Glu、Asp含量和NADPH -d阳性神经元的数量。结果 :高原低氧大鼠下丘脑Glu、Asp含量明显增多 ,室旁核、视上核可见密集深染的NADPH -d阳性神经元 ;用NMDA受体拮抗剂氯氨酮 (Ketamine)和AP -V对高原低氧大鼠进行预处理后置于低压氧舱 ,观察到大鼠下丘脑室旁核、视上核NADPH -d阳性神经元数明显少于相应时间的高原低氧组 (P <0 0 1)。结论 :NMDA受体可能参与了高原低氧引起的下丘脑NOS的表达。

孤束核参与刺激下丘脑室旁核的镇痛作用

本实验用电刺激鼠尾-嘶叫法测痛,观察电刺激下丘脑室旁核的镇痛效应,并采用核团损毁和核团内微量注射药物等方法分析其镇痛通路。实验结果如下:(1)电刺激下丘脑室旁核能产生明显的镇痛效应。同时,放射免疫测定发现脑干加压素含量升高。(2)损毁孤束核能取消刺激下丘脑室旁核的镇痛效应,但对基础痛阈无影响。(3)孤束核内微量注射加压素拮抗剂[d(CH_2)_5 TYr(Me)-AVP]60ng/0.6μl 和加压素抗血清0.6μl 都可明显对抗刺激下丘脑室旁核的镇痛效应。(4)直接在孤束核内微量注射加压素60ng/0.6μl,能模拟刺激下丘脑室旁核的镇痛效应。实验结果表明:电刺激下丘脑室旁核能产生镇痛效应,其机理之一可能是兴奋了下丘脑室旁核中加压素能神经元胞体,后者通过下行投射纤维在孤束核中释放加压素,影响孤束核神经元的活动,从而产生镇痛。

刺激下丘脑腹内侧核引起的心脏收缩性变化

本文在麻醉猫上,采用LVSP、dp/dt_(max)、V_(max)及心力环等指标,研究了刺激下丘脑腹内侧核(VMH)及其与第三脑室之间的VMH内侧邻近区(L_(0.5)引起的心脏收缩性改变。刺激VMH引起心力增强,刺激VMH内侧邻近区(L_(0.5)使心力减弱。切断两侧迷走神经后,不影响上述反应。实验结果表明:调节心脏变力性与变时性的机能结构于下丘脑某些区域中是分别存在的。

前交通动脉及其下丘脑穿动脉的显微解剖研究

目的探讨前交通动脉及其下丘脑穿动脉的显微解剖学特点,为神经外科提供该区域解剖学资料。方法对15例（30侧）福尔马林固定的尸头标本开颅取脑,在手术显微镜下对前交通动脉及其发出的下丘脑穿动脉的形态、长度、管径、毗邻结构等进行观察和描述。结果前交通动脉长度为（3.34±0.74）mm,管径（1.22±0.79）mm,其形态变异较多,可分为简单型、复杂型及缺如;前交通动脉均恒定发出穿动脉,约2-7支,平均直径0.28 mm,起源于前交通动脉的上、后、下壁,长度、管径及走行不一,供应下丘脑、终板、胼胝体等。结论了解前交通动脉及其下丘脑穿动脉解剖特点,有助于术中加以辨认和保护。