二肽基肽酶4的多功能性及相关药物靶点作用机制的研究进展

二肽基肽酶4(dipeptidyl peptidase 4,DPP4)是丝氨酸膜固定的外肽酶,在人体的多项生理或病理活动过程中发挥重要调控作用。DPP4不仅作为转录因子调控下游靶基因的转录和表达,还能作为不依赖于转录的调节因子,通过蛋白间的相互作用,发挥其调控作用。在目前研究中,DPP4与多种疾病密切相关,并且已发现多种具有潜在靶向DPP4的物质。该文主要综述了DPP4在调节机体能量代谢、炎症、组织修复和癌变等多个方面的多功能性。同时,以慢性肝病的病理发展过程为基础,还综述了DPP4体外抑制剂的筛选以及其在调控慢性肝病方面的研究进展。

姜黄素抑制NF-κB信号通路缓解氧化应激对成骨分化的损害发挥抗骨质疏松作用

目的 探讨姜黄素抑制氧化应激对成骨分化损害的机制及以剂量依赖的方式发挥抗骨质疏松的作用。方法 采用细胞氧化应激模型,加入不同浓度的姜黄素,测定骨形成指标,并检测参与的潜在信号通路。同时,用姜黄素处理小鼠去卵巢(ovariectomized, OVX)骨质疏松动物模型来证实其抗骨质疏松的作用。结果 体外实验发现,低浓度姜黄素(1~10μmol·L^(-1))促进成骨细胞增殖,提高骨形成碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,逆转氧化应激导致的成骨钙沉积下降,降低了核因子kappa-B配体的受体激动剂(RANKL)和白介素-6 (IL-6)的表达。体内实验结果显示,姜黄素(5 mg·kg^(-1))给药后部分逆转了OVX小鼠血液中丙二醛(malondialdehyde, MDA)和谷胱甘肽(glutathione, GSH)活性的比例、降低高骨代谢、增加骨密度(bone density, BMD)、改善了骨小梁的微结构,但高浓度姜黄素无氧化应激保护作用。结论 姜黄素可以减轻氧化应激的骨形成损害,NF-κB信号通路是主要参与通路,姜黄素可能是预防骨质疏松症的理想药物。

二陈汤加减联合多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗代谢相关脂肪性肝病临床观察

目的观察二陈汤加减联合多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)的临床疗效。方法将196例MAFLD患者按照随机数字表法分为2组,均对患者饮食方式、生活方式等进行常规指导,治疗组98例予二陈汤加减联合多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗,对照组98例予多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗,2组均治疗12周。比较2组疗效;比较2组治疗前后体质量指数(BMI)、腰围、肝功能指标、血脂指标、B超评分、症状评分变化。结果治疗组总有效率90.82%(89/98),对照组总有效率76.53%(75/98),治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。治疗组治疗第4、8、12周BMI均较本组治疗前降低(P<0.05),治疗组治疗第8、12周BMI均较本组治疗第4周降低(P<0.05)。对照组治疗前及治疗第4、8、12周BMI比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗第4、8、12周BMI改善均优于对照组(P<0.05)。2组治疗后腰围均较本组治疗前降低(P<0.05)。2组治疗第4、8、12周ALT、AST、γ-GT水平均较本组治疗前降低(P<0.05);治疗组治疗第4、8、12周ALT水平均低于对照组治疗同期(P<0.05);治疗组治疗第8、12周AST水平均低于对照组治疗同期(P<0.05)。2组治疗第4、8、12周TC、TG水平均较本组治疗前降低(P<0.05),治疗第4、8、12周HDL-C水平均较本组治疗前升高(P<0.05);治疗组治疗第4、8、12周TC、TG水平均低于对照组治疗同期(P<0.05),治疗第8、12周HDL-C水平均高于对照组治疗同期(P<0.05)。2组治疗后B超评分均较本组治疗前降低(P<0.05),且治疗组降低更明显(P<0.05)。2组治疗后各项症状评分均较本组治疗前降低(P<0.05),且治疗组降低更明显(P<0.05)。结论二陈汤加减联合多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗MAFLD,能降低BMI,缩小腰围,改善患者肝功能、血脂水平,改善B超评分和症状。

基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究当归醇提物对多囊卵巢综合征大鼠的保护作用

目的使用来曲唑联合高脂饮食建立多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠模型,探讨当归醇提物(ethanol extract of Angelicae Sinensis Radix,EEA)对PCOS大鼠的保护作用及其作用机制。方法来曲唑联合高脂饮食诱导雌性SD大鼠建立PCOS模型,并用EEA干预。阴道涂片染色、HE染色、酶联免疫吸附法(ELISA)和生化指标检测评价EEA对PCOS大鼠的治疗作用,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测EEA对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响。结果阴道涂片和HE染色结果表明,EEA改善了PCOS大鼠动情周期紊乱和卵巢组织病变,ELISA和生化指标检测结果表明EEA可以调节激素紊乱,改善血脂异常;且在模型组中Keap1蛋白和mRNA表达明显上调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显下调而经过EEA治疗后Keap1蛋白和mRNA表达明显下调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论EEA可以减轻大鼠PCOS,其机制可能是通过促进Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制氧化应激。

Parkin泛素化调节线粒体稳态在心血管疾病中的研究进展

线粒体不仅为细胞提供能量,还参与细胞钙稳态、细胞信息传递、细胞凋亡、细胞生长和分化等过程。因此,维持线粒体稳态对机体的正常生命活动至关重要。泛素化是一种蛋白质翻译后修饰方式,通过调节线粒体稳态过程进而参与细胞的多种生理病理过程。但目前还未对泛素化调节线粒体稳态的机制进行总结性阐述,特别是Parkin蛋白对心血管疾病影响的机制。该文主要通过对Parkin蛋白泛素化调节线粒体稳态的具体机制进行讨论,同时将线粒体稳态失衡对心血管疾病的影响进行综述,以期对心血管疾病的临床治疗提供潜在的治疗策略。

紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响

目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1)),制备亚急性衰老模型。Morris水迷宫评估小鼠学习记忆力;HE、DAPI染色评估肝、脑组织细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清、肝脑组织内MDA、T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT及γ-H2AX、SA-β-Gal水平。结果水迷宫实验结果表明,紫斑牡丹花粉能明显提高衰老小鼠的学习记忆力。组织染色结果表明,紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠肝脑组织细胞损伤具有保护作用,且高剂量组作用最为明显。ELISA结果显示,与模型组比较,紫斑牡丹花粉各剂量组的MDA、γ-H2AX、SA-β-Gal水平降低,T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平升高。结论紫斑牡丹花粉能改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆力,提高衰老小鼠体内抗氧化酶活性和清除自由基、脂质过氧化物的能力,保护肝脑脏器组织细胞免受氧化损伤,提示其具有潜在的延缓衰老的作用。

7,8-二羟基黄酮对脂多糖诱导心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

目的研究7,8-二羟基黄酮(7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导心肌细胞损伤中的作用及机制。方法传代培养H9c2心肌细胞系,随机分为对照组(Ctrl)、LPS组、LPS+7,8-DHF组和7,8-DHF单独处理组,给药24 h后观察细胞形态,分别采用MTT法检测细胞活力、Live/Dead染色检测细胞活死比例、Mitosox染色检测细胞线粒体氧化应激水平,Western blot技术检测Akt、核因子κB(NF-κB)p65、信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)等蛋白表达水平。结果7,8-DHF增加LPS诱导的心肌细胞活力,减少氧化应激水平和细胞死亡。7,8-DHF激活LPS诱导的心肌细胞Akt信号,抑制STAT3磷酸化水平和NF-κB p65蛋白表达。结论7,8-DHF可能通过激活Akt、抑制磷酸化STAT3和NF-κB p65信号分子减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。

NADH和NADPH代谢和功能的研究进展

近年来的研究发现,NADH和NADPH在机体生理与病理条件下都发挥重要的功能,本文综述了NADH和NADPH的合成和降解,重点阐述了NADH、NADPH和NADPH氧化酶的功能,并按炎症、心血管疾病、肿瘤、神经退行性疾病等不同病理状况分别叙述。当前对细胞内NADH(NADPH)作用和代谢的研究已成为国际性的研究热点,其相关机制的探讨将逐步深入。

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮抗肝纤维化的作用机制

目的探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响及潜在作用机制。方法采用50%CCl_(4)复制肝纤维化模型,检测血液中门冬氨酸转移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine transferase,ALT)、白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)、总蛋白(total protein,TP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、大鼠透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,ColⅢ)和Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)。HE和Masson染色观察肝脏组织病变和纤维形成情况。免疫组织化学法检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColI)、转化生长因子β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白表达水平。RT-PCR法检测肝脏组织中α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad7mRNA水平。Western blot法检测肝脏组织中TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组血清AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ水平明显升高,A/G水平明显降低,肝脏HE和Masson染色显示有大量纤维形成,说明造模成功。与模型组相比,DMDD给药组大鼠AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ含量和α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad2、Smad4mRNA及蛋白水平显著下调,A/G、Smad7水平上调。肝脏HE和Masson染色结果显示纤维增生明显减少。结论DMDD对CCl_(4)诱导的肝纤维化具有保护作用,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。

枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响

目的探索枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响。方法将60只8周龄♂SD大鼠中的50只(空白组10只)颈部皮下注射D-半乳糖125 mg·kg^(-1),持续8周建立亚急性衰老大鼠模型,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)观察衰老细胞,HE观察睾丸形态,ELISA检测血清中睾酮(testosterone,T)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平,免疫组化和Western blot检测衰老、氧化损伤和Nrf2/ARE通路相关因子表达。结果模型鉴定成功后,经枸杞籽油干预,改善了睾丸形态,下调β-gal和γH2AX表达;升高血清中SOD、GSH以及T、FSH水平及降低MDA和LH水平(P<0.05);上调睾丸组织Nrf2、GCLC、NQO1和SOD2蛋白表达水平(P<0.05)以及支持细胞中Nrf2核表达。结论枸杞籽油激活亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE信号通路表达,降低其氧化损伤,改善其激素水平。

片仔癀对情志内热诱导流感病毒易感性的作用研究

目的本研究在中医情志致病理论指导下,基于课题组前期利用小鼠拘束应激附加H1N1感染构建情志内热诱导流感病毒易感模型,评价了名优清热中成药片仔癀对流感病毒易感性的作用。方法小鼠拘束应激18 h后滴鼻感染H1N1流感病毒,记录小鼠的体征和体质量变化,统计各组小鼠的发病率。在病毒感染后的第4日取肺脏组织采用HE染色、免疫组化、Western blot、ELISA等方法检测病理情况和炎症水平;分别通过Western blot和试剂盒检测脂质过氧化终产物水平;利用氧化磷脂组学检测肺组织中各类氧化磷脂的含量。结果片仔癀能够显著降低情志应激小鼠感染流感病毒的发病率,抑制肺组织流感病毒复制与炎症因子释放,改善肺部炎症,缓解脂质过氧化终产物堆积。氧化磷脂组学结果显示,情志应激附加流感感染小鼠肺组织中氧化磷脂酰胆碱和氧化磷脂酰乙醇胺水平均明显增加,片仔癀给药能显著降低磷脂过氧化水平。结论清热中药片仔癀对情志内热诱导的流感病毒易感有良好的改善作用,作用机制可能与调节磷脂过氧化有关。

黄芪-三七药对调节脂质代谢预防主要不良心血管事件的研究进展及潜在机制探讨

脂质代谢异常是引起及加重心血管疾病,乃至引发主要不良心血管事件(MACE)的罪魁之一。大量的研究表明,调节脂质代谢的主要西药他汀类药物,在高强度、大剂量、不合理应用的情况下,常会引起肝肾功能损害、肌毒性等一系列不良后果,其已成为近年来亟待解决的心血管领域问题。近年来,中医药在调节脂质代谢方面的研究愈来愈多,如稳心颗粒调节心肌内脂肪化生预防心肌梗死后室性心动过速发生等MACE。本文就中医药调节脂质代谢的原理和稳心颗粒中主要组分黄芪、三七活性成分及其含两者的中成药调节脂质代谢预防MACE的研究进展做一综述,并运用网络药理学探究稳心颗粒中黄芪-三七药对通过调节脂质代谢预防MACE的潜在分子作用机制,为将来进一步探索研究提供参考。

Nrf2-ARE信号通路在机体氧化应激损伤防护中的研究进展

核转录因子Nrf2是细胞抗氧化应激体系中的关键转录因子,Nrf2核转位并且结合核酸序列上的抗氧化反应元件ARE是活化Nrf2-ARE信号通路的关键环节。而Nrf2-ARE信号通路的活化,能够启动下游的Ⅱ相解毒酶、抗氧化酶系等的转录,从而减轻活性氧和亲电子物质引起的细胞损伤,使细胞处于稳定状态,维持机体氧化还原动态平衡。Nrf2-ARE信号通路在细胞氧化应激损伤防护中发挥重要作用。本文就Nrf2-ARE信号通路对机体氧化应激损伤防护的研究进展进行综述。

耐药口腔鳞癌Tca8113胞外代谢产物的代谢组学分析

目的探讨口腔鳞癌Tca8113细胞在产生耐药性后胞外代谢产物的变化,寻找差异代谢物。方法制备胞外代谢产物样本,运用氢谱核磁共振(1H-NMR)获取口腔鳞癌Tca8113细胞和耐药Tca8113/CBP细胞的胞外代谢物图谱,偏最小二乘判别分析(PLS-DA)得出对区分2组细胞贡献较大的差异性变量,将同时满足VIP>1.0和单维统计P<0.05的代谢物确定为最终的差异代谢物。结果基于氢谱核磁共振的代谢组学方法可以区分Tca8113和Tca8113/CBP;最终的差异性代谢物有醋酸盐、牛磺酸、丝氨酸、葡萄糖和亮氨酸,它们涉及到了蛋白质代谢、糖代谢和三羧酸循环。结论应用代谢组学方法成功找到了耐药Tca8113细胞的差异代谢物。

化浊解毒抑溃煎对溃疡性结肠炎大鼠Th1/Th2平衡、应激反应及肠黏膜的影响

目的探讨化浊解毒抑溃煎对溃疡性结肠炎大鼠Th1/Th2平衡、应激反应及肠黏膜的影响。方法SPF级别Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、化浊解毒抑溃煎低、中、高剂量(1.25、2.5、5 kg·L^(-1))组及阳性药美沙拉嗪(0.05 kg·L^(-1))组,共6组。除对照组外,其余各组大鼠均建立溃疡性结肠炎动物模型,分别灌胃给予相应药物。ELISA法检测TNF-α、IL-8、IL-13、IL-10、IFN-γ及IL-4水平;相关试剂盒检测SOD、MDA及GSH-Px水平;HE染色观察肠道组织病理形态并计算评分;TUNEL法检测肠道上皮细胞凋亡率;免疫印迹检测肠组织NF-B、TLR4、MyD88、Bcl-2及Bax蛋白水平。结果与模型组相比,化浊解毒抑溃煎组TNF-α、IL-8、IL-13、MDA、IFN-γ、病理评分、肠上皮细胞凋亡率、NF-B、TLR4、MyD88及Bax水平降低(P<0.05),IL-10、IL-4、SOD、GSH-Px、Bcl-2水平升高(P<0.05)。结论化浊解毒抑溃煎可明显抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激及炎症反应,促使Th1/Th2平衡,并发挥肠黏膜保护作用,其作用机制与抑制NF-B/TLR4/MyD88信号通路相关。

阿尔茨海默病和帕金森病患者血清代谢组学研究

目的研究阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清代谢物的变化。方法收集正常人和临床确诊的AD和PD患者的血清,采集各组血清样品的NMR1H谱,运用主成分分析法(principalcomponentanalysis,PCA)和正交最小偏二乘判别法(orthogonal partial leastsquares-discriminant analysis,OPLS-DA)分析。结果 PCA和OPLS-DA分析显示正常人、AD患者和PD患者的血清代谢特征存在明显差异。与正常人相比,AD患者血清中异亮氨酸和乳酸含量明显升高(P<0.05),脂质、谷氨酰胺、肌酸和葡萄糖含量明显降低(P<0.05);PD患者血清中乳酸和谷氨酰胺含量升高(P<0.05,P<0.01),葡萄糖的含量降低(P<0.01);与AD患者相比,PD患者血清中脂质、乳酸和谷氨酰胺含量明显升高(P<0.05,P<0.01),而异亮氨酸、丙氨酸和葡萄糖的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 AD患者与PD患者在血清代谢水平上具有明显差异,具有明显变化的代谢物(谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、脂质、乳酸和葡萄糖)有可能作为潜在血清代谢标记物,为临床区分AD和PD提供参考。

非神经源性细胞中tau蛋白的稳定表达及磷酸化

目的建立稳定表达tau蛋白的稳转细胞系，并观察tau蛋白的过度磷酸化对稳转的非神经源性细胞形态和活性的影响。方法构建pEGFP-C1-tau真核细胞表达质粒，建立稳转和表达融合蛋白GFP-tau的293T细胞系，并用不同浓度的蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸（OA）处理细胞以诱导其过度磷酸化，通过荧光显微镜观察细胞形态的变化，用MTT法监测细胞的活性及免疫印迹法检测tau蛋白的表达及磷酸化水平。结果成功地建立了稳定表达GFP-tau蛋白的非神经源性稳转细胞系，该细胞系在稳转后3—4周，细胞生长状态良好，细胞形态和突起生长基本正常。用OA处理后，细胞突起消失、变圆，贴壁性能差，死亡的细胞数量也增多，这些变化随着OA作用时间的延长或浓度的增加更加明显；MTT法显示细胞的增殖活性明显下降；免疫印迹法提示，100nmol／L OA作用8h后，磷酸化tau水平增加。结论对于稳定表达tau蛋白的非神经源性细胞，OA可降低其增殖活性，该作用可能与OA抑制细胞内去磷酸化过程有关。

氧化应激相关的早产儿和新生儿疾病研究进展

自由基生成和抗氧化防御机制之间存在着一个平衡点。当机体的自由基产物与抗氧化能力之间失衡时,便会发生氧化应激(OS)。许多报道将OS定义为增强的活性氧或活性氮和缺乏抗氧化剂保护能力之间的不平衡。从这个角度来看,由OS引起的自由基反应所导致的损伤很可能引起多种早产儿、新生儿疾病,如脑室周围白质软化病、呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、早产儿视网膜病变、坏死性小肠结肠炎、动脉导管未闭、宫内生长迟缓等。本文回顾了OS相关的早产儿、新生儿疾病及其发生机制,也概述了相关的诊断和治疗策略,总结了未来的研究方向,以期为治疗这些疾病和发现新的诊断技术提供借鉴。

DJ-1抗氧化应激功能研究进展

氧化应激涉及多种疾病的发生和发展以及人体的衰老过程。DJ-1/PARK7基因编码DJ-1蛋白,研究发现其具有多种生物学功能,包括细胞的恶性转化、雄性精子成熟与受精、促进细胞增殖及抵抗氧化应激等。近年来DJ-1抗氧化应激功能日益受到重视。研究层次包括体外实验、体内实验和临床研究。其机制主要包括自身构型改变、分子伴侣作用、保护线粒体功能、调控抗凋亡基因和抗氧化相关基因。对DJ-1进一步研究可能为氧化应激相关性疾病的预防和治疗提供新策略。

脂多糖刺激单核细胞上清对成骨细胞Runx2/Cbfα1表达影响

目的观察牙龈卟啉菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对成骨细胞Runx2/Cbfα1表达的影响。方法收集经100 ng/ml Pg-LPS刺激的单核巨噬细胞RAW264.7培养24 h后上清,以20%的稀释浓度的分别作用于MC3T3-E1细胞1、6、12、24、48、72 h后,采用半定量RT-PCR与Western-Blot检测细胞Runx2/Cbfα1在基因与蛋白水平上的差异性表达。结果成骨细胞MC3T3-E1在20%稀释浓度的培养上清刺激后,半定量RT-PCR法发现Runx2/Cbfα1基因表达显著受抑制,且呈时间依赖性,72 h降到最低;Western-Blot检测显示细胞Runx2/Cbfαa1蛋白表达6 h后开始下降,72 h降至最低。结论 Pg-LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清能抑制小鼠成骨细胞Runx2/Cbfα1的表达且与时间呈一定相关。