麻疹疫苗免疫持久性研究──初免后24-25年追踪观察

目的 对1973年在浙江省诸暨县（市）建立的麻疹免疫持久性观察基地进行麻疹疫苗初免后24～25年的血清抗体追踪观察。方法 对各年份血清学资料完整的326名观察对象采集微量血，测定HI抗体，同时对HI＜1：2的对象用细胞中和法（SN）进行复测。结果 初免后24-25年抗体阳性率为53．66%-84．48%。不同剂量免后HI的GMT和累积阴转率差异无显著意义。不同免疫途径免疫的抗体持久性均与野病毒感染基本一致，但HI＜1：2者用SN法复测抗体阳性率可达92．23%。结论 麻疹疫苗HI抗体阳性率随免疫时间推移降低，但细胞中和抗体阳性率仍较理想。

南海七种海藻多糖的抗病毒活性初步研究

采用体外细胞培养技术,对南海7种海藻多糖体外抗单纯疱疹Ⅰ型病毒(HSV-1)和柯萨奇B组3型病毒(CoxB3)活性进行研究。7种海藻多糖均表现出良好的抗病毒活性。其中,孔石莼多糖、蜈蚣藻多糖可明显抑制HSV-1,细胞病变半数抑制浓度(IC50)均为3.90μg/mL,选择指数(SI)分别达363和296.4。孔石莼多糖、小石花菜多糖可明显抑制CoxB3,IC50分别为1.95μg/mL和7.81μg/mL,SI分别为>1 025.6和212。同时理化实验结果表明,多糖样品均为硫酸酯多糖,其硫酸基和岩藻糖的含量与多糖的抗病毒效果密切相关。

麻疹疫苗免疫持久性研究——再免后22年追踪观察

目的 研究麻疹疫苗初免后不同间隔时间再免疫的血清抗体持久性。方法 采用血凝抑制试验方法检测329名观察对象血清中的麻疹抗体滴度。结果 麻疹疫苗初免后,不同间隔时间再免疫,相同抗体水平者再免与不再免疫,血清抗体阴转率差异均无显著意义。再免是否成功与再免前的血清抗体水平密切相关,而且,再免成功与否对免疫持久性无显著影响。再免疫可使抗体阴转和低抗体水平者的滴度迅速提高。结论 初免麻疹疫苗获得成功后,再免疫仅能暂时提高群体血清抗体滴度,但对延长抗体持久性无明显作用。

检测抗人疱疹病毒6型IgG的间接免疫荧光试验的建立及其应用

目的 :建立检测血清中人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )IgG的间接免疫荧光试验 (IFA)。方法 :用HHV 6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片 ,建立检测HHV 6IgG的IFA方法 ,并用于育龄期妇女血清流行病学调查。结果 :建立的IFA具有特异性。对 116份育龄期妇女血清标本检测表明 ,HHV 6IgG的阳性率为 72 .4 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶6 1;在孕妇和正常未孕妇女之间 ,以及不同孕期的孕妇之间 ,HHV 6IgG的阳性率和GMT均无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :建立了具有特异性的IFA法 ,可用于对育龄妇女HHV

甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用

目的改进测定甲型流感病毒株和临床样本病毒滴度的空斑形成方法。方法在12孔板按照不同感染复数（MOI）感染MDCK细胞，覆盖改良营养物（含0．8％琼脂糖，0．005％DEAE，0．2％BSA，1．25μg／ml TPCK），孵育一定时间后固定染色，计算空斑形成单位。以空斑形成法和血凝滴度同时测定感染1～6d后培养液病毒滴度。结果甲1型流感病毒PR8株可形成直径1～3mm的圆形或类圆形空斑，滴度达1×10^7空斑形成单位；临床标本病毒滴度为5×10^3～1．2×10^7PFU／ml；PR8株最佳扩增感染复数为0．01，高峰期为感染后第4天。结论该方法经改进可应用于标准病毒株及临床样本的病毒定量检测和确定流感病毒最佳感染复数；低MOI感染复数易于获得高滴度流感病毒。

淋巴细胞及血浆EB病毒DNA在EBV感染相关疾病中表达的研究

目的探讨外周血淋巴细胞和血浆中EB病毒DNA(EBV DNA)在EB病毒感染相关疾病中表达的差异。方法收集112例疑似EB病毒感染相关疾病患者的全血样本,其中鼻咽癌14例,传染性单核细胞增多症(传单)16例,淋巴瘤22例,自身免疫性疾病23例,上呼吸道感染26例,肝功能异常11例,采用荧光定量PCR方法检测同一份样本淋巴细胞和血浆中EBV DNA的含量。结果检测112例患者外周血淋巴细胞和血浆中的EBV DNA,其总的阳性率分别为83.0%(93/112),27.7%(31/112),差异具有统计学意义(卡方值χ~2=60.02,P<0.01);14例鼻咽癌患者外周血淋巴细胞和血浆EBV DNA的阳性率及其含量差异均无统计学意义(χ~2=2.25,t=-1.04,均P>0.05);而传染性单核细胞增多症、淋巴瘤、自身免疫性疾病、上呼吸道感染和肝功能异常患者血浆EBV DNA阳性率及其含量均明显低于外周血淋巴细胞,差异具有统计学意义(χ~2=4.17~15.06,均P<0.05;t=3.94~10.45,均P<0.01)。结论荧光定量PCR检测非鼻咽癌患者的外周血淋巴细胞的EBV DNA可能优于检测血浆的EBV DNA;检测鼻咽癌患者外周血淋巴细胞和血浆EBV DNA无明显差异,可根据临床情况,选择合适的标本进行检测。

麻疹病毒全长cDNA构建及其感染性的研究

为发展新型疫苗和改造目前使用的麻疹病毒疫苗,以麻疹病毒疫苗株为模板,构建了具有感染性的麻疹病毒cDNA克隆。用RT-PCR分6段扩增出麻疹病毒全长基因,通过酶切、拼接构建麻疹病毒疫苗株CC-47的全长正链cDNA序列,并精确地置于T7启动子控制下与丁型肝炎病毒核酶序列之前。克隆麻疹病毒CC-47株蛋白N、P、L编码区质粒并置于T7启动子控制下,用4个质粒共转染哺乳动物细胞,在表达T7RNA聚合酶的重组痘苗病毒VTF7-3的作用下进行病毒拯救。经免疫荧光、PCR等方法检测证实,获得了具有感染性的麻疹病毒。所拯救的病毒在哺乳动物细胞连续传3代后,仍能检出病毒抗原和核酸。

抗生素17997抗病毒作用机制的研究

报道由我国云南省土壤中分离的一株放线菌所产生的广谱抗病毒抗生素１７９９７［１］的细胞毒性及作用机制研究。用氚标记物参入法测定抗生素１７９９７对ＶＥＲＯ细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质合成的ＴＤ５０（５０％毒性剂量）分别为７６．８±２．２、１３０．９±１９．５及１４４．２±１７．１μｍｏｌ／Ｌ。抗生素１７９９７无毒浓度不影响单疱病毒Ⅰ型的吸附及释放；对病毒无直接灭活作用；感染后６ｈ给药无抑制病毒作用；对病毒逆转录酶及ＤＮＡ聚合酶均无抑制作用。抗生素１７９９７可能作用于病毒复制早期阶段。

麻疹-流行性腮腺炎-风疹联合疫苗中病毒滴定方法的改进

目的 为改进ＭＭＲ（麻疹－腮腺炎－风疹）和ＭＲｕ（麻疹－风疹）联合疫苗中麻疹病毒的滴定方法。方 法 在滴定ＭＭＲ中麻疹病毒时，将中和腮腺炎、风疹病毒改为只中和腮腺炎病毒；在滴定ＭＲ中的麻疹病毒时，不 中和风疹病毒，直接滴定。结果 中和与不中和风疹病毒对滴定联合疫苗中的麻疹病毒滴度无明显影响。结论 简化了滴定方法，并解决了无合用的风疹抗体的困难。

Epstein—Barr病毒反义LMP1基因对鼻咽癌细胞CNE2株生长的抑制

将０．６ｋｂＬＭＰ１前段基因反向插入逆转录病毒载体（ｐＺＩＰ）中，构建成ｐＺＩＰ－反义ＬＭＰ１载体，再转入ＰＡ３１７包装细胞中，用Ｇ４１８筛选抗性克隆，获得产生１．７×１０５（ＣＦＵ／ｍｌ）反义ＬＭＰ１病毒的ＰＡ３１７细胞克隆。收集反义ＬＭＰ１病毒液，用于感染鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ２）。杂交实验证实ｐＺＩＰ－反义ＬＭＰ１载体基因整合到ＣＮＥ２细胞的ＤＮＡ中，并且有载体基因ＲＮＡ的表达。观察反义ＬＭＰ１基因对ＣＮＥ２细胞生长的影响，发现反义ＬＭＰ１基因可降低细胞生长速度，减弱ＣＮＥ２细胞在裸鼠体内的致肿瘤性。原位杂交证实，肿瘤组织中持续存在着反义ＬＭＰ１基因。以上结果说明，ＥＢＶ反义ＬＭＰ１基因对ＣＮＥ２细胞的生长有明显的抑制作用。

急性疱疹病毒性脑炎的治疗

应用阿糖胞苷、无环岛苷和丙氧鸟苷分别治疗急性疱疹病毒性脑炎32例、36例及20例，好转率分别为56．2％、80．5％、80％．其中丙氧鸟苷对巨细胞病毒性脑炎疗效较好。阿糖胞苷的副作用较多，特别是对骨髓有明显抑制作用，无环岛苷和丙氧鸟苷的副作用较少。

腮腺淋巴上皮瘤样癌与EB病毒感染的关系(英文)

目的：研究ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ 病毒（ＥＢＶ）与腮腺淋巴上皮瘤样癌（ｌｙｍｐｈｏｅｐｉｔｈｅｌｉｏｍａｌｉｋｅｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＬＥＬＣ）的关系，并检测瘤细胞内ＥＢＶ 基因编码产物。方法：作者收集了中山医科大学所属病理科１９８６ 年１ 月至１９９５ 年１２ 月间３２ 例腮腺ＬＥＬＣｓ．。３２ 例ＬＥＬＣ石蜡包埋标本再次切片。采用免疫组化和原位核酸杂交法检测瘤细胞内ＥＢＶ 基因表达产物。结果：（１） 在１２５例腮腺癌中有３２ 例淋巴上皮瘤样癌，占总病例的２５－６％ （３２／１２５） 。（２）所有３２ 例腮腺ＬＥＬＣ组织中均有数量不等的ＥＢＮＡ１ 和ＥＢＥＲｓ 阳性瘤细胞。（３）２７ 例ＬＥＬＣ 组织中部分瘤细胞表达ＬＭＰ１ 。（４） 所有标本中均未见ＺＥＢＲＡ 阳性细胞。（５）３２例腮腺ＬＥＬＣ组织中ＥＡＤ、ＶＣＡ和ＭＡ的阳性表达率分别为７１－９ ％（２３／３２） 、６８－８ ％（２２／３２） 和１２－５％ （４／３２） 。结论：（１） 在鼻咽癌高发的广州地区，腮腺ＬＥＬＣ的发病率也较高。（２）腮腺ＬＥＬＣ 组织中均有ＥＢ病毒感染。（３）ＥＢ病毒在腮腺ＬＥＬＣ的感染主要为潜伏Ⅱ型，即表达ＥＢＮＡ１ 、ＥＢＥＲｓ

gD基因在生殖器疱疹PCR诊断中的研究

依据国外已发表的疱疹病毒（ＨＳＶ）糖蛋白Ｄ基因（ｇＤ基因）的核苷酸保守区序列设计了一对引物，建立了用疱疹病毒ｇＤ基因做疱疹病毒诊断基因的ＰＣＲ方法。对４８例拟诊为疱疹病毒感染的临床标本进行病毒细胞培养和ＰＣＲ检测。结果表明，ＰＣＲ对ＨＳＶ２感染的敏感性为８４％（２０／２４），特异性为９１％（２２／２４）。经标准株及限制性内切酶的酶切证实和序列分析，表明该方法特异。

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因，插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游，构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ，使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞，在选择培养基中筛选阳性克隆，用氨甲喋呤加压扩增，建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠，２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体，表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性，可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。

家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用

报道家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－２的作用。在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少；明显地抑制ＨＳＶ－２所致细胞病变；对ＨＳＶ－２的抑制指数为３．０￣４．０；能有效地抑制ＨＳＶ－２在细胞内复制。在体实验表明该药对ＨＳＶ－２所致小鼠阴道炎有明显治疗作用。该药小鼠ｉｍ和ｉｖ的最大耐受剂量均大于５×１０＾７Ｉｕ／ｋｇ。

102例乳腺癌中的EB病毒感染

目的探讨国人乳腺癌中ＥＢ病毒ＤＮＡ（ＥＢＶ－ＤＮＡ）的检出率及ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因编码蛋白的表达情况。方法（１）在１０２例乳腺癌中用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增ＥＢＶ内部重复序列ＢａｍＨＩＷ区域，并以３４例乳腺纤维腺瘤，３例管内乳头状瘤和１０例乳腺导管上皮增生作为对照组；（２）用ＡＢＣ免疫组织化学技术检测其中７３例乳腺癌中的ＥＢＶ潜在膜蛋白（ＬＭＰ）和ＥＢＶ核抗原２（ＥＢＮＡ２）。结果（１）ＰＣＲ检测显示２９例（２８．４％）乳腺癌有ＥＢＶ－ＤＮＡ，而对照组中仅２例（４．３％）纤维腺瘤有ＥＢＶ－ＤＮＡ，两组的差异在统计学上有显著意义（Ｐ＜０．００１）；（２）免疫组化技术显示ＬＭＰ和ＥＢＮＡ２阳性率分别为１３．７％和１７．８％，且阳性物质定位于肿瘤细胞，而非肿瘤中浸润的淋巴细胞。结论ＥＢＶ感染与乳腺癌的发病可能有一定关系，明确ＥＢＶ感染在乳腺癌发病机制中的作用将有十分积极的意义。

人类疱疹病毒7型南京株的分离及初步鉴定

从１例健康成人及３名肾病患儿唾液中分离出人类疱疹病毒７型（ＨＨＶ－７）的南京地方株（ＹＹ）。并根据其在植物血凝素（ＰＨＡ）预激活的脐带血单个核细胞上生长与细胞病变效应的特点，采用电镜观察，特异性单克隆抗体ＫＲ－４间接免疫荧光染色，对ＳＵＰＴ１、ＨＳＢ－２。

EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建

目的 克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌。提取质粒 ,限制性内切酶消化 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 扩增的LMP1cDNA长度为 115 8bp ,测序结果与已知序列吻合 ,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论 成功克隆了EBV LMP1cDNA ,并构建了pET 32a LMP1原核表达载体 。

EBV-LMP1C端RNA的体外转录合成及其靶脱氧核酶的初步筛选

目的探讨用体外转录方法制备EBV-LMP1C端RNA并用该RNA对其靶脱氧核酶进行初步筛选。方法用巢式PCR方法从绒猴淋巴细胞系B95-8细胞中扩增EBV-LMP1exonc,重组入pGEM-11zf载体,并用T7RNA聚合酶对其进行体外转录制备EBV-LMP1C端RNA。根据该RNA的一、二级结构设计合成3种靶向10～23脱氧核酶,据体外剪切效率筛选高效特异的靶向脱氧核酶。结果成功地构建含EBV-LMP1exonc基因的重组质粒,用体外转录方法用1μg质粒转录出40.25μg高纯度的EBV-LMP1C端RNA,有1种脱氧核酶DZ1对该RNA体外剪切效率达89%。结论用T7RNA聚合酶体外转录方法成功制备了高纯度的EBV-LMP1C端RNA,经体外剪切筛选出高效特异的1种脱氧核酶,为进一步研究奠定了基础。