自身免疫性脑炎相关抗神经抗体的筛查与临床意义

目的分析研究自身免疫性脑炎相关抗神经抗体的筛查与临床意义。方法本次将洛阳市妇幼保健院2019年1月—2022年1月收治的62例疑似自身免疫性脑炎患者作为研究的对象,均进行自身免疫性脑炎相关抗神经抗体检测,进一步分析检测结果。结果(1)62例疑似自身免疫性脑炎患者,经自身免疫性脑炎相关抗神经抗体筛查结果显示:检出阳性6例(1.88%);其中:抗NMDAR抗体阳性3例,血清与脑脊液均为阳性;抗GABAB受体抗体阳性1例,血清与脑脊液均为阳性;抗AMPAR2抗体阳性1例,血清与脑脊液均为阳性;抗LGI1抗体阳性1例,血清阳性、脑脊液阴性。(2)治疗后与治疗前比较,6例自身免疫性小脑炎相关抗神经抗体筛查阳性患者的Rankin神经功能评分明显更低,治疗前后数据有显著统计学差异(P<0.05)。结论自身免疫性脑炎发病与小脑性共济失调密切相关,通过自身免疫性脑炎相关抗神经抗体筛查检测,能够了解患者的病情及神经功能状态,为进一步的诊疗工作提供客观、科学的依据;因此,值得借鉴及应用。

醒脑静联合利巴韦林治疗病毒性脑炎患儿的疗效

目的 探讨醒脑静联合利巴韦林治疗病毒性脑炎(VE)患儿的疗效。方法 采用随机数字表法将该院2020年12月至2023年2月收治的124例VE患儿分为参照组、研究组,每组62例。参照组在常规治疗的基础上给予利巴韦林治疗,研究组在参照组的基础上给予醒脑静治疗。比较两组临床疗效、症状消失时间、治疗前后神经因子水平[神经生长因子(NGF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑源性神经营养因子(BDNF)、髓鞘碱性蛋白(MBP)]、血浆细胞参数[辅助性T细胞17(Th17)/调节性T淋巴细胞(Treg)、Treg比例、Th17比例、微小RNA-125b(miR-125b)]、炎症因子水平[转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6]和不良反应总发生率。结果 研究组临床总有效率(91.94%)高于参照组(77.42%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组临床症状消失时间均短于参照组(P<0.05);治疗后研究组NGF、MBP、NSE水平低于参照组,BDNF水平高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组Th17比例、miR-125b水平和Th17/Treg低于参照组,Treg比例高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组TNF-α、IL-6、IL-17水平低于参照组,TGF-β水平高于参照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组不良反应总发生率相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 醒脑静联合利巴韦林治疗VE的效果显著,能改善患儿神经功能及临床症状,减轻炎症反应,提高免疫功能,用药较安全可靠。

抗甘氨酸受体抗体阳性的伴强直及肌阵挛的进行性脑脊髓炎一例并文献复习

僵人综合征(stiff-person syndrome,SPS)是一种病因未明、以波动性肌肉僵硬和痛性痉挛为核心症状的自身免疫性中枢神经系统罕见病,临床分型包括经典SPS、僵肢综合征、伴强直及肌阵挛的进行性脑脊髓炎(progressive encephalomyelitis with rigidity and myoclonus,PERM)、重叠综合征[1]。

小鼠流行性乙型脑炎疾病进展中反应性星形胶质细胞活化模式的变化及干预

目的 明确星形胶质细胞活化模式与流行性乙型脑炎疾病进展的关系。方法 首先通过足垫注射乙型脑炎病毒(JEV)构建流行性乙型脑炎小鼠模型,采用免疫荧光技术(IFA)检测JEV非结构蛋白3(NS3)在小鼠全脑的表达情况;进一步利用IFA、 RNA测序技术(RNA-seq)、实时定量PCR明确流行性乙型脑炎发病不同阶段星形胶质细胞活化模式的变化;最后,通过侧脑室注射鸢尾素(irisin)调控补体C3阳性A1型星形胶质细胞、 S100钙结合蛋白A10(S100A10)阳性的A2型星形胶质细胞活化比例,探索其是否可改善乙型脑炎模型小鼠的体质量、行为学评分及脑组织损伤情况。结果 流行性乙型脑炎模型组小鼠的M1、 M2等运动皮层脑区和海马组织中NS3蛋白显著增加。上述区域胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞的数目和体积较对照组也显著增加,其中JEV感染后与A1/A2型星形胶质细胞活化相关的基因均显著升高。侧脑室或者腹腔注射irisin虽不能改善流行性乙型脑炎预后,但可在一定程度上抑制A1型星形胶质细胞活化,减轻神经炎症。结论 JEV主要感染小鼠的运动皮质和海马神经元,且星形胶质细胞异常激活导致神经炎症损伤。Irisin可能抑制A1型星形胶质细胞激活,减轻JEV感染后的神经炎症。

大麻素受体激动剂花生四烯酰氯乙胺(ACEA)通过抑制炎症反应改善小鼠脓毒症相关性脑病

目的 探讨大麻素受体激动剂花生四烯酰氯乙胺(ACEA)对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠认知功能的影响。方法C57BL/6小鼠随机分成人工脑脊液(ACSF)组和脂多糖(LPS)组,通过采用LPS侧脑室注射构建SAE模型,小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)和体质量变化判断小鼠的基本情况;行为学范式评估小鼠运动能力(旷场实验)、认知功能(情景前置性条件恐惧实验、 Y迷宫实验)。评估ACEA干预效果中,小鼠随机分为ACSF组、 ACEA干预的ACSF组、 LPS组和ACEA干预的LPS组,ACEA干预组给与1.5 mg/kg ACEA,实时定量PCR检测小鼠海马组织白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测小鼠海马组织IL-6、 TNF-α的蛋白表达水平;尼氏染色检测小鼠海马CA1区神经元损伤情况;行为学范式评估小鼠运动能力(旷场实验)、认知功能(情景前置性条件恐惧实验、 Y迷宫实验)。结果 侧脑室注射LPS 3 d后,小鼠存在显著认知功能障碍,证实SAE造模成功。与ACSF组相比,LPS组海马炎症因子IL-6、 TNF-α及IL-1β mRNA表达水平显著升高,IL-6、 TNF-α蛋白表达水平显著增加,CA1区可见神经元尼氏体减少,小鼠存在显著认知功能障碍;与LPS组相比,ACEA干预组IL-6、 TNF-α及IL-1β mRNA表达水平显著降低,IL-6、 TNF-α蛋白表达水平显著减少,神经元尼氏小体增多,小鼠认知功能改善。结论 ACEA通过抑制IL-6、 TNF-α炎症因子表达水平改善SAE小鼠认知功能。

森林脑炎病毒包膜糖蛋白胞外区的表达、纯化及免疫原性分析

目的构建森林脑炎病毒(TBEV)森张株包膜糖蛋白E胞外区的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中诱导表达、纯化及初步分析其免疫原性。方法从GenBank下载TBEV森张株E蛋白胞外区基因序列(Eecto),密码子优化后交由公司合成,通过双酶切的方法克隆至pET28a载体,获得重组质粒pET28a-TBEV-Eecto。经过酶切和测序分析后,将正确的重组质粒转化BL21(DE3)感受态,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫化半乳糖苷诱导表达后通过SDS-PAGE分析重组E蛋白胞外区的表达形式。纯化的包涵体用6 mol/L盐酸胍进行变性溶解,用含有非表面活性剂NDSB-201的缓冲液进行复性,之后超滤浓缩、镍柱亲和层析纯化及蛋白印迹鉴定。将获得的纯化TBEV-Eecto蛋白免疫BALB/c小鼠,利用免疫血清进行蛋白印迹、免疫荧光实验分析其特异性。结果重组质粒pET28a-TBEV-Eecto经酶切后的片段与预期大小一致,测序分析正确。重组蛋白TBEV-Eecto主要以包涵体形式表达,经过盐酸胍变性溶解、NDSB-201复性、超滤及镍柱亲和纯化后获得纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blotting分析均显示其与预期大小一致。纯化的TBEV-Eecto蛋白免疫小鼠血清可特异性识别真核表达的TBEV-PrME蛋白,提示TBEV-Eecto具有良好的免疫原性。结论成功构建TBEV森张株E蛋白胞外区的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达。纯化的TBEV-Eecto蛋白具有较好的免疫原性,为森林脑炎的血清学诊断方法和亚单位疫苗研制提供了基础。

乙型脑炎病毒NS1′蛋白表达对小鼠毒力的影响

为探究乙型脑炎病毒NS1′蛋白表达对小鼠神经毒力和神经侵袭力的影响,以乙脑病毒疫苗株SA14-14-2为模板,对NS2A基因进行A66G定点突变,并构建全长感染性克隆。体外转录后,将病毒RNA导入BHK21细胞,获得突变病毒SA14-14-2(A66G)。同样以乙脑病毒野毒株SA14为模板,采用相同方法构建并获得突变病毒SA14(G66A)。经测序和间接免疫荧光鉴定,证明突变病毒构建成功。Western blot检测发现疫苗株SA14-14-2和SA14(G66A)不表达NS1′蛋白,而野毒株SA14和SA14-14-2(A66G)能表达NS1′蛋白。生长曲线显示突变病毒的生长特性无明显改变。蚀斑实验发现SA14(G66A)的蚀斑较SA14更小,SA14-14-2(A66G)的蚀斑较SA14-14-2更大。细胞增殖活性实验显示NS1′蛋白表达对BHK21细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01)。疫苗株SA14-14-2与SA14-14-2(A66G)对1周龄小鼠脑内接种的LD50分别为297.9 PFU(0.02 mL)和143.4 PFU(0.02 mL),野毒株SA14和SA14(G66A)对3周龄小鼠脑内接种的LD50分别为0.8 PFU(0.03 mL)和2.3 PFU(0.03 mL)。疫苗株SA14-14-2与SA14-14-2(A66G)对2周龄小鼠腹腔接种的LD50分别为>5.65×10^(6)PFU(0.5 mL)和>1.46×10^(6)PFU(0.5 mL)。野毒株SA14和SA14(G66A)对3周龄小鼠腹腔接种的LD50分别为1.3×10^(3)PFU(0.5 mL)和1.2×10^(4)PFU(0.5 mL)。结果表明,乙脑病毒NS2A中第66位碱基是影响NS1′蛋白表达与否的关键位点,且NS1′蛋白表达能提高病毒对小鼠的神经毒力与神经侵袭力,其中对侵袭力的影响更为显著。

自身免疫性脑炎的治疗进展

自身免疫性脑炎(AE)泛指一类由自身免疫机制介导的,针对中枢神经系统自身抗原产生反应所导致的脑炎,其特征是针对神经元表面或细胞内蛋白的致病性自身抗体。AE的抗体类型较多,临床表现各异。AE的治疗方案,从广泛的免疫抑制剂到特定靶向治疗,均使患者获得较好的预后。常见的一线治疗药物主要包括糖皮质激素、血浆交换和静脉注射免疫球蛋白。对于难治性患者,可以考虑使用利妥昔单抗或环磷酰胺等二线药物以及其他免疫治疗药物。目前还没有明确的AE治疗指南,早期及时恰当的免疫药物治疗对患者病情改善及预后恢复至关重要。

中国流行性乙型脑炎病毒分子生物学特性研究

为了从分子水平了解中国流行性乙型脑炎(乙脑)病毒与国外分离株的差异,对1949年以来在中国乙脑主要流行地区分离的19株乙脑病毒的PrM C区及E蛋白基因区的核苷酸序列进行了对比研究,以期了解不同时间不同地区在中国流行的乙脑病毒的分子差异。结果显示:病毒生物学初步鉴定显示,病毒感染BHK细胞后56h所有细胞均发生病变,约50%以上细胞脱落(CPE );3日龄乳鼠接种病毒72h之内死亡;所有病毒均与乙脑病毒(A2株)抗血清发生阳性反应,但反应强度不同,提示所有病毒均为乙脑病毒。病毒PrM C(456～695)区核苷酸序列与各个国家及地区、各个基因型以及各个年代的73株乙脑病毒相应序列,用Woan RuChen建立的方法进行基因分型分析,结果显示,所有19株中国分离的病毒均属于基因型Ⅲ型,与国外相关文献所报道的乙型脑炎病毒中国分离株的基因型相符。以乙型脑炎病毒疫苗株P3株为标准,对各病毒E蛋白500个氨基酸序列进行分析。各毒株核苷酸差异在0和4 2%之间,氨基酸差异在0和4 0%之间。所有核苷酸差异均为碱基的替换,无论核苷酸或氨基酸均无插入或丢失。大多数核苷酸变异在氨基酸编码的第三位,属于沉默突变,不引起氨基酸变化。18株病毒E蛋白活性结构域与疫苗株P3株相比共有247个氨基酸的差异,平均每株病毒有12 35个氨基酸的差异,?

云南省边境地区蚊虫自然感染乙型脑炎病毒的研究

目的 :阐明蚊虫自然感染乙型脑炎病毒情况 ,评价各蚊种的媒介地位。方法 :夜间在农村人房、畜圈 ,白天在野外竹林捕蚊 ,用细胞法和小白鼠法分离病毒。结果 :在云南省 15个边境县市采获 6属 45种 92 748只雌蚊 ,从 13种蚊虫体内分离出乙型脑炎病毒 42株。其中从三带喙库蚊分离到 15株 ,霜背库蚊 5株 ,伪杂鳞库蚊、中华按蚊各 4株 ,刺扰伊蚊 3株 ,棕头库蚊、白纹伊蚊、窄翅伊蚊各 2株 ,雪背库蚊、环带库蚊、迷走按蚊、阿萨姆伊蚊和常型曼蚊各 1株。结论 :三带喙库蚊是该地区本病的主要传播媒介 ,霜背库蚊、伪杂鳞库蚊、刺扰伊蚊和白纹伊蚊亦为重要媒介。具有夜间以库蚊为主 ,白天以伊蚊为主的传播特点。

流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

儿童自身免疫性脑炎研究进展

近年来,自身免疫性脑炎在中枢免疫性疾病中越来越受到重视,20世纪60年代,一些学者发现边缘受损患者通常合并其他系统肿瘤性病变,随着进一步深入研究,副肿瘤性、非副肿瘤性、感染性类型也被发现。关于自身免疫性脑炎的发病机制不明,临床上其最常见的分类依据是根据不同的抗受体类型进行分类,其临床表现根据分类不同而表现不一。对于不同临床症状,自身免疫性脑炎的治疗方案包括对症治疗及免疫治疗等。本文将通过对以上方面进行综述,以期为临床医生对此病的认识提供一定参考。

从云南省无名热病人和脑炎病人分离到新环状病毒

从云南省西双版纳傣族自治州3家医院采集到发热病人血清106份,脑炎病人脑脊液5份,从中分离到27株病毒。经血清学鉴定,该类病毒与披膜病毒科、黄病毒科、布尼亚病毒科某些病毒的免疫腹水,以及呼肠孤病毒科环病毒属M14、YN187病毒的免疫腹水,都不发生反应。电镜观察病毒为球形无囊膜颗粒,直径65.49±3.11nm,其核衣壳直径为51.79±2.01nm。在感染细胞中常见到大量颗粒状包涵体。负染中可见排列整齐的壳粒结构,显示了典型的环状病毒形态特征。该类病毒对酸和热敏感,抵抗5—Id?和乙醚。27株病毒的基因组均由12条RNA片段组成,其带形均相同,分子量约为0.25×10~6～2.5×10~6道尔顿。该类病毒的带形与文献报道的任何一种环状病毒的RNA带形都不同。病人双份血清中对该环状病毒特异IgM抗体滴度显示4倍以上升高。对该类病毒在分类学上的地位和对无名热和脑炎的病原学意义进行了讨论,目前暂定名为BANNA病毒。

乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1基因片段的克隆、测序与表达

以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+) EcoRI/SalI位点 ,构建了重组原核表达质粒 pET 2 8a(+) NS1。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导获得高效表达 ,产物经SDS PAGE电泳结果显示 ,表达产物分子量约为 45kD。

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA_(14)-14-2E基因的稳定性

分别对SA14 - 14- 2 (PHK8代 )疫苗株及其原野毒株SA14 和另 2个疫苗传代株 [SA14 - 14- 2 (PHK17代 )和SA14 - 14- 2 (鼠脑 1代 ) ]的E区基因进行了序列测定。结果表明 ,乙脑病毒减毒活疫苗SA14 - 14- 2在PHK细胞上连传至 17代时 ,发现 2个氨基酸突变 (E - 331、E - 398) ,但不是回复突变。虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传 1代后发生E - 10 7个氨基酸回复 ,但与野毒株毒力相比仍然相差很大 ,无毒力返祖现象。在疫苗的实际质控工作中 ,对上述与毒力相关的基因进行监测 ,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平 ,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段。

云南蝙蝠血液乙型脑炎病毒分离物的研究

目的 :进一步探索蝙蝠在乙脑病毒贮存宿主方面的作用。方法 :病毒分离、微量血凝抑制试验 (HI)、间接免疫荧光试验 (IFAT)、电镜和病理检查。结果 :从蝙蝠血中分离到两株乙脑病毒。结论 :蝙蝠在乙脑病毒在自然界中的贮存和扩散方面具有重要的流行病学意义。

1996年延边地区无菌性脑膜脑炎病因病毒的分离及初步鉴定

吉林省延边地区１９９６年６月发生无菌性脑膜脑炎流行，在全地区２１６万人口中，发病人数约５～６千人，死亡２人，为历史上所罕见。从病人脑脊液和粪便标本中分离到多株病毒，分离率较高（分别达到５２．４％和６６．７％）。用ＷＨＯ提供的ＲＩＶＭ肠道病毒组合血清进行中和定型，不能确定型别。ＲＴ－ＰＣＲ结果表明为肠道病毒。病人早期血清特异性ＩｇＭ抗体阳性率７２．０％，证明所分离的病毒为此次无菌性脑膜脑炎暴发流行的病因。此病毒为肠道病毒，有可能是肠道病毒的一个新型别或变异株。

乙型脑炎减毒活疫苗病毒SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种后的生物学和分子生物学特性

目的研究乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后的生物学和分子生物学特性,进一步评价该株病毒的稳定性和安全性。方法将乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株胸腔接种的三带喙库蚊研磨,离心收集上清液,接种于BHK21细胞中培养,得到SA14-14-2M1C1病毒液。应用空斑形成单位法测定病毒滴度,再进行小鼠脑内毒力测定和乳鼠脑内回传后毒力返祖试验。提取病毒RNA,RT-PCR扩增E基因片段,测序后与SA14-14-2原株的E基因序列进行比较分析。结果SA14-14-2M1C1病毒液滴度达1.4×107PFU/ml,小鼠脑内毒力测定结果无小鼠发病死亡,乳鼠脑内传代对小鼠的脑内致病力很低,毒力为1.9LgLD50/0.03ml,小于《中国药典》规定的3.0LgLD50,且皮下注射未见小鼠发病死亡。扩增出的E基因片段序列与原株相比较,只有E区1340位一个核苷酸的变化A→G,导致E447位1个氨基酸的改变D(Asp)→G(Gly),此差异位点不是SA14-14-2株发生基因变异的8个位点之一。结论SA14-14-2疫苗株病毒经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后,其生物学(弱毒)特性和基因特征(E区8个氨基酸突变)未发生改变,进一步证实了该病毒的稳定性。

辽宁省乙型脑炎病毒分离及进化树分析

目的分离鉴定2007年辽宁省蚊虫携带流行型乙型脑炎(乙脑)病毒及基因型别。方法用细胞培养方法分离病毒,对致金黄色地鼠肾细胞系(BHK-21)细胞病变(CPE)的病毒进行逆转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)检测;扩增的目标片段进行序列测定;用Mega3.1软件、以邻位相连法构建进化树。结果共分离到22株病毒,RT-PCR检测结果表明,均为乙型脑炎病毒;随机选择其中3株病毒的基因序列进行基因型鉴定分析,均为Ⅰ型乙型脑炎病毒。3株病毒E基因编码结构域(Domain)区段分析结果显示,其核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%和100%;与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有12个氨基酸位点变异。结论辽宁省蚊虫标本中分离的病毒均为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒,其中E基因所编码Domain区E-327(S→T)位点发生的变异,提示在辽宁省首次分离到乙型脑炎病毒变异株。

森林脑炎纯化疫苗的研究

目的 制备森林脑炎纯化疫苗。方法 将森林脑炎病毒感染地鼠肾单层细胞，收获病毒液，经超滤浓缩、柱层析纯化病毒后配制而成。结果 疫苗兔疫保护力指数均≥1 .0 ×106，杂蛋白去除率≥99％，小牛血清蛋白去除率＞99％，所有检测项目全部合格。结论 该纯化工艺制备的森林脑炎纯化疫苗抗原含量高，热稳定性好，免疫原性强，各项检测结果均符合2000年版《中国生物制品规程》标准。